動物行為學研究精選(九篇)
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第1篇：動物行為學研究范文
所謂數(shù)學模型，是指由字母、數(shù)字和其他數(shù)學符號構(gòu)成的等式或不等式，或用圖表、圖像、框圖、數(shù)理邏輯等來描述系統(tǒng)的特征及其內(nèi)部或外部聯(lián)系的模型。在教學實踐中，數(shù)學模型的建構(gòu)過程可以滲透于數(shù)與代數(shù)、空間與圖形等教學內(nèi)容中，尤其是，在數(shù)學綜合運用中，模型建構(gòu)有著至關(guān)重要的作用。同時，數(shù)學模型的建構(gòu)總是與數(shù)學探究活動聯(lián)系在一起的，如何引導學生構(gòu)建基于數(shù)學活動經(jīng)驗的數(shù)學模型，值得我們進行深入的思考。本文以“物體浸沒水中的體積問題”的教學為例，談一談自己的教學實踐與思考。
一、組織探究活動，獲得數(shù)學活動經(jīng)驗
史寧中教授認為，“基本活動經(jīng)驗是指學生直接或間接經(jīng)歷了活動過程而獲得的經(jīng)驗”。在教學“長方體與正方體體積”后，筆者發(fā)現(xiàn)，雖然學生掌握了求長方體、正方體體積的方法，但是對體積公式的綜合運用（如物體浸沒水中的問題），則顯得有些力不從心，例如：一個長方體玻璃魚缸，長25厘米，寬16厘米，高20厘米，在魚缸中放入一個棱長10厘米的正方體鐵塊，使它全部浸沒在水中，水面會上升多少厘米？學生普遍感覺解決此題有困難，因為在這一問題情境中，正方體浸沒水中時存在一個動態(tài)變化的過程（即水面上升，總體積的變化），學生由于缺乏相應(yīng)的數(shù)學活動經(jīng)驗，難以把握情境中的各部分數(shù)量間的關(guān)系。
要讓學生真正地理解和掌握物體浸沒水中的相關(guān)問題，就必須讓學生親歷這一變化過程，為此，教師可引導學生開展如下探究活動：
1．給每個小組準備一個長方體容器，一個雞蛋，引導學生思考，想要測得雞蛋的體積，可以怎么做？
2．學生分小組進行探究實驗，實驗結(jié)束后進行交流匯報。
在探究活動中，學生通過參與數(shù)學活動，經(jīng)歷“做數(shù)學”的過程和思考的過程，從而將探究“物體浸沒水中”問題的經(jīng)歷變成了數(shù)學活動的經(jīng)驗。
二、引領(lǐng)數(shù)學思考，提煉構(gòu)建數(shù)學模型
《數(shù)學課程標準》指出，教師要引導學生從已有的經(jīng)驗出發(fā)，讓學生親身經(jīng)歷將實際問題抽象成數(shù)學模型并進行解釋與應(yīng)用的過程。
在“物體浸沒水中的體積問題”的教學中，教師可以引導學生借助圖形展開觀察、分析、概括、提煉等一系列數(shù)學思考活動：1．將雞蛋浸沒于水中后，雞蛋的體積相當于哪一部分水的體積?2．上升部分水的體積與長方體容器有什么聯(lián)系，你怎樣計算上升水的體積？3．如果放入的物體是一個馬鈴薯或其他不規(guī)則物體，你能用一個公式表示如何計算它的體積嗎?4．除了將雞蛋浸沒水中，求上升的水的體積外，我們還可以怎樣測得雞蛋的體積？
通過思考與交流，學生不僅發(fā)現(xiàn)雞蛋體積的測量方法，還在分析思考中發(fā)現(xiàn)了這一方法的普遍適用性，抽象出相應(yīng)的數(shù)學模型V雞蛋=V上升。而“還可以怎樣測得雞蛋的體積”則引導學生實現(xiàn)對數(shù)學模型的拓展。
三、變換問題情境，把握模型內(nèi)在結(jié)構(gòu)
事實上，學生通過對某一個問題情境活動經(jīng)驗的分析概括，初步地建構(gòu)數(shù)學模型，這樣的模型顯然有一定的局限性。 如在“物體浸沒水中的體積問題”的教學中，教師可設(shè)計如下兩個變式問題，讓學生繼續(xù)探究，進而逐步把握數(shù)學模型的內(nèi)在結(jié)構(gòu)：
1．在一個棱長10厘米的正方體容器中，放入一個長5厘米、寬4厘米的長方體鐵塊，使其完全浸沒后，水面上升0.6厘米，求長方體鐵塊的高。
2.-個長方體玻璃容器，從里面量，長和寬均為2分米，高是3.5分米。向容器中倒入6升的水，再將一個蘋果浸沒水中。這時量得水深是1.55分米。這個蘋果的體積是多少？
在上述兩個變式的問題情境中，學生發(fā)現(xiàn)，無論情境中的條件怎樣變化，鐵塊或蘋果的體積始終等于上升部分水的體積。這樣，學生也就在變式訓練中把握了數(shù)學模型的內(nèi)在結(jié)構(gòu)。
第2篇：動物行為學研究范文
摘 要:目的:以慢性焦慮應(yīng)激大鼠為載體,探討其焦慮狀態(tài)及行為學的變化,旨在探索能較好模擬廣泛性焦慮障礙的動物模型。方法:采用慢性情緒應(yīng)激的方法建立焦慮大鼠模型,以國際公認的高架十字迷宮試驗對其行為學進行評價。結(jié)果:應(yīng)激后大鼠處于易激惹的狀態(tài),表現(xiàn)出頻繁的修飾和攻擊行為,經(jīng)高架十字迷宮測試發(fā)現(xiàn)大鼠較少進入并停留于開放臂中,傾向于探究封閉臂,且在封閉臂的停留時間延長。結(jié)論:不確定性空瓶刺激作為一種慢性心理應(yīng)激模型,從病因?qū)W上較好模擬了廣泛性焦慮障礙的發(fā)病狀態(tài)和行為學表現(xiàn)。
關(guān)鍵詞:焦慮模型;行為學;慢性情緒應(yīng)激;高架十字迷宮
中圖分類號:R332 文獻標識碼:A 文章編號:1673-7717(2010)04-0711-03
The Changes in Behaviour of Rats with Chronic Stress-induced Anxiety and
Behavioural Evaluation of The Elevated Plus-maze Test System
LI Ning 1,TANG Qisheng2,ZHAO Ruizhen2 , GOU Shengle1
(1. Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029,China;
2. The Third Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029,China)
Abstract:Objective:To study the changes in behaviour of rats model with chronic stress-induced anxiety and to explore a appropriate animal model for GAD. Methods:Rats model was established by using chronic emotional stress-induced anxiety method, then researchers observed behavioural changes of model rats and evaluation of elevated plus-maze test system. Results:Rats resceiving emotional stress was in a state of great agitation,who manifested obvious grooming and attacking behaviour.Fewer rats entered and remained in the open arm,and tended to explore and stay in the closed arm.Conclusion:Unpredictable bottle stimulation as a methd of chronic emotional stress better simulated the incidence and manifestation of generalized anxiety disorder from etiology.
Key words:anxiety model; behaviour;chronic emotional stress; elevated plusmaze
收稿日期:2009-11-21
基金項目:國家自然科學基金資助項目(30772804)
作者簡介:李寧(1980-),女,河南許昌人,博士研究生,研究方向:中醫(yī)藥防治腦血管疾病。
通訊作者:唐啟盛(1956-),男,黑龍江人,教授,博士研究生導師,研究方向:中醫(yī)藥防治腦血管。
廣泛性焦慮障礙(generalized anxiety disorder,GAD)是以過度和持續(xù)性焦慮或反復(fù)發(fā)作的驚恐不安為主要特征的神經(jīng)癥,常伴有植物神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和運動性緊張。隨著臨床和基礎(chǔ)實驗研究的不斷深入與完善,人們對于本病也有了較為系統(tǒng)而全面的認識?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明,其發(fā)病涉及生物、心理、社會等諸多方面的因素,但確切的病因和發(fā)病機制至今尚未徹底闡明。焦慮動物模型作為基礎(chǔ)實驗研究的平臺與載體,在探索焦慮障礙的病因、發(fā)病機制以及新藥研發(fā)等方面發(fā)揮著重要作用。因此,選擇公認、穩(wěn)定、重復(fù)性好、能反映復(fù)雜發(fā)病狀態(tài)的動物模型是深入開展該疾病研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究采用慢性情緒應(yīng)激的方法建立焦慮大鼠模型,觀察應(yīng)激前后自身行為學的變化,且通過國際公認的高架十字迷宮試驗對其焦慮狀態(tài)進行測試與評價,旨在為廣泛性焦慮障礙的研究提供較好的動物模型。
1 材 料
1.1 實驗動物
健康Wistar雄性大鼠20只,SPF級,2～3月齡,體重(200±10)g。由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所購買,合格證號:SCXK(京)2005-0013。動物購進后預(yù)養(yǎng)1周內(nèi)自由攝食飲水。光照節(jié)律12L/12D(6∶00～18∶00),室溫(20±2)℃,相對濕度為50%～60%,保持安靜。
1.2 行為學測試儀器
高架十字迷宮采用國際通用的方法制作[1],由安徽省淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。
2 方 法
2.1 動物分組和焦慮模型的建立
大鼠經(jīng)1周適應(yīng)期后隨機分為正常組、模型組,每組10只。除正常組外,模型組單籠飼養(yǎng)且接受不確定性空瓶飲水刺激建立焦慮應(yīng)激模型[2] 。具體方法如下:定時喂水訓練7天,即每天早9∶00～9∶10和晚21∶00～21∶10給動物飲水10min,其余時間撤去水瓶不給水。定時喂水期結(jié)束后開始應(yīng)激實驗,在上述兩個時間段內(nèi)給予不確定空瓶刺激,維持1天1次或1天2次,持續(xù)2周。正常組不接受任何處理,自由飲水和攝食。所有動物在應(yīng)激結(jié)束后進行高架十字迷宮行為學測定,兩組交叉進行。動物均提前2h進入測試實驗室適應(yīng)環(huán)境。
2.2 行為學觀察
行為學觀察包括攻擊(咬或攻擊空瓶和籠子)、探究(前后左右運動和光顧水瓶所在位置)及修飾行為(梳理皮毛和洗臉)。具體方法是將空瓶應(yīng)激的10min等分10個時間段,在每個時間段內(nèi)記錄每只大鼠上述3種行為,行為出現(xiàn)即為1,否則為0.10min內(nèi)觀察的總分為0～10之間。得分基于2 名觀察者的觀察結(jié)果平均而得,其中一人為雙盲控制。14個觀察日的前3天和最后3天的平均分用于統(tǒng)計分析。
2.3 行為學測試
實驗室內(nèi)光線昏暗(以1.5m 距離處能區(qū)分大鼠細微活動的最低亮度為準)并保持恒亮,室溫21℃,安靜。測試箱放置于實驗室一角,周圍布以2m 高黑色單調(diào)背景。實驗過程中只有一名參與日常處理的人員搬運動物。
