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一、組織領(lǐng)導(dǎo)1、成立“**區(qū)城區(qū)鍋爐煙塵污染整治環(huán)保專項(xiàng)行動(dòng)領(lǐng)導(dǎo)小組”,
二、職責(zé)分工各成員單位要切實(shí)重視煙塵整治工作,確保工作順利開展。各成員單位職責(zé)和任務(wù),具體分工為:(一)區(qū)環(huán)保局:1、牽頭協(xié)調(diào)煙塵整治聯(lián)合執(zhí)法活動(dòng);2、對煙塵污染基本情況調(diào)查摸底;3、負(fù)責(zé)環(huán)境違法問題的查處和整改措施的落實(shí);4、掌握和通報(bào)煙塵整治工作進(jìn)展情況;5、負(fù)責(zé)區(qū)直單位鍋(窯)爐煙塵污染整治工作。(二)區(qū)經(jīng)委:負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查應(yīng)淘汰的落后生產(chǎn)能力、工藝及產(chǎn)品,并依法提請區(qū)政府予以關(guān)閉、取締。(三)區(qū)質(zhì)監(jiān)分局負(fù)責(zé)對鍋(窯)爐安裝、使用、檢驗(yàn)、改造等監(jiān)督管理,以及鍋(窯)爐操作人員的資格考核。(四)區(qū)安全生產(chǎn)監(jiān)督管理局加強(qiáng)鍋(窯)爐使用單位安全生產(chǎn)監(jiān)管,促使鍋(窯)爐使用單位完善安全生產(chǎn)條件,避免或減輕安全事故。(五)區(qū)工商分局對申辦或年審營業(yè)執(zhí)照的鍋(窯)爐使用單位,嚴(yán)格進(jìn)行核查。(六)區(qū)公安分局保障煙塵整治專項(xiàng)行動(dòng)順利開展,制止暴力抗法事件。
三、煙塵污染整治要求1、按照國家經(jīng)貿(mào)委《淘汰落后生產(chǎn)能力、工藝和產(chǎn)品的目錄》規(guī)定,“0.4-0.7噸/時(shí)立式水管固定爐排鍋爐”應(yīng)予淘汰,由經(jīng)貿(mào)部門實(shí)施;2、經(jīng)檢驗(yàn)、檢測,達(dá)不到安全要求的鍋(窯)爐禁止使用,沒有合法操作使用證件的司爐工不準(zhǔn)上崗,由質(zhì)監(jiān)部門實(shí)施;3、對現(xiàn)有1蒸噸以下的燃煤鍋爐,必須改油、改氣、改燒無煙煤,1蒸噸以上燃煤鍋(窯)爐,還必須配套使用除塵設(shè)施,以確保煙塵和噪聲符合國家排放標(biāo)準(zhǔn);今后,熱電廠供熱范圍外新建或更換的1蒸噸以上燃煤鍋(窯)爐,必須嚴(yán)格執(zhí)行環(huán)境影響評價(jià)和“三同時(shí)”制度,由環(huán)保部門監(jiān)督實(shí)施。4、對辦理營業(yè)執(zhí)照的鍋(窯)爐使用單位,沒有依法進(jìn)行環(huán)境影響評價(jià)、未經(jīng)環(huán)保部門審批同意的,工商部門不予辦理營業(yè)執(zhí)照或營業(yè)執(zhí)照年檢;5、根據(jù)鍋(窯)爐使用單位的具體違法情節(jié),由具有相關(guān)行政處罰權(quán)的單位依法予以處罰;6、各成員單位要組織本單位執(zhí)法人員認(rèn)真開展執(zhí)法檢查,并積極參加聯(lián)合執(zhí)法檢查活動(dòng)。執(zhí)法人員要文明執(zhí)法、嚴(yán)格執(zhí)法,采取積極穩(wěn)妥的工作方法,以說服教育、引導(dǎo)為主,防止出現(xiàn)過激行為,保持社會(huì)穩(wěn)定。各成員單位要加強(qiáng)聯(lián)系,協(xié)調(diào)配合,互通信息,建立健全違法案件移送制度,確保煙塵整治專項(xiàng)行動(dòng)的順利進(jìn)行。
四、實(shí)施時(shí)間專項(xiàng)行動(dòng)自發(fā)文之日至**年8月31日實(shí)施。
活動(dòng)主題:遠(yuǎn)離煙草,珍愛生命
活動(dòng)時(shí)間:2012年5月30日上午8:30-10:00
簽到時(shí)間:2012年5月30日上午8:00
活動(dòng)地點(diǎn):
活動(dòng)領(lǐng)隊(duì):
活動(dòng)流程:
1、8:00準(zhǔn)時(shí)集合簽到
2、和衡水學(xué)院愛心社會(huì)合
3、做活動(dòng)動(dòng)員和倡議
4、條幅上簽名
5、向市民進(jìn)行控?zé)熜麄骱桶l(fā)放宣傳資料
6、參與活動(dòng)志愿者合影,現(xiàn)場活動(dòng)總結(jié)
聯(lián)盟準(zhǔn)備材料:主題條幅一個(gè)、控?zé)熜麄骺ㄆ?00張。
注意事項(xiàng):
1、。宣傳人員現(xiàn)場絕對禁止吸煙。
2019幼兒園世界無煙日活動(dòng)策劃方案
活動(dòng)背景及目的:
2019年5月31日是世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)起的第29個(gè)世界無煙日,口號是 煙草致命如水火無情,控?zé)熉募s可挽救生命 ?;顒?dòng)目的讓孩子們了解吸煙有害自己及家人的健康,吸煙更會(huì)污染環(huán)境,懂得保護(hù)環(huán)境就是從身邊的點(diǎn)滴做起。
活動(dòng)時(shí)間:2019年5月30日
參加人員:中班組全體師生
活動(dòng)地點(diǎn):幼兒園內(nèi)
活動(dòng)內(nèi)容
1、認(rèn)識禁煙標(biāo)志
2、了解吸煙對身體和環(huán)境的危害。
(1)通過故事、圖片教育幼兒吸煙對人體的危害
圖片上的人長得怎樣?他為什么會(huì)咳嗽、生病?幼兒將自己調(diào)查的資料與大家共享 ,(有吸煙的人牙、衣服、手指怎樣?)
圖上的人被什么嗆得直流眼淚?阿姨肚子里的小寶寶為什么哭?
加油站為什么發(fā)生火災(zāi)?知道吸煙容易造成火災(zāi)。
教師與幼兒共同小結(jié):吸煙污染環(huán)境,使空氣變得渾濁;吸煙既危害自己,又危害別人的身體健康;吸煙容易引起火災(zāi),造成財(cái)產(chǎn)損失。理解詞語:污染
3、宣傳戒煙:
發(fā)放宣傳單,通過大手牽小手的活動(dòng),向家長普及吸煙有害健康的知識。
4、繪畫 禁止吸煙 標(biāo)志
指導(dǎo)幼兒每人制作1個(gè) 禁止吸煙 的標(biāo)志帶回家里,鼓勵(lì)幼兒人人爭做禁止吸煙的小宣傳員。
【附件】控?zé)熤R納入教學(xué)內(nèi)容
① 健康教育課 ②生物課 ③生化課 ④語文課 ⑤數(shù)學(xué)課 ⑥美術(shù)課 ⑦其它
學(xué)生參與控?zé)熃逃男问?/p>
① 主題班會(huì) ②同伴教育 ③科普教育 ④參與社區(qū)的控?zé)熜麄骰顒?dòng) ⑤其它
組織拒吸第一支煙的簽名活動(dòng)情況
① 近年來連續(xù)開展簽名活動(dòng) ②組織過二次 ③從未組織過
開展致親人戒煙一封信活動(dòng)的情況
組織情況
1、近三年來組織的情況
①一次 ②二次 ③三次 ④三次以上 ⑤從未開展(調(diào)查結(jié)束)
2、在三年開展活動(dòng)中學(xué)生與家長的參與情況
①參加活動(dòng)的班級數(shù)
②參加活動(dòng)的學(xué)生數(shù)
③家長參與活動(dòng)的反饋數(shù)
活動(dòng)的效果
1、對創(chuàng)建無煙學(xué)校的影響
(1)有利于爭取家長支持無煙學(xué)校的創(chuàng)建
①非常重要 ②重要 ③沒關(guān)系 ④無所謂
最新幼兒園世界無煙日、三八節(jié)活動(dòng)方案范例(3篇)策劃書 策劃方案
(2)擴(kuò)大無煙學(xué)校創(chuàng)建活動(dòng)的教育影響
①非常重要 ②重要 ③沒關(guān)系 ④無所謂
2、學(xué)生參與活動(dòng)的態(tài)度與作用
(1)加深學(xué)生對吸煙有害健康的認(rèn)識
①非常重要 ②重要 ③沒關(guān)系 ④無所謂
(2)有利于學(xué)生與家長之間對控?zé)熤R的交流
①非常重要 ②重要 ③沒關(guān)系 ④無所謂
(3)活動(dòng)對家長的吸煙行為起到勸導(dǎo)作用
①非常重要 ②重要 ③沒關(guān)系 ④無所謂
(4)學(xué)生僅僅是為了完成學(xué)校布置的任務(wù)
①非常認(rèn)真 ②認(rèn)真 ③不認(rèn)真 ④無所謂
3、家長參與活動(dòng)的態(tài)度
(1)表示戒煙或不在孩子面前吸煙
①非常支持 ②支持 ③做不到 ④無所謂
(2)家長在校園內(nèi)做到不吸
①非常支持 ②支持 ③做不到 ④無所謂
4、學(xué)校對開展此項(xiàng)活動(dòng)的認(rèn)識
(1)有助于對學(xué)生開展吸煙有害健康的教育
①非常重要 ②重要 ③一般 ④作用不大 ⑤無所謂
(2)是對學(xué)生參與控?zé)熃逃囊环N教育方法
①非常重要 ②重要 ③一般 ④作用不大 ⑤無所謂
(3)活動(dòng)開展讓孩子勸阻家長遠(yuǎn)離煙草,減少被動(dòng)吸煙的有效方法
①非常重要 ②重要 ③一般 ④作用不大 ⑤無所謂
(4)此活動(dòng)對學(xué)校其它教學(xué)的影響
①可相互促進(jìn) ②影響其它教學(xué)任務(wù) ③不影響 ④無所謂
5、學(xué)校今后是否還組織此項(xiàng)活動(dòng)
1 動(dòng)物的選擇
1.1 動(dòng)物來源確定 動(dòng)物來源要選擇國家、省相關(guān)部門確定的醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,其中包括《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l件》、《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理實(shí)施細(xì)則》的規(guī)定并取得醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)條件的合格證明書。 其要求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的同種屬、同品系、同月齡、性別雌雄比例。
1.2 熟悉并了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 在實(shí)驗(yàn)前,準(zhǔn)備階段要到相應(yīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室對參加實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物進(jìn)行初步的觀察、了解,主要觀察其生活習(xí)性、了解飼養(yǎng)要求等,重點(diǎn)掌握實(shí)驗(yàn)的組織、器官等生理解剖部位、特點(diǎn)、并作初步評估。
2 預(yù)實(shí)驗(yàn)
預(yù)實(shí)驗(yàn)是對研究技術(shù)、方法的訓(xùn)練,對設(shè)計(jì)方案的實(shí)踐評估,同時(shí)可以了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對各種處理因素的反應(yīng)情況,以及在試驗(yàn)過程中,動(dòng)物在生理、精神狀態(tài)、飼養(yǎng)等方面可能出現(xiàn)的一些問題作以了解,以便在正式實(shí)驗(yàn)過程中作好提前的預(yù)防、分析,保證實(shí)驗(yàn)過程的順利實(shí)施。
3 實(shí)驗(yàn)方法
3.1 保證動(dòng)物或預(yù)行實(shí)驗(yàn)靜脈的隨機(jī)分組 采用抽簽法,在正式實(shí)驗(yàn)前1周對動(dòng)編號、打印分組,并保證實(shí)驗(yàn)靜脈的完好。
3.2 設(shè)置對照組 實(shí)驗(yàn)組、對照組應(yīng)具有可比性,包括對象、飼養(yǎng)環(huán)境與方法,操作、處理因素等。
3.3 設(shè)計(jì)方案 要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇設(shè)計(jì)方案。
3.4 做好觀察指標(biāo)的管理 選擇必要的觀察指標(biāo),如實(shí)驗(yàn)室檢查、X線、病理、細(xì)菌 培養(yǎng)等,記錄結(jié)果要擬訂專用表格,必要時(shí)建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病 歷與檔案,具體項(xiàng)目包括日期、時(shí)間、實(shí)驗(yàn)者、取標(biāo)本者以及樣本的編號排序等要逐一詳實(shí)記錄并簽字。
4 實(shí)驗(yàn)效果
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要消耗一定的人力、物力、財(cái)力,所以對整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程必須周密布置,諸如以上各項(xiàng)做法,盡最大限度地保 障動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量。以達(dá)到預(yù)期的目的。
5 討論與分析
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)盡管有一定的不足,但在人體實(shí)驗(yàn)之前,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是很重要的醫(yī)學(xué)研究方法,因此,從事醫(yī)療科研人員應(yīng)該更多熟悉、了解和掌握有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識和技巧,為臨床科研工作做好基礎(chǔ)。