迷宮測試前將每只大鼠放入一個60cm×60cm×35cm塑料盒中,任其自由探究5min后迅速置于EPM 的中央平臺處使其頭部正對其中一個開放臂,釋放后即開始記錄下述指標: ①進入開放臂次數(shù)(open arm entry,OE):進入到任一開放臂的次數(shù),以大鼠4個爪子均進入到臂內(nèi)為準,中途一個爪子從該臂中完全退出則為該次進入活動完成; ②進入開放臂時間(open arm time,OT):進入開放臂的時間,單位:秒; ③進入封閉臂次數(shù)(close arm entry,CE):進入任一封閉臂的次數(shù),以大鼠4個爪子均進入到臂內(nèi)為準;④進入封閉臂時間(close arm time,CT):進入封閉臂的時間,單位:秒;⑤向下探究次數(shù)(head-dipping,HD):大鼠置身于中央平臺或開放臂時,一邊用前爪握住迷宮邊緣一邊把頭部和肩部伸出開放臂的邊緣向迷宮下面探究的行為次數(shù); ⑥封閉臂后腿直立次數(shù)(rearing,RR):大鼠在封閉臂前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數(shù)。
由①～④分別計算出:①進入開放臂和封閉臂的總次數(shù)(OE+CE):表示大鼠的運動活力;②進入開放臂次數(shù)比例(OE%):即開放臂進入次數(shù)/(OE+CE)×100%;③開放臂停留時間比例(OT%),即開放臂停留時間/(OT+CT)×100%,每只大鼠測試5min。
2.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析
各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(±s)表示。數(shù)據(jù)處理采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件分析處理,兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗。以P
3 結(jié) 果
3.1 模型組大鼠行為學的變化
如表1所示,空瓶應(yīng)激期間,模型組大鼠14個觀察日的前3天和最后3天相比,探究行為無明顯差異(P>005),修飾行為增多(P
表1 模型組14個觀察日前3天和最后
3天空瓶應(yīng)激時行為變化的比較(n=10,±s)
組別探究行為修飾行為攻擊行為
起始3天5.22±0.973.22±1.121.29±0.96
最后3天4.64±1.065.58±1.076.08±1.35注:n為動物只數(shù);與起始3天比較,P
3.2 大鼠EPM測試結(jié)果
如表2所示,因正常組不施加任何干預(yù)因素,故與模型組相比OE+CE、OE%、OT%、head-dipping明顯減少,差異明顯(P
表2 各組大鼠EPM測試行為學的比較( n=10,±s)
組別OE+CE/次 OE/%OT/%HD/次RR/次
正常組 11.70±1.4934.78±5.89 35.19±4.1514.70±1.9412.50±1.81
模型組8.40±1.7814.42±4.2817.17±6.799.10±1.7913.40±2.17注:n為動物只數(shù);與正常組比較,P
4 討 論
現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)激和焦慮是密切相關(guān)的現(xiàn)象,大多數(shù)焦慮癥患者都曾經(jīng)歷過嚴重的心理應(yīng)激事件,因此應(yīng)激事件可以成為焦慮癥發(fā)病的原因和誘因[3]。本研究采用不確定性空瓶刺激建立慢性應(yīng)激焦慮大鼠模型,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過幾次固定時間的飲水學習之后,在飲水期間給予動物空瓶,能夠誘發(fā)動物出現(xiàn)攻擊,撕咬瓶子和籠子,頻繁修飾等焦慮行為。此外,模型組大鼠表現(xiàn)出易激惹的狀態(tài),與臨床中焦慮癥患者的易激惹表現(xiàn)相似。
高架十字迷宮試驗(EPM)既可以建立焦慮應(yīng)激的模型也是國際上公認的經(jīng)典測量焦慮反應(yīng)的方法[1-4]。其原理是利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼心理,形成動物的矛盾沖突來考察大鼠的焦慮狀態(tài)。EPM測試的項目中,焦慮動物的OE%和OT%會明顯降低,經(jīng)典抗焦慮藥物則使兩者升高,OE+CE反映了動物的運動活性。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的OE%和OT%顯著下降,運動活性也降低。HD反映了動物在非保護區(qū)內(nèi)的探索行為,代表動物對陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避,與焦慮程度有一定相關(guān)性,本研究中空瓶應(yīng)激后的大鼠HD行為減少;RR可用來觀察藥物有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強度。上述結(jié)果證實,慢性應(yīng)激后的大鼠明顯處于焦慮狀態(tài),說明慢性焦慮應(yīng)激大鼠模型的制備成功,且通過量化的標準客觀反映出大鼠的焦慮程度。
GAD作為焦慮癥的臨床亞型,多呈慢性病程且易復(fù)發(fā),癥狀反復(fù)遷延,并與許多軀體疾病相關(guān)聯(lián),相當比例的患者還共病抑郁和其他精神障礙類疾病,患者不僅存在難以忍受而又無法擺脫的精神痛苦,嚴重者可導致社會功能受損,甚至出現(xiàn)自殺,給個人家庭和社會造成嚴重的經(jīng)濟和精神負擔。焦慮動物模型作為焦慮癥基礎(chǔ)研究的載體,在探索其發(fā)病機制、新藥研發(fā)及臨床前評估的研究中發(fā)揮著重要作用,但目前尚缺乏針對GAD的動物模型?；诖?本研究從病因?qū)W的角度出發(fā),建立慢性焦慮情緒應(yīng)激的動物模型,通過其自身行為學的變化和EPM測試即橫向和縱向的比較來評價該模型的可行性和有效性。雖然動物的情緒變化遠不如人類豐富,動物身上也較難準確模擬人類發(fā)病的心境。但是,他們也存在并非單一的情緒變化,有些情緒變化如焦慮、憤怒、恐懼等與人類存在相似性,在情緒變化時同樣也存在行為學和復(fù)雜的神經(jīng)內(nèi)分泌變化[5-6]。本研究結(jié)果提示:不確定性空瓶刺激作為一種慢性心理應(yīng)激模型,能誘導動物出現(xiàn)明顯的焦慮行為,從病因?qū)W上較好模擬了GAD的發(fā)病狀態(tài),與現(xiàn)有的焦慮應(yīng)激模型相比,該模型在很大程度上避免了摻雜物理(軀體)性應(yīng)激成分,是一種相對“純粹”的心理應(yīng)激模型。本課題組將在此行為學研究的基礎(chǔ)上,進一步開展焦慮癥神經(jīng)生物學方面的探索性研究。
參考文獻
[1] Pellow S,Chopin P,File SE,et al.Validation of open-closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat[J].J Neurosci Methods,1985,14(3):149-167.
[2] 林文娟,王瑋雯,邵楓.慢性情緒應(yīng)激對大鼠行為、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫反應(yīng)的影響:一個新的情緒應(yīng)激模型[J].科學通報,2003,48(9):926-929.
[3] 沈漁.精神病學[M].5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:599.
[4] Cladis L.K. Moraes, Leandro J.Interplay between glutamate and serotonin within the dorsal periaqceductal gray modulates anxiety-ralated behaviour of rats exposed to the elevated plus-maze[J].Behavioural Brain Research, 2008, 194(2):181-186.
第3篇：動物行為學研究范文
【關(guān)鍵詞】針刺治療；抑郁癥；疾病模型；大鼠；行為學；5-HT；NE
Effects of acupuncture on serotonin and norepinephrine in hippocampus of depressed model rats 【Abstract】Objective To observe how acupuncture affects the mechanism of depression model rats.Methods Using Open-Field method to randomly select 40 adult SD male rats into normal control， model group， drug treatment and acupuncture treatment group， 10 rats per group. Separation， long term unpredictability， medium stimulation techniques were applied to modify rats behavior. Then using Open-Field method to reflect changes in depressed model rats behavior between groups treated with acupuncture and control. And the concentration of monoamine neurotransmitters and their metabolites in hippocampus of rat brain were determined by HPLC-ECD. Results Compared with normal control， acupuncture treatment group’s behavior was not different （P＞0.05）on the 7th day after treatment. On the 21th day after treatment， acupuncture treatment group’s behavior was not different （P＞0.05）with drug treatment group， and was more different with model group（P＜0.01）. Compared with normal group on the 21th day of treatment， the concentration of serotonin and norepinephrine in hippocampus of acupuncture treatment group was not different （P＞0.05）， whereas was more different with model group （P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion This experiment proved that acupuncture treatment could change the behavior abnormality of depressive model rats. The curative effects is comparable to flouxetine. The changes of the concentration of serotonin and norepinephrine in hippocampus are one of the mechanism.