一 什么是3R
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類的替身為人類的科學(xué)發(fā)展起到了不可替代的作用,隨著科技的發(fā)展,生命科學(xué)研究領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)動(dòng)物使用數(shù)量猛增,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的痛苦及其權(quán)利引起了社會(huì)公眾的極大關(guān)注,特別是在西方動(dòng)物保護(hù)運(yùn)動(dòng)的推動(dòng)下。1959年拉舍爾和微生物學(xué)家伯可(Burch)在其著作《人道實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理》(Principles of HumaneExperimental Technique)一書中第一次系統(tǒng)提出了3R(reduce,refine,replace)理論。之后,歐美各國成立了許多科學(xué)研究用動(dòng)物福利的保護(hù)組織,如成立于1969年的英國醫(yī)學(xué)試驗(yàn)用動(dòng)物中替代法基金會(huì)(FRAME)和國際動(dòng)物福利基金會(huì)(IFAW),1980年成立的人道對待動(dòng)物協(xié)會(huì)(PETA),1981年約翰霍普金斯大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)替代中心(CAAT)成立,這些基金會(huì)或研究機(jī)構(gòu)的成立,推動(dòng)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利立法的進(jìn)程,也促進(jìn)新的科學(xué)研究方法的快速發(fā)展。
3R理論自形成以來一直影響著西方發(fā)達(dá)國家有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的法規(guī),如美國的動(dòng)物福利法案(1966年),瑞士的動(dòng)物福利法(1979年)。進(jìn)入20世紀(jì)80年代后,歐美等發(fā)達(dá)國家動(dòng)物福利法的發(fā)展進(jìn)入快速發(fā)展的軌道,如英國的動(dòng)物科學(xué)實(shí)驗(yàn)程序法案(1986年),瑞典1988年公布實(shí)施了《動(dòng)物福利法》(2002年修訂),丹麥1991年實(shí)施了《動(dòng)物福利法》,1993年德國實(shí)施了《動(dòng)物福利法》(1998年修訂),葡萄牙1995年公布實(shí)施了《保護(hù)動(dòng)物法》,日本《人道對待和管理動(dòng)物法》(2005年)??偟膩碚f,歐洲大多數(shù)國家的動(dòng)物福利保護(hù)立法是比較完備的,在世界上具有重要的影響。我國1988年了《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》,科技部2006年了《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》,在規(guī)范我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理的同時(shí),也順應(yīng)了國際對動(dòng)物福利的要求,但我國還沒有制定專門的動(dòng)物福利法。
二 3R的含義
3R中減少的含義是指在科學(xué)研究中,使用較少的動(dòng)物獲取同樣多的試驗(yàn)數(shù)據(jù)或使用一定數(shù)量的動(dòng)物能獲得更多試驗(yàn)數(shù)據(jù)的方法。如果某一研究方案中必須使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,同時(shí)又沒有可靠替代方法選擇,則應(yīng)考慮把使用動(dòng)物的數(shù)量降低到實(shí)現(xiàn)科研目的所必需的最小量。優(yōu)化是指通過改善動(dòng)物設(shè)施、飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)條件,精心設(shè)計(jì)技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)手段,精煉實(shí)驗(yàn)操作技術(shù),盡量減少實(shí)驗(yàn)過程對動(dòng)物機(jī)體的損傷、減輕動(dòng)物遭受的痛苦和應(yīng)激反應(yīng),使動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得出科學(xué)的結(jié)果。優(yōu)化的內(nèi)容是比較廣泛的,簡單概括就是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)科學(xué)化、動(dòng)物試驗(yàn)規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化的過程。替代是指一項(xiàng)試驗(yàn)方法能減少動(dòng)物使用數(shù)量,或能優(yōu)化試驗(yàn)程序以減輕動(dòng)物痛苦或增加動(dòng)物福利;或者能用非動(dòng)物系統(tǒng)或者系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上比較低等的動(dòng)物種類代替高等級動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如用無脊椎動(dòng)物代替哺乳類動(dòng)物。根據(jù)是否使用動(dòng)物或動(dòng)物組織,替代可分為“相對替代”和“絕對替代”,前者指使用脊椎動(dòng)物細(xì)胞、組織及器官進(jìn)行體外試驗(yàn),或用低等動(dòng)物替代高等動(dòng)物的試驗(yàn),而后者則是完全不使用動(dòng)物,如采用培養(yǎng)的細(xì)胞或組織、計(jì)算機(jī)模型等。根據(jù)替代的程度,替代可分為“部分替代”和“完全替代”,前者指利用其他實(shí)驗(yàn)手段代替動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的某一部分,后者指用新的非動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法取代原來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法。
對于化妝品安全評價(jià)中替代方法,可以選擇體外培養(yǎng)物(細(xì)胞、組織或器官的培養(yǎng)物)代替實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、低等動(dòng)物代替高等動(dòng)物、人群研究資料、數(shù)學(xué)和計(jì)算機(jī)模型的應(yīng)用,以及物理和化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用(如皮膚功能的測定)??梢哉f開發(fā)新的體外試驗(yàn)方法,減少、優(yōu)化和替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)既是保護(hù)動(dòng)物權(quán)益的需要,也是科技進(jìn)步和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要。
三 歐盟化妝品安全性評價(jià)動(dòng)物福利的背景
歐盟有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的法規(guī)體系由區(qū)域?qū)哟魏蛧鴥?nèi)層次兩個(gè)體系組成,既有歐盟及其大多數(shù)成員國參加的歐洲條約,又有歐盟各國各自動(dòng)物保護(hù)的法律規(guī)定,還有由政府部門和行業(yè)協(xié)會(huì)的管理規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)。
1986年3月18日,在法國的斯特拉斯堡通過了《用于實(shí)驗(yàn)和其他科學(xué)目的的脊椎動(dòng)物保護(hù)歐洲公約》(European Conventionfor the Protection of VertebrateAnimals used for Experimental andother Scientific Purposes,CETSno.123),該公約于1991年1月1日生效。公約旨在減少各成員國實(shí)驗(yàn)的次數(shù)以及使用動(dòng)物的數(shù)量,鼓勵(lì)成員國積極開展動(dòng)物替代方法的研究,并僅在沒有動(dòng)物替代方法的情況下才用動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選取應(yīng)遵從明確的定量準(zhǔn)則,并應(yīng)得到良好的照顧,盡可能免受可避免的痛苦。
為了落實(shí)歐洲公約的要求,協(xié)調(diào)各成員國的國內(nèi)立法,消除貿(mào)易壁壘,防止競爭出現(xiàn)扭曲,避免影響共同市場的建立和功能,歐洲共同體于1986年11月24日在布魯塞爾頒布了《關(guān)于使各成員國有關(guān)用于實(shí)驗(yàn)和其他科學(xué)目的動(dòng)物的保護(hù)法律、法規(guī)和行政規(guī)章接近的理事會(huì)指令》(即指令86/609/EEC)。指令正文和附件的規(guī)定與公約的規(guī)定基本一致。指令實(shí)施24年來,已成為歐盟范圍內(nèi)從事科學(xué)研究、檢驗(yàn)用動(dòng)物普遍遵守的準(zhǔn)則。最新的報(bào)道指出,為了適應(yīng)歐盟范圍擴(kuò)大和新的形勢發(fā)展,如何使歐盟新成員國在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利方面協(xié)調(diào)一致成為立法者考慮的問題,2008年,歐洲委員會(huì)決定重新修訂86/609/EEC指令。2010年9月8日,歐洲議會(huì)表決通過了新指令2010/63/EU,取代已實(shí)施25年了舊指令,成為保護(hù)實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物共同遵守的法律在歐盟27個(gè)成員國中得到實(shí)施,以規(guī)范每年在歐洲實(shí)驗(yàn)室超過1200萬只動(dòng)物的使用。BBC認(rèn)為,隨著2009年12月歐盟里斯本條約的推出,動(dòng)物福利與反歧視、推動(dòng)性別平等、保護(hù)人類健康和維護(hù)人類福利,共同成為歐盟的4個(gè)核心價(jià)值。新法規(guī)修訂體現(xiàn)了以“3R”為中心的原則,具體涉及動(dòng)物試驗(yàn)的倫理評估和建立持續(xù)的倫理審核制度,非人靈長類動(dòng)物的使用,加強(qiáng)法規(guī)的透明度和執(zhí)行力,加
強(qiáng)成員國之間動(dòng)物倫理的合作等內(nèi)容。新條款中也提到了相關(guān)的宗教規(guī)則,傳統(tǒng)習(xí)俗和民族傳統(tǒng)應(yīng)該受到尊重。根據(jù)程序,各成員國轉(zhuǎn)換為國內(nèi)法的立法限期為2012年11月,各成員國法律條款的實(shí)施期限為2013年1月1日。
四 歐重化妝品安全性評價(jià)動(dòng)物福利的要求
歐洲是唯一有法規(guī)禁止使用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行化妝品安全性評價(jià)的地區(qū)。眾所周知,歐洲化妝品管理的法規(guī)是76/768/EC。1986年歐洲保護(hù)試驗(yàn)用動(dòng)物的歐洲公約和理事會(huì)指令后,迫使藥品、生物制品、化學(xué)品等與安全評價(jià)相關(guān)的行業(yè)執(zhí)行這一共同的法律規(guī)定,化妝品行業(yè)也不例外,研發(fā)新的體外試驗(yàn)方法成為化妝品行業(yè)的一項(xiàng)重要任務(wù)。歐盟成員國先后成立了專門的研究機(jī)構(gòu),1989年,德國成為首個(gè)建立國家替代方法研究驗(yàn)證中心的國家。1990年歐盟在意大利成立了歐洲替代方法驗(yàn)證中心(ECVAM),專門從事替代方法的驗(yàn)證和法規(guī)認(rèn)可工作。歐洲化妝品、盟洗用品和香水協(xié)會(huì)(COLIPA)建立了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法委員會(huì)(SCAAT),以執(zhí)行法律的規(guī)定和保障化妝品工業(yè)的發(fā)展,接受應(yīng)用非動(dòng)物的替代方法進(jìn)行化妝品安全性評價(jià)。各大公司投入巨額經(jīng)費(fèi)從事替代方法的研究。歐洲框架計(jì)劃也投入巨額研發(fā)經(jīng)費(fèi)資助非動(dòng)物試驗(yàn)方法的研發(fā),一大批新的化妝品毒理學(xué)安全性評價(jià)的體外試驗(yàn)方法被提出,進(jìn)入科學(xué)驗(yàn)證程序和被法規(guī)接受??茖W(xué)家和管理者逐步認(rèn)同不再信賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的新的毒理學(xué)試驗(yàn)體系。
在技術(shù)進(jìn)步的推動(dòng)下,2003年,歐委會(huì)通過了關(guān)于76/768/EEC的第七次修訂,即2003/15/EC指令,該指令明確了取消動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的時(shí)間表。指令明確規(guī)定自2009年3月11日起,禁止使用動(dòng)物進(jìn)行化妝品急性毒性、眼刺激和過敏試驗(yàn),2013年將全面禁止在動(dòng)物身上進(jìn)行化妝品和原料的安全性測試,也不允許成員國從外國進(jìn)口和銷售違反上述禁令的化妝品。該規(guī)定對歐盟內(nèi)部成員國和非歐盟國家進(jìn)口的產(chǎn)品的要求是一致的。
這一指令的出臺(tái),可以說是在歐洲范圍內(nèi),將動(dòng)物福利和3R的原則從最初的理念(1959年),到立法約束(1986年)、再到技術(shù)進(jìn)步(2003年),再到最后形成法律禁令(2009年),穩(wěn)步推進(jìn)分步實(shí)施??陀^上形成了技術(shù)壁壘,影響到化妝品的進(jìn)出口貿(mào)易。為了進(jìn)一步明確2003/15/EC指令的要求和提高可操作性,2006年6月7日歐盟委員會(huì)頒布了《依照76/768/EEC沒有使用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的聲明指引》(即2006/406/EC)。指引規(guī)定,對不使用動(dòng)物試驗(yàn)的化妝品,其產(chǎn)品制造商或負(fù)責(zé)產(chǎn)品投放市場信息的個(gè)人(商),可以聲明其產(chǎn)品沒有經(jīng)過動(dòng)物試驗(yàn)。這一聲明不是強(qiáng)制性的。對于“非動(dòng)物試驗(yàn)”的標(biāo)簽聲明的使用不能誤導(dǎo)消費(fèi)者,消費(fèi)者能從知情的選擇中獲得真實(shí)的利益。該聲明的使用不應(yīng)導(dǎo)致以該類聲明作為市場手段的生產(chǎn)商和(或)供應(yīng)商之間不公平的市場競爭。