【Key words】acupuncture treatment；depression；disease model；rat；behavior；5 hydroxytryptamine (5-HT);NE
自1984年，針灸開始介入抑郁癥的治療以來，取得了確切的臨床療效，但是對于針刺作用的過程和機制研究尚不深入。為了探討針刺在抑郁癥治療中的應(yīng)用規(guī)律，我們觀察了針刺對抑郁癥模型大鼠海馬區(qū)內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響，并與氟西?。ㄟx擇性5-羥色胺再攝取抑制劑）作對照。現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。
1 材料與方法
1.1 動物與分組
成年SD大鼠，體重180～220g，雄性，南京中醫(yī)藥大學動物中心提供。首先用Open-Field法作行為學評分，選擇得分相近的40只大鼠進行實驗分組。將大鼠隨機分為正常組、模型組、藥物組、針刺組，共4組，每組10只；正常組每籠飼養(yǎng)5只，模型組及針刺組每籠飼養(yǎng)1只（分養(yǎng)）。
1.2 實驗方法
1.2.1 復(fù)制模型
參考文獻［1］復(fù)制抑郁癥模型：模型組、藥物組、針刺組大鼠，共接受21天各種不同的應(yīng)激，包括冰水游泳（4℃，5min）、熱應(yīng)激（45℃，5min）、禁水（24h）、夾尾（1min）、電擊足底（電壓50mV，每隔15s刺激1次，每次持續(xù)10s，共15次）、搖晃（1次/s，5min）、禁食（24h）和晝夜顛倒等刺激，平均每種刺激各4次。正常組，常規(guī)飼養(yǎng)，不接受任何應(yīng)激性刺激。
于實驗第1、21天測定各大鼠行為學（水平運動和垂直運動）。
1.2.2 治療方法（實驗第21天，進入治療階段）
正常組，繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)5只。模型組，繼續(xù)分養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)1只；常規(guī)飼料喂養(yǎng)，不予應(yīng)激性刺激，也不予任何治療措施。藥物組，繼續(xù)分養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)1只；常規(guī)飼料喂養(yǎng)，不與應(yīng)激性刺激，按照1.8mg/kg給予氟西汀，將藥物溶解于生理鹽水中灌胃。1日1次治療，連續(xù)21天。針刺組，根據(jù)《實驗針灸學》［2］大鼠穴位定位方法，選擇百會、內(nèi)關(guān)、三陰交，并參照人和動物的穴位解剖結(jié)構(gòu)特點，在華興邦研制的大鼠針灸穴位圖譜基礎(chǔ)上，在大鼠前正中線上，額頂骨縫交界線前方處定位神庭穴。針刺方法：常規(guī)穴位消毒，選用蘇州醫(yī)療用品廠生產(chǎn)的“華佗”牌32號1.0寸針灸針進行治療。百會穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，進針深度約為2mm，內(nèi)關(guān)直刺1mm，三陰交直刺5mm，每穴行均勻捻轉(zhuǎn)刺激30s，留針10min。1日1次治療，連續(xù)21天。
分別于實驗第28、35、42天測定各鼠行為學的變化。
1.3 行為學測定
Open-Field法［3］測定大鼠行為學。本實驗所用敞箱為正方形，長、寬各80cm，高40cm，底面由面積相等，邊長16cm的正方形25塊組成，白色內(nèi)面，以動物穿越底面的塊數(shù)為水平活動（crossing）得分，以直立次數(shù)為垂直活動（rearing）得分，每次3min。
1.4 高效液相-電化學（HPLC-EC）技術(shù)與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的檢測
1.4.1 試劑
去甲腎上腺素酒石酸鹽（NE）、5-羥色胺鹽酸鹽（5-HT）、3-甲氧基-4-羥基苯乙二醇（MHPG）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）（以上為SIGMA公司產(chǎn)品），乙二胺－四乙酸二鈉（EDTA）（分析純，汕頭金砂化工廠，批號：010304）、辛烷基磺酸鈉（東京化成工業(yè)株式會社，批號：A87509A）、無水乙酸鈉（分析純，南京化學試劑廠，批號：971142）、檸檬酸（分析純，上海榮潤化工有限公司，批號：20010630）、二正丁胺（化學純，中國常州市光明生物化學研究所，批號：960308）、高氯酸（分析純，上海桃浦化工廠，批號：0710）、甲醇（一級品，高效液相色譜專用，江蘇淮陰塑料制品廠精細化工研究所，批號：980512），實驗用水為重蒸餾水。
1.4.2 儀器
高效液相色譜儀由島津LC-10A系列組成，LC-10AD泵，SIL-10A自動進樣器，進針深度35mm，樣品注射速度5μl/s，CTO-10AVP柱溫箱，溫度18℃，壓力為160Kgf/cm2。L-ECD-6A電化學檢測器，CLASS-LC10 VER 1.63工作站。色譜柱為Lichrospher C18， 4.6mm×250mm，江蘇漢邦科技有限公司生產(chǎn)。
1.4.3 流動相的配備［4］
流動相為乙酸鈉(100mmol/L)－檸檬酸(85mmol/L)緩沖液，pH 3.7，內(nèi)含0.4mmol/L二正丁胺，1.09mmol/L辛烷磺酸鈉，0.2mmol/L EDTA，及18%甲醇，真空抽濾，超聲脫氣15min后使用。流速為0.5ml/min。
1.4.4 樣品制備及測定
實驗第42天（治療21天）后，斷頭處死大鼠，快速取大腦組織，并置于冰皿上，按Glowinski法分離下丘腦［5］，稱重后加入0℃～4℃高氯酸提取液330μl（含0.01%半胱氨酸和0.5mmol/L EDTA）以及內(nèi)標溶液（DHBA0.006mg/ml）20μl，冰浴中勻漿，4℃高速離心(10000r/min)，取上清液注入HPLC-EC檢測系統(tǒng)測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其主要代謝產(chǎn)物的含量，進樣量為20μl。用內(nèi)標法定量，峰面積計算含量。共檢測出2種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，其洗脫順序依次為：(1)去甲腎上腺素(NE)；(2) 5-羥色胺(5-HT)。
1.5 統(tǒng)計學方法
以均數(shù)加減標準誤(x±s)表示，統(tǒng)計分析用SPSS12．0統(tǒng)計軟件處理。
2 結(jié)果與分析
2.1 各組大鼠Open-Field法行為學測定結(jié)果
Open-Field法是測定抑郁癥大鼠行為學的經(jīng)典方法，分水平運動和垂直運動兩個觀察面，以觀察得分為評分計算單位。各組大鼠的水平運動評分見表1，垂直運動評分見表2。表1 各組大鼠Open-Field法行為測定水平運動評分結(jié)果（略） 注：與正常對照組比，P＜0.05，P＜0.01；與模型對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01表2 各組大鼠Open-Field法行為測定垂直運動評分結(jié)果（略） 注：與正常對照組比，P＜0.05，P＜0.01；與模型對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01
結(jié)果表明：（1）在造模結(jié)束時（實驗第21天），與正常對照組比較，模型對照組以及各治療組大鼠的水平和垂直運動明顯降低（P＜0.01）；模型對照組與各治療組大鼠的水平活動和垂直運動差異無顯著性。（2）在治療第7天（實驗第28天）后，針刺組大鼠的行為學評分明顯升高，與正常對照組已經(jīng)無明顯差異（P＞0.05）；藥物治療組與正常組大鼠行為學評分相比，尚存在明顯差異（P＜0.01），與模型組行為學評分差異無顯著性（P＞0.05）。（3）在治療21天（實驗第42天）后，針刺組和藥物治療組行為學評分與正常組大鼠已經(jīng)差異無顯著性（P＞0.05）；與模型對照組比較，水平運動和垂直運動差異有顯著性（P＜0.01）。（4）在治療21天后，針刺治療組大鼠與氟西汀藥物治療組大鼠的行為學評分差異無顯著性。
2.2 各組大鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測定結(jié)果
應(yīng)用高效液相電化學方法測定各組大鼠海馬區(qū)內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的含量。我們在實驗第42天，處死大鼠去大腦海馬組織進行高效液相電化學檢測，僅檢測到海馬區(qū)內(nèi)5-HT和去甲腎上腺素的含量；5-HT的代謝產(chǎn)物5-HIAA和NE的代謝產(chǎn)物MHPG以及DA和它的代謝產(chǎn)物DOPAC，均沒有檢測到。5-HT和NE的含量見表3。表3 各組大鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測定結(jié)果（略）注：與正常對照組比較，P＜0.05，P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
結(jié)果表明：（1）與正常對照組相比，模型對照組大鼠海馬5-HT和NE降低（P＜0.01）。（2）經(jīng)過21天治療，與模型對照組相比，藥物氟西汀治療組和針刺治療組大鼠海馬內(nèi)5-HT和NE含量明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）；與正常對照組差異無顯著性（P＞0.05）。（3）各組大鼠海馬區(qū)內(nèi)5-HT和NE的比值，差異無顯著性（P＞0.05）。
3 討論
關(guān)于抑郁癥的病因和發(fā)病機制尚不確切。一般認為，本病的發(fā)生除了與心理－社會因素和遺傳因素有關(guān)外，主要還由于患者腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)減少、相應(yīng)受體的敏感性改變以及遞質(zhì)系統(tǒng)間失衡等因素有關(guān)。許多研究報告發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者存在生物胺水平和(或)生物胺神經(jīng)通路功能乃至結(jié)構(gòu)的異常，而NE和5-HT被認為與情感障礙的發(fā)生關(guān)系最為密切；另一方面，NE和(或)5-HT再攝取抑制劑至今仍然是抗抑郁藥的主體。其中，氟西汀是第一個選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)，也是至今應(yīng)用最廣的抗抑郁藥。研究資料表明［6］氟西汀有抑制神經(jīng)元從突觸間隙攝取5-HT、增加間隙中可供實際利用的5-HT，從而改善5-HT能神經(jīng)元的功能狀態(tài)而改善情感癥狀；同時，可以通過5-HT和NE能神經(jīng)元之間的交互作用，影響和調(diào)節(jié)NE神經(jīng)元功能、增加突觸間隙NE含量而發(fā)揮抗抑郁作用。而另一方面，大腦內(nèi)不同區(qū)域的功能存在差異，其中海馬是邊緣系統(tǒng)的重要組成部分，和情緒及動機的產(chǎn)生以及和腦的高級神經(jīng)活動——學習記憶有關(guān)。海馬還與額葉皮質(zhì)、皮層下杏仁復(fù)合體、紋狀核及下丘腦后部等有復(fù)雜的纖維聯(lián)系；也是Papez情緒動機回路的一個重要環(huán)節(jié)［7］。應(yīng)用核磁共振技術(shù)發(fā)現(xiàn)，與正常人相比，正在患抑郁癥的患者左、右兩個海馬區(qū)的體積明顯減小，直接提示了抑郁癥與海馬區(qū)的關(guān)系［8］。