2009年12月,歐盟了新的化妝品法規(guī)1223/2009/EC,在過度期后將取代指令76/768/EC成為歐洲的化妝品統(tǒng)一法律。該法律保留了原指令對動(dòng)物試驗(yàn)禁令的規(guī)定,進(jìn)一步明確3R的原則,列為第五章第18條,同時(shí)對禁止動(dòng)物試驗(yàn)的情形和豁免條件作出了規(guī)定。
五 美國化妝品法規(guī)對動(dòng)物福利的要求
1976年和1980年,在美國動(dòng)物福利協(xié)會(huì)(AWI)、動(dòng)物聯(lián)合行動(dòng)組織(UAA)和動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)的共同努力下,《動(dòng)物福利法》(制定于1966年)和《人道主義飼養(yǎng)和使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的公共衛(wèi)生方針》重新修訂。通過這兩個(gè)法規(guī)性文件,使3R在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面的應(yīng)用得以落實(shí)。另外,修訂的《動(dòng)物福利法》還規(guī)定了減少動(dòng)物痛苦的標(biāo)準(zhǔn),并要求研究者在可能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物痛苦時(shí)考慮替代方法。1981年,CAAT成立,1986年美國國會(huì)提出了關(guān)于在研究、檢驗(yàn)和教育中動(dòng)物應(yīng)用替代物的技術(shù)評估報(bào)告。1993年CAAT作為東道主舉辦了第一屆生命科學(xué)中替代物和動(dòng)物應(yīng)用世界大會(huì)。在美國,許多國家部門的工作中滲透了動(dòng)物替代實(shí)驗(yàn)的原則。1993年,一個(gè)由多部門參與的組織,替代方法驗(yàn)證跨部門協(xié)調(diào)委員會(huì)(ICCVAM)成立。ICCVAM由15個(gè)聯(lián)邦管理和科研機(jī)構(gòu)組成,包括消費(fèi)者產(chǎn)品安全委員會(huì)、農(nóng)業(yè)部、國防部、能源部、內(nèi)政部、交通部、環(huán)保局、食品藥品管理局、國立癌癥研究所、國立環(huán)境衛(wèi)生科學(xué)研究所等聯(lián)邦機(jī)構(gòu)。其主要職責(zé)是技術(shù)協(xié)調(diào)和評估新的和修訂的實(shí)驗(yàn)方法。到目前為止,經(jīng)ICCVAM評估驗(yàn)證的體外方法涉及許多安全評價(jià)終點(diǎn),包括急性經(jīng)口毒性、發(fā)育毒性、內(nèi)分泌紊亂、眼腐蝕/刺激、遺傳毒性、熱原試驗(yàn)、皮膚腐蝕和皮膚敏感性。
在化妝品行業(yè),20世紀(jì)70年代美國動(dòng)物保護(hù)主義者抗議使用動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn),強(qiáng)烈抨擊化妝品毒性鑒定中的眼刺激試驗(yàn)和急性毒性試驗(yàn)使動(dòng)物遭受痛苦、損傷甚至不正常死亡。世界知名的Revion化妝品公司被迫與動(dòng)物保護(hù)者談判,同意提供250萬美元資助洛克菲大學(xué)研究Draize眼刺激試驗(yàn)的替代方法。1980年,美國化妝品、盟洗用品和香水協(xié)會(huì)(CTFA)共同贊助成立了CAAT專門致力于替代方法的研究。1993年,美國的“動(dòng)物權(quán)利法”強(qiáng)制研究單位建立“倫理考察委員會(huì)”,鼓勵(lì)化妝品公司和研究單位開展動(dòng)物替代方法和優(yōu)化試驗(yàn)程序的研究,同年美國國會(huì)成立了ICCVAM和機(jī)構(gòu)間替代方法管理小組(IRAG),后者由美國FDA、環(huán)境保護(hù)局(EPA)和消費(fèi)品安全委員會(huì)(CPSC)為代表,早期開展了一個(gè)三年研究計(jì)劃(1991-1994),從41個(gè)實(shí)驗(yàn)室29個(gè)不同試驗(yàn)方法得到的60個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)評價(jià)眼刺激替代試驗(yàn)方法的有效性。進(jìn)入21世紀(jì),美國替代方法的研究、驗(yàn)證以及認(rèn)可進(jìn)程明顯加快。
六 國際社會(huì)對動(dòng)物試驗(yàn)替代技術(shù)的認(rèn)可
2002年,OECD正式成立了動(dòng)物保護(hù)國際委員會(huì)(ICAPO),許多非政府組織、企業(yè)界和環(huán)保界的代表共同參與。歐洲、美國和日本等主要國家統(tǒng)一在OECD的框架內(nèi)發(fā)揮各自作用,在化學(xué)測試指南中倡導(dǎo)有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)的建議。ICAPO成立以來,替代方法的驗(yàn)證和認(rèn)可明顯加快,從2002年起已有10多項(xiàng)替代方法被認(rèn)可,2009年新的健康和環(huán)境評估的替代/優(yōu)化方法多達(dá)9項(xiàng),2010年重新和修訂的方法超過6項(xiàng)。在方法驗(yàn)證和認(rèn)可方面,上世紀(jì)90年代初,國際社會(huì)對于替代方法的驗(yàn)證還存在爭論,雖然當(dāng)時(shí)OECD內(nèi)部沒有成立專門的替代驗(yàn)證機(jī)構(gòu),但在積極協(xié)調(diào)成員國的立場和推動(dòng)全球范圍內(nèi)的替代方法認(rèn)可方面做了大量工作。2005年,OECD制訂了替代的驗(yàn)證和認(rèn)可指南,2004年和2007年,OECD還分別提出了(Q)SAR模型的驗(yàn)證指南。2007年在加拿大召開了由歐洲、美國和日本參加的化妝品法規(guī)國際協(xié)調(diào)會(huì)議(International Cooperationon Cosmetic Regulation,ICCR),推動(dòng)替代方法的國際合作和促進(jìn)3R的發(fā)展。
關(guān)鍵詞:獸醫(yī);實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;主要作用
中圖分類號:S858.91 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B 文章編號:1007-273X(2016)11-0034-01
獸醫(yī)在動(dòng)物成長過程中起著重要作用,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是特殊的動(dòng)物[1],其在實(shí)際工作過程中離不開獸醫(yī),其實(shí)驗(yàn)的每個(gè)環(huán)節(jié)、每個(gè)應(yīng)用過程中,都有獸醫(yī)的職責(zé),獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作過程中起到重要作用,對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)發(fā)展提升及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量提升都有一定的推動(dòng)作用。
1 獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施建設(shè)、運(yùn)行與管理中的作用