針灸對抑郁癥的治療有確切的療效。從我們的實驗結(jié)果來看，針刺治療可以顯著地改善抑郁癥模型大鼠的行為學異常，治療21天時達到正常組大鼠的水平（P＞0.05），與氟西汀治療相當（P＞0.05），而與模型對照組的水平運動和垂直運動評分存在明顯的差異（P＜0.01）。但是從治療過程來分析，針刺組大鼠的行為學評分首先得到改善，而且在治療的第1周就已經(jīng)與正常組大鼠差異無顯著性。顯現(xiàn)了針刺治療抑郁癥存在某種獨特的機制，提示針刺治療與藥物（氟西?。┲委熢跈C制上可能存在明顯的差異，針刺治療有起效快的特點。本研究還提示，在深入探索針刺治療抑郁癥的神經(jīng)生物學機制時，可能需要考慮觀察的時間窗等因素，尤其是在治療的早期和超早期。
我們的研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥模型大鼠海馬區(qū)NE和5-HT含量降低，而通過21天治療后，針刺組和氟西汀組海馬區(qū)NE和5-HT的含量都升高，與模型對照組存在明顯差異（P＜0.05，P＜0.01），而與正常對照組差異無顯著性（P＞0.05），提示了針刺抗抑郁的作用與海馬區(qū)、尤其是海馬區(qū)NE和5-HT神經(jīng)元功能改善有關(guān)。但是進一步的研究，還需要考慮海馬區(qū)5-HT和NE等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的動態(tài)變化規(guī)律，以及遞質(zhì)對應(yīng)的受體功能和結(jié)構(gòu)改變、受體之間交互作用等變化。
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第4篇：動物行為學研究范文
1鳥類腦大小對覓食創(chuàng)新的影響
很多動物行為學家都認為，在動物前腦大小與覓食創(chuàng)新之間存在著神經(jīng)生物學聯(lián)系［3］，因為前腦與動物行為的可塑性密切相關(guān)。通常是前腦越大，覓食創(chuàng)新能力越強。根據(jù)這一基本原理，Lefebvre等人（2004）［4］研究了北美洲和大不列顛群島上各種鳥的前腦大小與覓食創(chuàng)新之間的關(guān)系。所謂覓食創(chuàng)新是指能取食和利用新的食物種類或采用新的覓食技巧。為此，研究人員利用了9種鳥類學雜志所提供的資料，收集了322種覓食創(chuàng)新（或覓食新技能），其中126種覓食新技能屬于大不列顛群島上的鳥類，192種屬于北美洲的鳥類（表1）。這些覓食創(chuàng)新包括銀鷗捕到小嚙齒動物后將它們?nèi)拥綆r石上摔死或沉入水中淹死；也包括普通烏鴉利用過路的小汽車把堅果壓碎，這相當于把小汽車當鉗子使用［5］Lefebvre等人曾計算過這些創(chuàng)新行為在不同類群（目鳥類中的分布情況，同時還分析過不同類群鳥類在大不列顛和北美洲的常見程度或稀有程度。在掌握各種鳥類覓食創(chuàng)新行為的同時，研究人員還獲得了這些鳥類前腦相對大小的資料［6］。無論是在大不列顛群島還是北美洲，鳥類前腦的大小都與覓食創(chuàng)新密切相關(guān)。凡是前腦比較大的鳥類，其覓食創(chuàng)新行為也更為常見。雖然有很多覓食創(chuàng)新都是在一次觀察中發(fā)現(xiàn)的，但對多達322例覓食創(chuàng)新行為的大規(guī)模分析中，發(fā)現(xiàn)在前腦大小與覓食創(chuàng)新之間確實存在著直接的關(guān)系，這表明，這是動物行為學中一個重要而有意義的研究新領(lǐng)域。Sol等人（2006，2007）［7－8］曾研究過鳥類腦子較大是否對其生存和生殖有利的問題。長期以來人們一直未經(jīng)驗證地認為，腦相對較大有助于提高動物的適合度（fitness），特別是當種群進入一個新的陌生環(huán)境的時候，這時覓食創(chuàng)新對動物的生存和生殖就特別重要［9－10］。Sol等人曾研究了646例物種被引入新環(huán)境的實驗（涉及196種鳥），其中大多是研究人員將一種鳥引入一個島嶼或原分布區(qū)以外的地方［11－12］。研究人員還收集了196種鳥有關(guān)腦大小的資料，并根據(jù)鳥大腦就大，鳥小腦就小的基本事實作了相應(yīng)的校正，最終發(fā)現(xiàn)，在鳥的腦大小和能在新環(huán)境中成功定居之間存在著正相關(guān)關(guān)系，這是因為腦子較大的鳥類具有更強的覓食創(chuàng)新能力，這種能力可大大提高鳥類的食物攝取率，從而能提高鳥類的生存機會和生殖機會。
2動物有計劃未來的能力嗎？
學習是動物借助于個體生活經(jīng)歷和經(jīng)驗使自身行為發(fā)生適應(yīng)性變化的過程，從這一學習的定義可以看出，任何當前發(fā)生的行為都是與此前的生活經(jīng)歷和經(jīng)驗相關(guān)聯(lián)的。如果動物也能像我們?nèi)祟惸菢幽軌蚋鶕?jù)先前的經(jīng)歷和經(jīng)驗預(yù)測和計劃未來的話，那一定會大大增加自身的存活機會和適合度。目前屬于這方面的研究還很少，因為長期以來人們一直認為計劃未來是人類獨有的能力，這也是人類與所有其他動物存在的一個主要差異［13］。然而隨著時間的推移已變得越來越清楚的是，動物也具有一些一度被認為是人類所獨有的行為，例如使用工具和純粹是有利于未來生存的行為，這促使動物行為學家開始對動物有沒有計劃未來的能力產(chǎn)生興趣并進行研究。動物行為學家認為，要想確認計劃未來的行為必須滿足兩個條件：首先該行為必須是創(chuàng)新的或新穎的，它不是某些本能行為的表現(xiàn)，例如：遷飛行為有很多本能成分，雖然顯示有一定的“計劃性”，但不是我們要求的那樣；其次，計劃未來的行為不一定與動物當前的動機狀態(tài)相關(guān)，而必定會涉及到未來某一時刻的動機狀態(tài)。下面介紹一個最新的關(guān)于動物計劃未來的研究實例，這就是松鴉為了計劃未來而改變其覓食行為的現(xiàn)象［14］。松鴉是進行這類研究的一個極好的物種，因為它具有令人難以置信的記憶力，它生活在高海拔地區(qū)，常常要為未來貯藏大量的食物，每個個體每年大約要貯藏3萬多粒種子，冬季和春季幾乎完全依賴秋季貯藏的種子為生。松鴉不僅能記住它們貯藏食物的地點，而且還十分注意當它們在貯藏食物時誰在觀察它們。在這種情況下，它們此后會把食物重新挖出來并進行深埋，以防這些食物被偷食［15］。Raby等人（2007）［16］利用一個簡單而巧妙的實驗檢驗了松鴉是否具有計劃未來的能力。研究人員為松鴉提供兩個隔室，其中一個隔室中含有食物松子，另一個隔室中沒有食物，每天早晨松鴉只能見到和進入一個隔室，在連續(xù)6天的實驗期間，兩個隔室是交替出現(xiàn)的，各出現(xiàn)3次。每天實驗的前一天晚上，不為松鴉提供任何食物，因此它們在見到隔室期間是處于饑餓狀態(tài)。6天實驗結(jié)束后，每天天黑前兩小時，只為松鴉提供一點點食物，使它們得不到可供貯藏的種子。此后再為它們提供一個備有大量松子的場所，并提供兩個以前曾多次拜訪過的隔室，但現(xiàn)在每個隔室內(nèi)又安裝了一個能貯藏食物的“貯食杯”，使鳥類在天黑前可以把食物貯藏起來，如果它們愿意這樣做的話。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在兩個隔室中它們總是在其中的一個隔室中貯藏更多的食物（松子），而這個隔室是它們以前拜訪過的那個不含有食物的隔室，這說明在越是缺乏食物的環(huán)境中，它們貯藏食物的行為就表現(xiàn)得越明顯，這對于保障未來的生存是很重要的，這實際上是“為未來著想的一種行為適應(yīng)性”。接下來Raby等人又安排了一個更加有趣的實驗，他們訓練松鴉使其知道在一個隔室中可以吃到花生，而在另一個隔室中可以吃到谷粒，松鴉對這兩種食物都很愛吃。當按照上述同樣的方法進行實驗時，發(fā)現(xiàn)松鴉在含有花生的隔室中貯藏的食物是谷粒，而在含有谷粒的隔室中貯藏的是花生，這表明松鴉很注意并喜歡使它們的食物多樣化，在它們?yōu)槲磥頊蕚涫澄飼r也是遵循這一使食譜多樣化的原則。除鴉科鳥類（如松鴉和星鴉）外，其他動物是否也有“為未來著想”和計劃未來的行為，目前還研究得很少，尚有待于擴展研究范圍。
3腦海馬大小與貯食行為的關(guān)系
為了了解鳥類覓食行為與空間記憶力的問題，Hea－ley和Krebs（1992）［17］曾研究了7種鴉科鳥類的腦海馬大小與貯藏食物的能力之間的關(guān)系。他們之所以選擇研究腦海馬是因為已知鳥類大腦的這個區(qū)域與食物的回收（復(fù)得）有密切關(guān)系。同時，鴉科鳥類也是研究這一問題的最好對象，因為在鴉科鳥類的各個物種之間，貯食行為的表現(xiàn)各不相同，便于用比較研究法進行分析。有些鴉科鳥類根本就不貯藏食物，而另一些鴉科鳥類則 必須在長達9個月期間完全依賴貯藏的食物為生［18－19］。Healey和Krebs［17］研究了兩種幾乎不貯藏食物的鴉科鳥類，即寒鴉（Corrus monedula）和紅嘴山鴉（Pyr－rhocorax graculus），還研究了4種貯藏食物的鴉科鳥類，它們是禿鼻烏鴉（Corvus frugilegus）、歐洲烏鴉（Corviscorone）、喜鵲（Pica pica）和紅嘴藍鵲（Cisia erythro－rhyncha），此外還研究了1種不僅貯藏食物，而且在長達9個月期間必須記住6 000～11 000粒種子埋藏地點的鴉科鳥類，即歐洲松鴉（Garrulus grandarius）。當檢查貯食行為與腦海馬大小之間關(guān)系的時候，發(fā)現(xiàn)這些鳥類都表現(xiàn)出明顯的正相關(guān)關(guān)系，即海馬體積越大，貯藏食物的行為就越發(fā)達，這表明：海馬大小是鴉科鳥類空間記憶力和貯食行為進化的關(guān)鍵因素。此外，動物行為學家還研究了在一個物種內(nèi)部個體之間海馬大小與貯食能力之間的關(guān)系，例如：生活在食物短缺環(huán)境中的個體比生活在食物豐富環(huán)境中的個體具有更發(fā)達的貯食能力，腦海馬的體積也比較大［20］。這就是說，當鳥類生活在嚴酷環(huán)境中的時候，自然選擇有利于增強它貯存食物的能力和此后重新找回這些食物的能力，也有利于海馬體積的增大和海馬神經(jīng)元數(shù)量的增加。Pravosudo及其同事用來自食物豐富的科羅拉多州和來自食物短缺的阿拉斯加州的兩個黑冠山雀（Po－ecile atricapilla）種群檢驗和證實了這一觀點。他們從阿拉斯加州的安克雷奇（Anchorage）捕捉15只活鳥，從科羅拉多州的溫澤（Windsor）捕捉20只活鳥，然后將它們帶回加利福尼亞大學的實驗室，45天后測定這些鳥類貯藏種子之后再重新找到這些種子的能力。當為這些鳥提供可供貯藏的種子時，發(fā)現(xiàn)來自阿拉斯加（食物短缺）的山雀比來自科羅拉多（食物豐富）的山雀要貯藏更多的種子。同樣重要的是，阿拉斯加山雀不僅比科羅拉多山雀貯藏更多的種子，而且它們重新找回這些種子的效率也更高，所犯錯誤也最少。從海馬大小的角度進行比較，雖然阿拉斯加山雀比科羅拉多山雀的個體小體重輕，但其海馬的體積卻比后者大，而且海馬所含有的神經(jīng)元數(shù)量也更多。有趣的是，在不給予兩地山雀貯藏食物的機會的情況下，它們之間海馬大小的差異仍然存在，這表明：貯藏行為本身并不會使阿拉斯加山雀的海馬變大，相反，兩地山雀之間的差異應(yīng)當是自然選擇作用于海馬大小的結(jié)果。目前，有關(guān)這一領(lǐng)域的大量工作正在進行之中。
第5篇：動物行為學研究范文
摘要：目的觀察頭頂一顆株注射液對快速老化大鼠學習記憶能力及血、肝、腎、海馬、腦皮質(zhì)抗氧化酶的影響。方法采用氟哌啶醇造成實驗大鼠獲得性記憶缺失動物模型，用電跳臺法觀察對照組、模型組、頭頂一顆株注射液高、中、低劑量組大鼠行為學變化，測定各組大鼠血及肝、腎、海馬、腦皮質(zhì)等組織超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量。結(jié)果與模型組比較頭頂一顆株注射液各劑量組能維持實驗大鼠學習記憶成績，多種組織SOD，GSH-Px 顯著升高，高、中劑量組作用尤其明顯(P