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)需要一定設(shè)施,設(shè)施是基本保障。動(dòng)物在飼養(yǎng)過程中,需要獸醫(yī)的觀察與指導(dǎo),用來提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)的質(zhì)量,保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成活率等。獸醫(yī)需要國際認(rèn)證,認(rèn)證都是科學(xué)公正的,能對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的發(fā)展起到促進(jìn)作用,獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作過程中起著指導(dǎo)與保護(hù)作用,可促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康可持續(xù)發(fā)展,符合現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)展需要,也是社會(huì)發(fā)展的需要。
2 獸醫(yī)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)與實(shí)施中的作用
獸醫(yī)都是了解動(dòng)物機(jī)能的,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中,獸醫(yī)能科學(xué)地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是一門藝術(shù),合理地進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),可以提高實(shí)驗(yàn)的效率[2],對保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性起著重要作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的過程中,獸醫(yī)可以起到重要指導(dǎo)作用,獸醫(yī)了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成長過程,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的過程中獸醫(yī)起到重要的保護(hù)作用。
3 獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)輸管理中的作用
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)輸管理是一項(xiàng)復(fù)雜的過程,在運(yùn)輸過程中受到環(huán)境、氣候等因素影響,動(dòng)物易受到刺激,對其心理、生理都會(huì)產(chǎn)生一定影響,這需要獸醫(yī)加強(qiáng)運(yùn)輸過程中的管理。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在運(yùn)輸?shù)侥康牡睾?,一般情況下不能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn),需要獸醫(yī)對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行全面檢查,看其各項(xiàng)指標(biāo)是否符合做實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn),如不適合做實(shí)驗(yàn),獸醫(yī)必須給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行科學(xué)調(diào)節(jié),讓其恢復(fù)相應(yīng)的指標(biāo),符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn),讓實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確,合理。
4 獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利監(jiān)督與管理中的作用
當(dāng)前經(jīng)濟(jì)水平不斷發(fā)展,科技水平不斷提高,國民生產(chǎn)總值持續(xù)增加,實(shí)驗(yàn)室對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的要求越來越高,必須為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供必要的福利,獸醫(yī)在此過程中起著重要的監(jiān)督與管理作用。首先,隨著經(jīng)濟(jì)的增長,社會(huì)輿論與民眾要求對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物增加福利與待遇[3];其次,獸醫(yī)本身在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也有著相關(guān)的管理職能,既是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的整個(gè)管理者,又是實(shí)踐者。因此,要不斷提高獸醫(yī)的職業(yè)素養(yǎng),除了專業(yè)領(lǐng)域的衛(wèi)生監(jiān)督、實(shí)驗(yàn)方案審查、實(shí)驗(yàn)操作復(fù)核、提供咨詢與建議外,還需要仁愛之心,要培養(yǎng)獸醫(yī)的高尚道德情操,完善其實(shí)際應(yīng)用能力,提高獸醫(yī)的實(shí)踐技能,這樣才能在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作過程中起到合理的指導(dǎo)與保護(hù)作用。
5 獸醫(yī)在生物安全評價(jià)與管理中的作用
生物安全評價(jià)與管理在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)展過程中起著重要作用。安全是重要的因素,評價(jià)必須建立科學(xué)的發(fā)展基礎(chǔ)上,公平、公正、公開地進(jìn)行評價(jià),符合現(xiàn)代生物發(fā)展過程。在生物安全方面,獸醫(yī)承擔(dān)著很重要的職責(zé),要求其站在人類的角度,從生物整體發(fā)展、延續(xù)與增殖的角度綜合考慮問題;另外,獸醫(yī)需要對每個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡原因等進(jìn)行評估,并給出相關(guān)的報(bào)告,尤其是在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的新問題應(yīng)及時(shí)通報(bào)給相關(guān)部門,告知大眾,防止疫情的傳播和流行。
6 獸醫(yī)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物藥品和廢棄物管理中的作用
藥品一般都具有一定的毒性,藥品在使用過程中必須進(jìn)行科學(xué)合理的管理,特別是廢棄物的管理,這些工作都需要在獸醫(yī)的指導(dǎo)下完成,獸醫(yī)具有一定的專業(yè)性,尤其對獸藥有一定認(rèn)R,能起到專業(yè)指導(dǎo)作用,符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物藥品的相應(yīng)管理要求。
參考文獻(xiàn):
[1] 李維國,趙 勇,師長宏.高等院校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物教學(xué)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)體系的改革和構(gòu)建[J].山西農(nóng)經(jīng),2015(5):7-8.