關(guān)鍵詞：頭頂一顆株； 學習； 記憶； 抗氧化酶； 超氧化物歧化酶； 谷胱甘肽過氧化物酶
Effects of Trillium tschonoskii Maxim on Learning and Memory and Anti-oxidase in Rats
Abstract：ObjectiveTo study the effect of Trillium tschonoskii Maxim injection on the learning and memory and on the expression of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in serum， liver， kidney， hippocampus， cortex of aging rats.MethodsRats were randomly pided into five groups， control group， model group， Trillium tschonoskii maxim injection small dose group， middle dose group and large dose group. Rat model of acquired memory deficiency induced with haloperidol was employed. Electricity stimulated jumping stand was used for observation on rat behavior change and meanwhile concentrations of SOD and GSH-Px in different organs of the animal were detected.ResultsIn contrast with model groups， Trillium tschonoskii maxim injection at different dosage could maintain learning and memory， significantly increase the concentrations of SOD and GSH-Px in different tissue of the rats.(P
Key words：Trillium tschonoskii Maxim; Learning； Memory； Anti-oxidase； Superoxid dismutase; Glutathione peroxidase
頭頂一顆株又稱延齡草Trillium tschonoskii Maxim，為百合科延齡草屬植物，以根入藥，含有薯蕷皂素、甾醇、甾酮等化學成分，具有鎮(zhèn)靜、止痛、止血作用，主要用于治療眩暈頭痛、神經(jīng)衰弱、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)、崩漏等疾病［1］。 現(xiàn)代醫(yī)學研究認為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能退行性病變是人體衰老的關(guān)鍵，并與代謝產(chǎn)生的氧自由基（oxygen free radicals）慢性損傷或抗氧化酶不足密切相關(guān)。本實驗用頭頂一顆株注射液腹腔注射，通過對各組大鼠行為學觀察和組織SOD，GSH-Px含量測定，探討頭頂一顆株注射液對大鼠學習記憶能力及抗氧化酶的影響，從而進一步探討其改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抗衰老作用機制。
1 材料與方法
1.1 頭頂一顆株注射液制備頭頂一顆株由恩施中藥材生產(chǎn)GAP（質(zhì)量管理規(guī)范）示范基地提供，采用水提醇沉法制成含生藥30%的注射液，瓶裝密封消毒備用。
1.2 藥品與儀器氟哌啶醇注射液(湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))， SOD、GSH-Px試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供），回避反應(yīng)箱（由華中科技大學同濟醫(yī)學院病理生理系提供），GL-20G II型高速低溫離心機，UV-2450分光光度儀，水浴箱。
1.3 電跳臺行為學訓練及測試實驗裝置為30 cm×30 cm回避反應(yīng)箱，箱底為銅柵，可通刺激電流。另有一高5 cm，頂端直徑為5 cm的橡膠圓臺作為避電擊平臺，固定放置在箱內(nèi)一角的銅柵上，大鼠可在圓臺上停留以回避電擊。實驗開始時，先將大鼠輕放于回避反應(yīng)箱內(nèi)，使其適應(yīng)3~5 min，以消除探究反應(yīng)。爾后底部銅柵通電（36 V）2 s，大鼠在受電擊刺激中逐漸學會跳上平臺回避電擊。多數(shù)大鼠可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊后又重新跳回平臺，如此訓練3 min，并記錄每只鼠受電擊數(shù)或犯錯次數(shù)，以此作為學習成績。末次給藥后，再測試行為學改變，記錄3 min各鼠跳下平臺的錯誤次數(shù)和第一次跳下平臺的潛伏期。
1.4 動物分組與用藥雄性Wistar大鼠50只，鼠齡40~50周，體重300~350 g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院動物中心提供。隨機分為對照組、模型組、頭頂一顆株高劑量組、中劑量組和低劑量組，每組10 只。模型組按1 g/kg體重腹腔注射氟哌啶醇注射液，頭頂一顆株高、中、低劑量組分別在注射氟哌啶醇的同時，按7.2，3.6，1.8 g/kg體重腹腔注射頭頂一顆株注射液，對照組每天等量腹腔注射生理鹽水，Bid，連續(xù)用藥7 d。
1.5 組織SOD，GSH-Px測定行為學測試結(jié)束后斷頸處死大鼠，迅速取血及各種組織，血液離心取血清，組織制成10%勻漿，備用。SOD，GSH-Px測定，按試劑盒說明書進行，蛋白定量采用雙縮脲法測定。
1.6 統(tǒng)計方法所有結(jié)果都用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用±s表示，在對數(shù)據(jù)進行分析的過程中，發(fā)現(xiàn)個別數(shù)據(jù)不符合ANOVA比較的要求，而用非參數(shù)進行比較分析。
2 結(jié)果
2.1 頭頂一顆株對大鼠學習記憶能力的影響 電跳臺行為學測試結(jié)果顯示，頭頂一顆株各劑量組與模型組比較均能延長實驗大鼠的跳臺潛伏時間，減少3 min犯錯次數(shù)， 高、中劑量尤其明顯(P
2.2 頭頂一顆株對大鼠血及組織SOD，GSH-Px影響從表2和表3可見：頭頂一顆株注射液各劑量組與模型組比較均能提高血液、海馬、腦皮質(zhì)及肝腎SOD，GSH-Px表達值，高、中劑量組作用明顯(P
表1 頭頂一顆株對大鼠學習記憶能力的影響（略）
與模型組比較，*P
表2 頭頂一顆株對大鼠血及組織SOD的影響（略）
與模型組比較，*P
表2 頭頂一顆株對大鼠血及組織GSH-Px的影響 （略）
與模型組比較，*P
3 討論
衰老（Senility）是人體一種全身性生理變化過程，各系統(tǒng)、器官、組織和細胞都會出現(xiàn)這種過程，其機制復(fù)雜，并與多種因素有關(guān)。Lustbader等研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病的發(fā)病機制與氧化應(yīng)激有關(guān)，氧化應(yīng)激通過氧自由基損傷神經(jīng)元細胞，促進神經(jīng)元細胞凋亡或死亡，引起神經(jīng)系統(tǒng)功能減退［2］。SOD和GSH-Px是重要的抗氧化酶系，普遍存在于人體各組織中，包括血液、肝臟、線粒體和細胞質(zhì)，有對抗自由基損傷和清除氧自由基、降低細胞內(nèi)H2O2水平、減少自由基和過氧化物蓄積的作用。氧自由基被SOD轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O2后，GSH-Px可繼續(xù)作用在H2O2上，使之轉(zhuǎn)變成完全無害的水和氧。因此SOD，GSH-Px表達變化，已成為檢測衰老因素最為敏感和可靠的指標［3］。已有實驗研究報道，根據(jù)氟哌啶醇可使實驗動物產(chǎn)生僵住癥(強直性昏厥，catalepsy)的原理，用氟哌啶醇進行大鼠腹腔注射，對SOD和GSH-Px有抑制作用，是很好的動物老化造模劑［4］。本實驗用氟哌啶醇造模，觀察、探討頭頂一顆株對大鼠行為學變化及在不同組織對SOD，GSH-Px表達作用的影響，結(jié)果表明：頭頂一顆株能維持實驗大鼠學習記憶能力，顯著提高實驗大鼠血、肝、腎、海馬、腦皮質(zhì)SOD，GSH-Px表達量，具有上調(diào)抗氧化酶表達、改善記憶抗衰老作用。
參考文獻：
［1］ 謝宗萬，范崔生，朱兆儀，等. 全國中草藥匯編，第2版［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：225.
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第6篇：動物行為學研究范文
【摘要】 目的：探討中藥固本祛風湯治療變應(yīng)性鼻炎（AR）豚鼠模型的療效以及對其行為學的影響。方法：將 90 只豚鼠隨機分成正常對照組、模型組、辛芩顆粒組和中藥治療組，以卵清蛋白致敏激發(fā)造成變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型，分別給予中藥和辛芩顆粒，觀察各組動物的行為學改變。結(jié)果：中藥治療組癥狀顯著低于模型組，其差別有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。結(jié)論：固本祛風湯可明顯改善變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型的癥狀，從而發(fā)揮對 AR 的治療作用。
【關(guān)鍵詞】 變應(yīng)性鼻炎；豚鼠模型；固本祛風湯；行為學
〔Abstract〕 Objective To study the effect of Chinese medicine GubenQufeng prescription treating guinea pig model of allergic rhinitis and its reaction on behavioristics. Methods 90 guinea pigs were randomly pided into normal control group， model group， Xinqin particles and the Chinese medicinegroup， sensitized to ovalbumin excitation caused guinea pig model of allergic rhinitis， were given medicine and Xinqin particles， behavioristics observed after treatment. Results Symptoms of Chinese medicine treatment group was significantly lower than that of model group， There was a statistically significant difference (P < 0.05). Conclusion
GubenQufeng prescription can significantly improve the guinea pig model of allergicrhinitis symptoms， thereby play a role in the treatment of AR.