在開展生物醫(yī)學(xué)研究時(shí),研究者通過正確地運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)知識,可直接影響研究的質(zhì)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)的任務(wù)在于對研究的部署、實(shí)施,直到研究結(jié)果的解釋進(jìn)行系統(tǒng)的安排,力爭做到以最少的人力、物力獲得可靠的結(jié)論和信息。其目的在于確定某種處理是否會(huì)表現(xiàn)出某種特定的效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)遵循惟一差異原則,即在進(jìn)行兩組比較時(shí),兩者之間僅有因處理因素不同而引起的差異,而其他實(shí)驗(yàn)條件相關(guān)的非處理因素都應(yīng)保持等同。然而,處理組與對照組在反應(yīng)上表現(xiàn)出的差別并不一定意味著是處理的結(jié)果。另有兩種引起差別的可能性,即偏倚和偶然性。偏倚是指系統(tǒng)性差別,它不是因組間在處理上的不同所引起。生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)和分析的目標(biāo)就是消除潛在的偏倚,減少偶然性[2]。
1.1實(shí)驗(yàn)的偏倚和控制
偏倚是在研究中從設(shè)計(jì)到實(shí)驗(yàn)實(shí)施和結(jié)果分析的各環(huán)節(jié)存在一些人為的、有系統(tǒng)傾向的非隨機(jī)誤差,它不是由于抽樣造成的,而是某種偏性使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離它的真值。從所選擇的生物醫(yī)學(xué)問題到研究方案的制訂與實(shí)施、實(shí)驗(yàn)的完成過程、實(shí)驗(yàn)的分析與解釋,乃至實(shí)驗(yàn)結(jié)果的發(fā)表,均可能存在各式各樣的偏倚[2]。這種偏倚常常表現(xiàn)為系統(tǒng)誤差。偏倚的大小取決于研究的方法和具體的實(shí)驗(yàn)條件。常見的偏倚主要有選擇性偏倚、觀察性偏倚和混雜性偏倚。必須認(rèn)識實(shí)驗(yàn)過程的偏倚,從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)起直到整個(gè)研究過程結(jié)束均要加以控制。正確的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可控制選擇性的偏倚,事前人為控制和采取相應(yīng)的措施可避免和減少觀察性的偏倚。對于混雜性偏倚,可將重要的混雜因素在設(shè)計(jì)階段進(jìn)行分層隨機(jī)設(shè)計(jì),使混雜因素在組間分布均衡;在統(tǒng)計(jì)分析階段將混雜因素作為分層因素或采用有協(xié)變量分析方法,以消除混雜因素的影響。只有有效地控制或消除偏倚,方可減少結(jié)果的假陽性或假陰性。
1.2減少偶然性的潛在影響
偶然性因素的作用可以減少,但不能完全排除。因?yàn)榧词故窃诰膶?shí)施的研究中,接受同樣處理的動(dòng)物,其反應(yīng)也不可能完全一樣。適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析可使實(shí)驗(yàn)人員評估出現(xiàn)假陽性的概率,即根本不存在處理效應(yīng)的情況下觀察到差異的概率。這種概率越小,實(shí)驗(yàn)者發(fā)現(xiàn)真實(shí)效應(yīng)的可能性就越大。為了更有把握地檢測出真實(shí)效應(yīng),有必要減少偶然性的作用,并通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確保能在“噪聲”之上識別真正的“信號”。
1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要素
要消除生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中潛在的偏倚,減少偶然性,就應(yīng)對實(shí)驗(yàn)對象、處理因素和實(shí)驗(yàn)效應(yīng)這三個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要素,按照對照、重復(fù)、隨機(jī)化和均衡四項(xiàng)原則進(jìn)行周到的設(shè)計(jì)與控制[3]。1.3.1實(shí)驗(yàn)對象實(shí)驗(yàn)中處理因素所作用的對象稱為實(shí)驗(yàn)對象。不同性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)研究需要選取不同種類的實(shí)驗(yàn)對象,一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中所需實(shí)驗(yàn)對象的總數(shù)稱為樣本含量。生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)中考慮動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對象時(shí)應(yīng)關(guān)注以下幾個(gè)方面:①動(dòng)物種屬的選擇:選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬與品系時(shí),尤其需要注意其背景反應(yīng)的水平。為了將反應(yīng)“信號”水平最大化,常常意味著應(yīng)避免選擇那些背景反應(yīng)水平極低的動(dòng)物種屬或品系,但如果采用過度反應(yīng)的動(dòng)物種屬或品系也同樣會(huì)出現(xiàn)問題。動(dòng)物物種選擇中的其他問題,無論是實(shí)際問題(壽命、體型、易得性、對動(dòng)物學(xué)特征的了解情況)或是理論問題(生化、生理或解剖結(jié)構(gòu)與人的相似性),都需要從專業(yè)的角度認(rèn)真加以考慮和權(quán)衡。②動(dòng)物的數(shù)量:雖然從統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)角度考慮可得出某項(xiàng)實(shí)驗(yàn)所需的動(dòng)物數(shù)(樣本含量),但所得出的數(shù)值往往很大。因此,雖然樣本含量估計(jì)是保證結(jié)論可靠性(精度和檢驗(yàn)效能)的前提,但基于實(shí)驗(yàn)的可操作性及經(jīng)濟(jì)原則方面的考慮,應(yīng)結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)的計(jì)算結(jié)果與以往的生物醫(yī)學(xué)研究經(jīng)驗(yàn)予以確定。③動(dòng)物的體重與年齡:為確保實(shí)驗(yàn)對象的同質(zhì)性,實(shí)驗(yàn)中所使用的動(dòng)物體重與年齡應(yīng)盡可能相近;動(dòng)物體重的標(biāo)準(zhǔn)差不應(yīng)超出平均值的10%;嚙齒類等小動(dòng)物年齡相差不應(yīng)超出1周,大動(dòng)物年齡相差不應(yīng)超出1個(gè)月。④動(dòng)物的分層:為了準(zhǔn)確檢測一種處理因素引起的差別,各處理組在可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的其他非處理因素方面應(yīng)盡可能具有同質(zhì)性。當(dāng)存在動(dòng)物亞系間的差別時(shí),有兩種方法可得到更為準(zhǔn)確的結(jié)論。一是在結(jié)果分析階段將亞系作為一個(gè)“分層變量”處理,包括對兩個(gè)亞系的結(jié)果進(jìn)行單獨(dú)分析,然后將結(jié)果綜合,得出處理效應(yīng)的總結(jié)論;二是將亞系作為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的“區(qū)組因素”,這種情況下可使對照組與處理組中每個(gè)亞系動(dòng)物數(shù)量相等。