〔Key Words〕
Allergic rhinitis; Guinea pig model; GubenQufeng prescription; Behavioristics
變應(yīng)性鼻炎（Allergic Rhinitis， AR）是由 IgE 介導的Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病，由于大氣污染等多種原因，近年來發(fā)病率不斷升高。變應(yīng)性鼻炎在中醫(yī)屬于“鼻鼽”范疇，歷代醫(yī)家對本病的認識頗不一致，但都認為其發(fā)病與外界因素有密切關(guān)系。筆者經(jīng)過多年的臨床實踐，認為本病病機主要在于肺、脾、腎三臟的虛損，自擬固本祛風湯對變應(yīng)性鼻炎患者進行治療，在臨床上取得了顯著的療效。為進一步探討固本祛風湯對變應(yīng)性鼻炎治療的機制，我們將其用于卵清蛋白誘發(fā)的變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型，用固本祛風湯治療后觀察動物模型的行為學改變，為將其更好地用于臨床治療變應(yīng)性鼻炎提供實驗依據(jù)。
1
材料和方法
1.1
實驗動物
Hartley 豚鼠 90 只，清潔級，雌雄各半，體重 250~300 g，由中山醫(yī)科大學動物中心提供。在空調(diào)動物房飼養(yǎng)，溫度 25~28℃，濕度 40%~50%，飼養(yǎng)房避免過敏原存在，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后開始正式實驗。
1.1.1
藥物和試劑
固本祛風湯：制附子、黃芪、桂枝、全蟲、辛荑花、防風、肉桂、徐長卿、茯苓、甘草。
辛芩顆粒：由上海中醫(yī)大藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)（國藥準字 Z31020014）。
卵清蛋白（OVA）：由美國 Sigma 公司生產(chǎn)。
1.1.2
動物分組
將豚鼠隨機分為 6 個組：A 組（正常對照組），B 組（模型組），C 組（辛芩顆粒組），D 組（中藥低劑量組），E 組（中藥中劑量組），F(xiàn) 組（中藥高劑量組），每組 15 只。
1.1.3
造模方法
采用卵清蛋白致敏的方法[1-5]，對模型組和實驗組豚鼠分別以每只腹腔注射卵清蛋白混懸液 1 mL（卵清蛋白 0.3 mg 為抗原，氫氧化鋁 30 mg 為佐劑，溶于 1 mL 生理鹽水配成），隔日 1 次，共 7 次。
1.1.4
模型評價
于末次鼻腔激發(fā)后第 2 日，分別在模型組、對照組和實驗組隨機各選取 3 只，行 PCA 試驗。即每只于球后靜脈叢采血 0.3 mL，離心（3 000 r/min）10 min 后分離出血清，取 40 L 生理鹽水稀釋，分別配成 1:4、1:16、1:64、1:256 濃度；取健康白色大鼠，背部剃毛，將上述不同濃度血清分別注射于背部皮下，間隔 2 cm，并作記號；72 h 后，以卵清蛋白 1 mg、伊文斯蘭 5 mg 溶于 1 mL 生理鹽水，于大鼠尾靜脈注射，30 min 后觀察結(jié)果，藍斑直徑超過 5 mm 為陽性，即造模成功。觀察造模成功后，每側(cè)鼻腔均以 2% 卵清蛋白溶液用微量加樣器滴入 40 L，每日 1 次，共 7 次。
1.1.5
給藥方法
經(jīng) PCA 試驗藍斑呈陽性后，以 2% 卵清蛋白溶液滴鼻，從第 1 次 OVA 滴鼻當日起，實驗組和對照組于滴鼻前口飼給藥，中藥濃煎后用蒸餾水稀釋，調(diào)整濃度，使每只每天給藥量均為 3 mL；模型組和空白組每只每天予口飼 3 mL 生理鹽水。每日 1 次，共 7 次。
1.1.6
給藥劑量
實驗組：低劑量組：每日 7.5 g/kg；中劑量組：每日 15 g/kg；高劑量組：每日 30 g/kg。
對照組：辛芩顆粒每日 6 g 生藥 / kg。
1.2
標本采集
所有動物末次給藥后 1 h，于球后靜脈叢采血 3 mL，離心（3 000 r/min）15 min 后分離出血清，于-20℃ 保存。同時予 10% 水合氯醛溶液以 0.4 mL/kg 腹腔注射麻醉后，分離鼻骨前皮膚，咬除鼻骨，取下鼻中隔及其黏膜，于 4% 多聚甲醛溶液中固定。
1.3
指標檢測
1.3.1
行為學觀察
記錄每次激發(fā)后 30 min 內(nèi)動物的鼻癢、噴嚏、清涕出現(xiàn)的時間、次數(shù)與輕重程度，并打分。評分標準：0 分：無噴嚏、抓鼻、喘息及鼻分泌物；1 分：噴嚏 < 4個，輕度抓鼻，喘息急促，前鼻孔有鼻分泌物；2 分：噴嚏 4~10 個，頻繁抓鼻，喘息加重，鼻分泌物超過前鼻孔；3 分：噴嚏 > 11 個，持續(xù)抓鼻，因喘息致死，臉部布滿鼻分泌物?？偡?> 5 分表示造模成功[6]。
1.4
統(tǒng)計學方法
統(tǒng)計學方法采用 U 檢驗或 t 檢驗。
2
結(jié)
果
2.1
死亡情況
PCA 試驗：各組死亡 3 只；正常對照組和模型組：各死亡 2 只，剩余 10 只；中藥高劑量組、辛芩組：各死亡 1 只，剩余 11 只。
2.2
PCA 試驗
PCA 實驗發(fā)現(xiàn)，以正常對照組血清接種的大鼠背部無藍斑出現(xiàn)。以其余各組血清接種的大鼠背部，分別于 1:4，1:16，1:64，1:256 濃度處均出現(xiàn)藍斑，直徑最大的為 1.5 cm，最小的為 0.5 cm，濃度越小藍斑越小。
2.3
行為學改變
A 組僅偶有抓鼻現(xiàn)象，個別豚鼠打噴嚏；B 組于鼻腔滴入抗原后頻繁用前爪抓鼻，打噴嚏，并伴有清水樣鼻涕，部分豚鼠涕流滿面；其余各組癥狀輕微，出現(xiàn)輕度抓鼻及少數(shù)噴嚏，部分可見鼻涕。模型組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學意義 （P < 0.05），正常對照組與各實驗組之間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），結(jié)果見表 1。
3
討
論
變應(yīng)性鼻炎是一類主要由 IgE 介導的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病，近年來發(fā)現(xiàn)細胞因子水平與變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病關(guān)系密切[7，8]。
中藥的許多藥材經(jīng)現(xiàn)代研究表明，具有調(diào)整機體免疫狀況的作用，必將在變應(yīng)性鼻炎的治療中占據(jù)重要的地位。如黃芪可調(diào)節(jié)體液免疫，從而抑制組胺等介質(zhì)的釋放；細辛、桂枝等對過敏介質(zhì)有拮抗作用；防風、甘草、辛荑、五味子、烏梅、蟬蛻均有抗過敏作用。
筆者在多年的臨床實踐中認識到，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生主要是由肺氣虛弱，衛(wèi)外不固，導致外邪侵襲而成鼻鼽。此外，本病與先天腎氣不足和后天脾失健運也有非常密切的關(guān)系。歷代醫(yī)家多采用補肺固表、健脾扶正、補腎溫陽等方法辨證論治，方藥多采用玉屏風散、小青龍湯、桂枝湯、麻黃附子細辛湯等加減治療本病。固本祛風湯即是在玉屏風散的基礎(chǔ)上加減而成。主要由制附子、黃芪、桂枝、全蟲、辛荑花、防風、肉桂、徐長卿、茯苓、甘草等組成，本方以制附子、肉桂補腎溫陽；茯苓健脾利水；黃芪、桂枝益氣固表、助陽化氣；輔以防風、辛荑祛風通竅，全蟲搜風活絡(luò)，徐長卿祛風止癢。綜觀全方，具有補肺散寒，健脾益腎，祛風通竅之功效。現(xiàn)代藥理研究認為，黃芪具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，附子、防風、辛荑、徐長卿均有抗炎及增強免疫作用，可以降低炎癥細胞的通透性，減輕其水腫、浸潤等炎性反應(yīng)，辛荑還可以抗組胺及收斂鼻黏膜血管，減輕變應(yīng)性鼻炎所致的鼻癢、打噴嚏、流涕等癥狀。實驗研究結(jié)果顯示， 固本祛風湯治療組癥狀顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），表明固本祛風湯可以顯著改善變應(yīng)性鼻炎的癥狀，減輕其炎癥反應(yīng)，從而達到治療變應(yīng)性鼻炎的作用。
參考文獻
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第7篇：動物行為學研究范文
【關(guān)鍵詞】 圍絕經(jīng)期綜合征； 肝郁； 去勢； 慢性束縛應(yīng)激； 行為學
圍絕經(jīng)期綜合征指婦女絕經(jīng)前后由于性激素波動或減少所致的一系列軀體及精神心理癥狀，其中雌激素水平下降是引起該病的主要原因[1-2]。隨著生活水平提高，工作壓力加大，人口老齡化加劇，圍絕經(jīng)期綜合征的發(fā)病率逐年增高。肝氣郁結(jié)證是其主要中醫(yī)證型，中醫(yī)藥治療已經(jīng)取得較好的療效，而且副作用小[3-4]。目前比較認可的圍絕經(jīng)期綜合征肝郁模型是運用自然衰老的大鼠進行造模，然而由于其飼養(yǎng)周期長，成本高，來源非常稀少，因此相關(guān)的研究報道相對較少，中醫(yī)藥對其作用機制的了解受到很大的局限[5-6]。而去勢大鼠也是公認的圍絕經(jīng)期綜合征模型，其陰道脫落細胞涂片及血清性激素水平均和圍絕經(jīng)期發(fā)生的改變相似[7-8]。因此本研究擬用去勢大鼠模型，聯(lián)合慢性束縛應(yīng)激與孤養(yǎng)法進行造模，從外觀特征及行為學水平來探討該模型的有效性，為進一步探討中醫(yī)藥治療圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的科學內(nèi)涵提供基礎(chǔ)。
1 資料與方法
1.1 一般資料 健康雌性SD大鼠24只，體質(zhì)量（220±20）g，
清潔級，動物許可證號為SCXK （京） 2002-2009，由福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。光/暗周期為12 h/12 h（光照時間6：00-18：00），室溫（22±2）℃，相對濕度保持為30%～40%，喂常規(guī)顆粒飼料及飲用水。適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周后，利用敞箱實驗對每只大鼠進行行為學評分，水平運動和垂直運動總得分低于40分和高于160分的動物予以剔除，選擇各項行為學指標得分相近的24只大鼠，按體質(zhì)量分層采用隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為假手術(shù)組、去勢空白組、去勢模型組，每組各8只，組間體質(zhì)量及曠場評分比較差異無統(tǒng)計學意義（P
1.2 模型的建立 （1）去勢：動物分組后行去卵巢手術(shù)。手術(shù)前，兩組大鼠均禁食12 h，按體質(zhì)量腹腔注射2%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉，模型組從腹部正中線切口，切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組不切除卵巢，只將卵巢旁與卵巢等大的一塊脂肪組織切除。動物手術(shù)后自然修復(fù)兩周，在慢性束縛應(yīng)激前進行連續(xù)5 d陰道涂片檢測，觀察無成熟脫落細胞，證明卵巢切除完整，造模成功。假手術(shù)組動物的陰道脫落細胞依然呈典型的周期性變化。（2）慢性束縛：用慢性束縛應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法建立肝郁證大鼠模型，將去勢模型組大鼠置于束縛筒內(nèi)，管壁有若干通風口，通風良好，大鼠能夠自由呼吸，束縛應(yīng)激時間為6 h（9：00-15：00），連續(xù)束縛21 d，束縛應(yīng)激期間禁食禁水。假手術(shù)組和去勢空白組在同一時段內(nèi)也是禁食禁水。（3）孤養(yǎng)：去勢模型組單籠飼養(yǎng)，假手術(shù)組和去勢空白組群養(yǎng)，4只/籠。
1.3 體質(zhì)量與行為學檢測
1.3.1 外部特征及體質(zhì)量 每天造模前觀察并記錄各組大鼠的飲食、二便、毛發(fā)色澤、情緒行為等外觀方面的變化。分別于手術(shù)前1天，應(yīng)激前1天，應(yīng)激第7、14、21天上午8：00-9：00記錄各組大鼠體質(zhì)量。
1.3.2 曠場實驗 于動物分組前、應(yīng)激前1天和應(yīng)激第21天8：00-12：00進行測試。采用自制長×寬×高
=75 cm×75 cm×40 cm的敞箱，底面劃分成25個面積相等的方格。曠場的中央放一彩色瓶子激發(fā)大鼠的好奇心。拍攝并記錄5 min內(nèi)大鼠的水平運動格數(shù)（四爪皆進入記為1分）和垂直豎立次數(shù)（兩前爪騰空或攀附箱壁記為1分）。每只大鼠均從同一角落放入，測評結(jié)束后，及時記錄糞便顆粒數(shù)，并用75%酒精擦拭以消除氣味的影響，待酒精晾干后再進行下一次實驗。
1.3.3 糖水偏好實驗 分別在分組前、造模前和造模結(jié)束后檢測各組大鼠的糖水消耗率。按照文獻[9]的方法進行部分修改，實驗進行時，每只大鼠單籠喂養(yǎng)，實驗前，訓練實驗大鼠適應(yīng)含糖飲水12 h（20：00-次日8：00），10 h禁食禁水后，同時給予1%蔗糖水和純水各1瓶，1 h后調(diào)換蔗糖水和純水的位置，2 h后分別稱量純水消耗量及蔗糖水消耗量，計算糖水消耗率（糖水消耗率=糖水消耗量/總液體消耗量×100%）。
1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 19.0軟件，計量資料采用（x±s）表示，對所得一般性數(shù)據(jù)做正態(tài)分布檢驗和組間方差齊性檢驗，其中體質(zhì)量、糖水消耗率、曠場實驗的水平得分及垂直得分符合正態(tài)分布和方差齊性，用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗進行分析；曠場實驗中的修飾得分、糞便數(shù)目不符合正態(tài)分布則采用采用非參數(shù)檢驗進行分析，以P
2 結(jié)果
2.1 三組外部特征及體質(zhì)量變化比較 造模前，各組大鼠活潑好動，皮毛光澤好、糞便呈球形。造模結(jié)束后，大鼠毛發(fā)變得干枯、胡須下搭、行動遲緩、精神倦怠、嗜臥、進食進水量減少、大便稀軟。各組大鼠在行去勢手術(shù)前體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。去勢后兩周即應(yīng)激前1天，與假手術(shù)組相比，兩個去勢組的大鼠體質(zhì)量均顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P
2.2 三組對曠場行為的影響比較 手術(shù)前，各組大鼠在基線水平的水平得分和垂直得分差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；手術(shù)后兩周，即應(yīng)激造模前1天，和假手術(shù)組比較，去勢空白組和去勢模型組大鼠的水平活動得分均有顯著下降（P
2.3 各組對糖水偏好的影響比較 手術(shù)前，各組大鼠在基線水平的糖水消耗率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；手術(shù)兩周后，即應(yīng)激造模前，和假手術(shù)組比較，去勢空白組和去勢模型組的糖水消耗率均明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P
3 討論
課題組前期研究結(jié)果表明，肝郁是圍絕經(jīng)期綜合征的重要病理因素[4]。圍絕經(jīng)期女性常面臨家庭及事業(yè)等多種問題，精神壓力較大，多感所愿不遂、抑郁于內(nèi)，易形成心理應(yīng)激。因此，建立圍絕經(jīng)期綜合征肝郁動物模型對于本病機理的深入研究具有一定的現(xiàn)實意義。本文通過手術(shù)摘除卵巢人為地造成雌激素突然下降模擬圍絕經(jīng)期綜合征的狀態(tài)，該方法周期短、簡單易行，是常用的一種圍絕經(jīng)期綜合征造模方法[8]。目前普遍認為，肝郁多表現(xiàn)為認知、人格等心境障礙，病理反應(yīng)涉及植物神經(jīng)功能紊亂，神經(jīng)內(nèi)分泌免疫等調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的失衡[10]。多數(shù)學者認為，肝主疏泄的功能與心理―應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，從心理―應(yīng)激反應(yīng)來研究肝郁是近幾年的研究熱點[11-12]。慢性束縛應(yīng)激使動物自由行動受限，情緒受抑，比較接近中醫(yī)“情志不遂”致郁的發(fā)病學說；孤養(yǎng)則模擬了人類遠離社會、家庭的生存狀態(tài)，運用束縛制動聯(lián)合孤養(yǎng)法建立肝郁大鼠模型，可以制造較為純粹的挫折應(yīng)激和孤獨感受，是較好的負性心理應(yīng)激動物模型[13-14]。另外，因其軀體應(yīng)激因素較小，對機體無損傷性刺激，與人類身心性疾病的致病過程類似，近年來在肝郁相關(guān)研究中已被廣泛采用[15-16]。本研究表明，去勢模型組大鼠體重增加緩慢，探究行為減少，表現(xiàn)出情緒低落、興趣減退等癥狀，與圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證的形成過程相似。
圍絕經(jīng)期女性由于卵巢萎縮，雌激素分泌下降，糖和脂肪代謝發(fā)生紊亂，體脂分布異常，特別是腹內(nèi)脂肪積聚[14]。在本研究中大鼠在去勢手術(shù)后兩周體質(zhì)量顯著增加，該現(xiàn)象與女性在圍絕經(jīng)期的體質(zhì)量變化相吻合。在束縛應(yīng)激條件下，腎上腺皮質(zhì)醇顯著升高，機體對胰島素的敏感性增加，皮質(zhì)醇還可以促進蛋白質(zhì)分解，抑制其合成，同時影響糖和脂類的代謝[17]。因此本研究中去勢模型組在應(yīng)激開始后，體質(zhì)量幾乎沒有增長，甚至有下降的趨勢。
在行為學研究中，曠場實驗可以用來檢測動物在新奇環(huán)境中的活動度、探究行為、恐懼緊張狀態(tài)及警覺性，其中水平活動反映動物的活動度，垂直活動反映動物對新鮮環(huán)境的好奇程度，糞便粒數(shù)是大鼠緊張程度的表現(xiàn)[18]。肝氣郁結(jié)證核心癥狀之一是“缺失”，糖水偏好實驗則是用來檢驗動物對幸福事件反應(yīng)能力的變化，糖水消耗量及偏嗜度降低，表明動物對獎勵敏感度低，常作為一項反映動物愉悅體驗?zāi)芰Φ闹笜薣19-20]。本研究表明，大鼠在去勢后，水平運動得分及糖水消耗率明顯下降，在慢性束縛應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)的作用下，去勢模型組大鼠的行為活動進一步減少、糖水消耗率進一步降低，提示僅僅去勢即會使大鼠活動度、好奇程度及獎賞反應(yīng)的敏感度下降，但是肝郁造模后大鼠的各癥狀加劇，缺乏，興趣喪失，可能是由于大鼠卵巢切除后，生殖內(nèi)分泌功能開始衰退，對抗應(yīng)激損傷的能力降低，腦內(nèi)獎賞系統(tǒng)的一些神經(jīng)元發(fā)生結(jié)構(gòu)性損傷所致。
綜上所述，采用去勢及慢性束縛應(yīng)激聯(lián)合孤養(yǎng)三步法復(fù)合制作圍絕經(jīng)期綜合征肝郁大鼠模型，可以有效地模仿女性圍絕經(jīng)期由于卵巢功能衰退引起的情感障礙、情緒低落的臨床表現(xiàn)。但是值得注意的是，在研究過程中發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激誘導行為改變的易感性存在較大的個體差異，該方法并不能實現(xiàn)百分之百的成功率，因此研究過程中，必須適當增加樣本例數(shù)[21]。另外，圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的病理機制涉及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫等調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，運用現(xiàn)代分子生物學技術(shù)進一步闡明其發(fā)生發(fā)展機制，將為圍絕經(jīng)期綜合征肝郁的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。
參考文獻
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第8篇：動物行為學研究范文
[關(guān)鍵詞]針刺療法；穴組；慢性疲勞綜合征；抗氧化
[中圖分類號] R245.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）09（a）-0012-04
慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome，CFS）是以持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的嚴重疲勞為主要表現(xiàn)的一組證候群[1]。由于該病的臨床表現(xiàn)及發(fā)病機制復(fù)雜，相對于西醫(yī)學療法，針灸可從整體上調(diào)節(jié)機體功能，在CFS治療中具有明顯優(yōu)勢。從目前針灸治療CFS的研究現(xiàn)況來看[2-3]，大多數(shù)研究重點主要集中于針灸的起效機制和不同針灸療法的療效比較，缺少針對CFS基本病機的組穴研究。本實驗選用對CFS具有較好治療作用、符合CFS基本病機的“合谷、太沖”[4]為基礎(chǔ)穴組，再配以CFS臨床治療中常用的“三陰交”或“足三里”[5]組成新的穴組，觀察針刺各穴組對CFS小鼠的治療效果，比較各穴組的作用差異，分析其配伍作用。
1材料與方法
1.1實驗動物及分組
清潔級健康雄性昆明小鼠60只，4～6周齡，體重18～22 g，由大連醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（遼）2013-0003。飼養(yǎng)環(huán)境溫度（24±1）℃，相對濕度（50±10）%，小鼠可自由飲水及進食。適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按照完全隨機原則將小鼠分為5組：正常組、模型組、“合谷、太沖”組、“合谷、太沖、三陰交”組、“合谷、太沖、足三里”組，每組12只。實驗過程遵守國家科技部的《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》。
1.2主要器材及試劑
小鼠游泳池（長60 cm×寬50 cm×高35 cm）；束縛筒（根據(jù)有關(guān)文獻自制[6]，采用50 ml醫(yī)用注射器改裝，筒壁周圍用鋸條鋸出多條寬1 mm的通氣縫隙）；針灸針（0.16×7 mm，北京中研太和醫(yī)療器械有限公司）；小鼠束鼠器（北京翼諾泰科技發(fā)展有限公司）；懸尾實驗架（根據(jù)有關(guān)文獻自制[7-8]，將一木制橫梁水平放置，兩端固定，橫梁距離平面30 cm，四周封閉以阻擋小鼠視線，頂端開放以利于實驗觀察）；小鼠曠場實驗箱（根據(jù)有關(guān)文獻自制[9]，長50 cm×寬50 cm×高40 cm，無上蓋，內(nèi)壁黑色，底面平分為25個方格）；數(shù)碼攝像機（日本佳能公司）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。
1.3造模方法
采用慢性束縛+力竭游泳復(fù)合因素建立CFS動物模型[10]，造模因素每日施加1次，共12 d。上午束縛：將小鼠放入自制束縛筒內(nèi)，用注射器活塞調(diào)節(jié)筒內(nèi)空間大小，以小鼠呼吸不受限制又能產(chǎn)生束縛效果為度，束縛時間每3天循序加量1次，分別為1、1.5、2、2.5 h。下午游泳訓練：將小鼠放入水溫（26±2）℃的游泳池中進行游泳訓練，水深30 cm，前3 d為適應(yīng)性游泳，30 min/d，其后為力竭性游泳，以鼻尖沉入水中8 s不能浮出水面為力竭標準[11]。正常組不予造模，正常喂養(yǎng)。
1.4針刺方法
造模完成后，將小鼠固定于束鼠器內(nèi)，各針刺組分別針刺“合谷、太沖”穴，“合谷、太沖、三陰交”穴，“合谷、太沖、足三里”穴，參照《實驗針灸學》[12]定位相應(yīng)腧穴，雙側(cè)取穴，留針10 min，其間行針1次，施以平補平瀉捻轉(zhuǎn)手法，手法操作2 min，1次/d，共7 d。正常組與模型組僅給予相同時間和相同方式的固定，不予針刺。
1.5行為學觀察指標
各組小鼠治療后進行以下行為學測試。
1.5.1懸尾實驗 將鼠尾末端1 cm的部分用醫(yī)用輸液膠布固定在懸尾實驗架的木質(zhì)橫梁上，使小鼠呈倒懸狀態(tài)，用攝相機記錄小鼠5 min內(nèi)的活動狀態(tài)[7]，統(tǒng)計懸尾不動時間。
1.5.2曠場實驗 將小鼠放入曠場實驗箱底面的中央格內(nèi)，以四只爪子進入一格記為水平運動1分，兩只前爪騰空或攀附箱壁記為垂直運動1分，用攝像機記錄5 min內(nèi)的小鼠行為狀況，統(tǒng)計運動得分[9]。
1.6血清抗氧化指標檢測
行為學觀察結(jié)束后，摘小鼠眼球取血，分離取上層血清，置于-20°冰箱保存?zhèn)錅y。嚴格按照試劑盒說明檢測血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性。
1.7統(tǒng)計學方法
采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，符合正態(tài)分布的計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示。采用單因素方差分析進行組間比較，用LSD和SNK法進行兩兩比較，以P
第9篇：動物行為學研究范文
【摘要】 目的 觀察歸脾湯對抑郁模型大鼠血清白細胞介素-1β(IL-1β)和海馬神經(jīng)元白細胞介素-1受體Ⅰ型(IL-1RⅠ)表達的影響，探討其防治抑郁癥的可能機制。方法 采用慢性不可預(yù)見性刺激抑郁模型，將40只Wistar雌性大鼠分為對照組、模型組、鹽水組、中藥組，在第0日和第22日分別進行體重和行為學評分，放免法檢測血清IL-1β含量，免疫組化法檢測IL-1RⅠ表達。結(jié)果 與對照組比較，模型組和鹽水組大鼠的體重、行為學評分、血清IL-1β含量和海馬神經(jīng)元IL-1RⅠ表達均有顯著差異，而中藥組上述指標均無明顯差異。結(jié)論 歸脾湯的抗抑郁機制與維持正常的IL-1β分泌和IL-1RⅠ的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 抑郁癥；歸脾湯；白細胞介素-1β；白細胞介素-1受體Ⅰ型;大鼠
Abstract：Objective To study the effect of Guipi Decoction on serum IL-1β and hippocampus IL-1RⅠ expression of depression model rats， and approach its mechanism of treating depression. Methods The depression model was established by received chronic unpredictable stress stimulus. Forty female Wistar rats were pided into four groups：control group， model group， saline group and Chinese medicine group. All rats were weighed and taken Open-field test on 0 and 22nd day， the serum IL-1β was detected with radio-immunity， and the expression of IL-1RⅠ was detected with immunohistochemical method. Result Compared with the control group， the weight， behavior points， serum IL-1β， expression of IL-1RⅠ of the model group and the saline group changed obviously while that in Chinese medicine group did not. Conclusion The anti-depressive mechanism of Guipi Decoction is related to maintaining the normal excretion of IL-1β and IL-1RⅠ expression from the chronic stress.
Key words：depression；Guipi Decoction；IL-1β；IL-1RⅠ；rat
抑郁癥是一種常見的情感障礙性精神疾病，海馬組織受損、下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)功能亢進與其發(fā)病有關(guān)[1-2]。近年來，隨著精神神經(jīng)免疫學的飛速發(fā)展，許多報道提出血清白細胞介素-1β(IL-1β)在抑郁癥的發(fā)病中起重要作用[3]。白細胞介素是參與調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)軸中的調(diào)節(jié)因子。臨床研究表明，歸脾湯是對癥治療抑郁癥的中醫(yī)經(jīng)典方劑，并取得了良好的療效[4-5]，但其作用機制尚不十分清楚。本實驗主要從免疫方面觀察歸脾湯對抑郁模型大鼠IL-1β及海馬神經(jīng)元白細胞介素-1受體Ⅰ型(IL-1RⅠ)表達的影響，探討其抗抑郁機制。
1 材料與方法
1.1 動物
健康雌性Wistar 大鼠，清潔級，體重(220±20)g，中國醫(yī)科大學動物實驗中心提供，合格證號：SCXK(遼)2003-0009。經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，室溫18～20 ℃，濕度70%～80%，選擇體重和行為學評分相近的40只大鼠，隨機分為對照組、抑郁癥模型組(模型組)、抑郁癥＋生理鹽水組(鹽水組)和抑郁癥模型＋歸
脾湯組(中藥組)，每組10只。
1.2 抑郁癥大鼠模型的建立
除對照組外，其余3組均復(fù)制慢性不可預(yù)見性刺激抑郁模型[6]，21 d內(nèi)對大鼠施加電擊足底(36 V交流電，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、搖晃(5 min)、夾尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每日1種刺激方法，隨機施加，每種刺激重復(fù)3～4次。各組大鼠在第22日均采用Open-field法測行為并稱體重。
1.3 給藥
歸脾湯方由白術(shù)30 g、茯神30 g、黃芪30 g、龍眼肉30 g、酸棗仁30 g、人參15 g、木香15 g、甘草8 g、當歸3 g、遠志3 g組成。藥品購于遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥局，按照常規(guī)煎煮方法制成水煎劑，濃縮至1 g/mL，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩？瞻捉M不給藥；模型組只施加灌胃動作但不給藥；鹽水組于每次刺激前30 min灌胃3 mL生理鹽水；中藥組，根據(jù)臨床成人(70 kg)用量按體重折算成大鼠體重(200 g)灌胃劑量，每日每100 g體重給藥1.5 mL，于每次刺激前30 min灌服，共給藥21 d。
1.4 大鼠體重及行為學檢測
在實驗開始的第0日和第22日，用GS-671電子秤(大連星海生物有限公司)對實驗大鼠稱重，并用Open-field法檢測行為學得分，計數(shù)3 min內(nèi)大鼠水平穿越格數(shù)為水平得分，以前肢抬起次數(shù)為垂直活動得分。
1.5 大鼠血清白細胞介素-1β檢測
實驗第22日，用20%烏拉坦(0.4 mL/100 g)腹腔麻醉，取腹主動脈血2 mL，離心取血清，低溫冷藏待測，采用放免法檢測血清IL-1β濃度，試劑盒購于北京偉業(yè)生物科技有限公司，此項工作由總醫(yī)院內(nèi)分泌實驗室協(xié)助完成。
1.6 海馬神經(jīng)元白細胞介素-1受體Ⅰ型表達的檢測
取血后，剖開胸腔，經(jīng)左心室快速灌流37 ℃生理鹽水100～200 mL，繼之灌注4 ℃的4%多聚甲醛溶液(PBS配制，pH 7.2～7.4)200～300 mL，然后剝離腦組織，置于同濃度多聚甲醛溶液中后固定48 h以上待測，采用免疫組化法，試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司，顯微鏡下觀察并用BI-2000圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)測定IL-1RⅠ表達的平均灰度值和陽性細胞數(shù)。
1.7 統(tǒng)計學方法
采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，采用方差分析和兩兩比較，如方差不齊時使用秩和檢驗。
2 結(jié)果
(見表1～表4)表1 各組大鼠體重變化(略)注：與對照組比較，*P＜0.01；實驗過程中，模型組和鹽水組實驗動物各死亡1只(下同)表2 各組大鼠行為學得分(略)表3 各組大鼠血清IL-1β水平變化(略)表4 歸脾湯對大鼠海馬神經(jīng)元IL-1RⅠ表達的影響(略)
3 討論
IL-1β是前炎癥細胞因子，導致HPA軸過度活躍，引起皮質(zhì)醇的增高，通過損傷海馬、藍斑等處，而使抑郁癥患者產(chǎn)生認識功能障礙、情緒低落、失眠等行為和學習能力改變的癥狀[7]。這可能是因為IL-1R在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的下丘腦和海馬密度最高。IL-1的受體(IL-1R)有2種，分別為IL-1RⅠ型和IL-1RⅡ型，通過識別和接受的信號準確無誤的放大并傳遞到細胞內(nèi)部，啟動一系列胞內(nèi)生化反應(yīng)，從而影響相應(yīng)靶基因的表達發(fā)揮生物學效應(yīng)；只要有小于2%的IL-1R與IL-1結(jié)合，即可發(fā)生IL-1的生物學效應(yīng)。
IL-1β水平增高可出現(xiàn)抑郁癥狀，其作用機制可能是：①外周和中樞IL-1β的增加和炎癥反應(yīng)系統(tǒng)的激活，其最終可歸結(jié)于HPA 軸的高度激活。正常情況下，過度活躍的HPA軸可通過負反饋機制得到調(diào)節(jié)平衡，而抑郁癥時打亂這種負反饋機制。②神經(jīng)遞質(zhì)功能減低是抑郁癥發(fā)病的重要機制之一，而IL-1與5-羥色胺(5-HT)關(guān)系密切，它能激活3-二氧化酶(IDO)，耗竭5-HT前體(TRP)，而5-HT的合成很大程度依賴TRP，從而減低突觸間隙的5-HT水平，引起5-HT受體的密度降低和功能減退。另外，IL-1β能使下丘腦和腦干內(nèi)去甲腎上腺素的含量下降。
臨床研究發(fā)現(xiàn)，有效的抗抑郁藥有抗免疫激活的效應(yīng)，影響IL-1β的代謝和受體的表達，并且可以阻止IL-1β引起的精神癥狀。本實驗結(jié)果表明，歸脾湯可對抗慢性不可預(yù)見性應(yīng)激導致的大鼠體重、行為學得分下降，同時，模型組和鹽水組IL-1β、IL-1RⅠ的表達顯著高于對照組，提示抑郁狀態(tài)時IL-1β含量升高和IL-1RⅠ表達上調(diào)，與Maes等[3]的結(jié)果一致。而中藥組血清IL-1β濃度和IL-1RⅠ的表達與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，說明歸脾湯能維持正常IL-1β的分泌和受體的表達，可使抑郁癥狀好轉(zhuǎn)，這可能是其抗抑郁的機制之一。
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