除以上所討論的“亞系”之外,其他的非處理因素,如性別、窩別、體重段等也可作為分層變量進(jìn)行局部控制,并據(jù)此進(jìn)行分層隨機(jī)化分組。1.3.2處理因素設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究時(shí),要明確研究中的處理因素和影響實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的非處理因素。研究者希望通過對研究設(shè)計(jì)進(jìn)行有計(jì)劃的安排,從而能科學(xué)地考察其效應(yīng)大小的因素稱為處理因素或?qū)嶒?yàn)因素;研究者往往忽略對評價(jià)實(shí)驗(yàn)因素作用大小有一定干擾的重要的非處理因素或非實(shí)驗(yàn)因素(如動(dòng)物的窩別、體重等);其他未加控制的許多因素的綜合作用統(tǒng)稱為實(shí)驗(yàn)誤差。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是處理因素和非處理因素共同作用而產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)效應(yīng),因此如何控制和排除非處理因素的干擾,正確顯示處理的效應(yīng),是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本任務(wù)。1.3.3實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)是處理因素作用于受試對象的反應(yīng)和結(jié)果,是反映實(shí)驗(yàn)因素作用強(qiáng)弱的標(biāo)志,它通過觀察指標(biāo)(統(tǒng)計(jì)學(xué)常將指標(biāo)稱為變量)來體現(xiàn)。如果指標(biāo)選擇不當(dāng),未能準(zhǔn)確反映處理因素的作用,獲得的研究結(jié)果就缺乏科學(xué)性,因此選擇好觀察指標(biāo)是關(guān)系整個(gè)研究成敗的重要環(huán)節(jié)。指標(biāo)的觀察應(yīng)避免帶有偏性或偏倚,要結(jié)合專業(yè)知識,盡可能多地選用客觀性強(qiáng)的指標(biāo),在儀器和試劑允許的條件下,應(yīng)盡可能多選用特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確可靠的客觀指標(biāo)。對一些半客觀(如尿液pH試紙讀數(shù)值)或主觀指標(biāo)(行為測量、病理觀察),一定要事先規(guī)定讀取數(shù)值的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),只有這樣才能準(zhǔn)確地分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。
1.4實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則
為了防止結(jié)果的偏倚,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和最大化的表達(dá),在進(jìn)行生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)必須遵循統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)的對照、重復(fù)、隨機(jī)化和均衡四個(gè)基本原則。生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中對照組的設(shè)置必須具備三個(gè)條件:①對等原則,即惟一差別原則,除處理因素外,對照組具備與實(shí)驗(yàn)組對等的非處理因素。在相互比較的各組間,除了給予的處理因素不同外,其他方面應(yīng)與實(shí)驗(yàn)組具有一致性,如相同的實(shí)驗(yàn)單位來源(動(dòng)物種屬、體重等)和相同的實(shí)驗(yàn)條件、操作方式和喂養(yǎng)環(huán)境等。②同步原則,對照組與實(shí)驗(yàn)組設(shè)立之后,在整個(gè)研究進(jìn)程中始終處于同一空間和同一時(shí)間。③專設(shè)原則,任何一個(gè)對照組都是為相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)組專門設(shè)立的。不得借用文獻(xiàn)上的記載或以往結(jié)果或其他研究資料作為本研究之對照。
1.5生物醫(yī)學(xué)中常用的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型
如果需要在同一實(shí)驗(yàn)中同時(shí)評價(jià)幾種不同的效應(yīng),實(shí)驗(yàn)者應(yīng)該安排能區(qū)別各自效應(yīng)差別的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。生物醫(yī)學(xué)中常用的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)有以下幾項(xiàng)。1.5.1完全隨機(jī)設(shè)計(jì)完全隨機(jī)設(shè)計(jì)是生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中最為常用的一種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,它是一種單因素有k個(gè)水平(k≥2)組的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。即實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可設(shè)置一個(gè)對照或多個(gè)劑量組的實(shí)驗(yàn)方案。本設(shè)計(jì)保證每個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都有相同機(jī)會(huì)接受任何一種處理,而不受實(shí)驗(yàn)人員主觀傾向的影響。本設(shè)計(jì)應(yīng)用了重復(fù)和隨機(jī)化兩個(gè)原則,因此能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果受非處理因素的影響基本一致,真實(shí)反映出實(shí)驗(yàn)的處理效應(yīng)。1.5.2隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)隨機(jī)化完全區(qū)組設(shè)計(jì),簡稱隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),又稱配伍組設(shè)計(jì),是配對設(shè)計(jì)的擴(kuò)展,它將幾個(gè)條件相同的受試者劃分在同一個(gè)區(qū)組或配伍組,然后再按隨機(jī)的原則,將同一配伍組的受試者隨機(jī)分配到各實(shí)驗(yàn)組。該設(shè)計(jì)方法的優(yōu)點(diǎn)是每個(gè)區(qū)組內(nèi)的k個(gè)實(shí)驗(yàn)單位有較好的同質(zhì)性,比完全隨機(jī)設(shè)計(jì)更容易察覺處理間的差別。這種方法須特別注意的是要求區(qū)組內(nèi)實(shí)驗(yàn)單位數(shù)與處理數(shù)相同,實(shí)驗(yàn)結(jié)果中若有缺失值,統(tǒng)計(jì)分析將損失部分信息。1.5.3拉丁方設(shè)計(jì)拉丁方設(shè)計(jì)從橫行和直列兩個(gè)方向進(jìn)行雙重局部控制,使得橫行和直列兩向皆成區(qū)組,是比隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)多一個(gè)區(qū)組因素的設(shè)計(jì)。在拉丁方設(shè)計(jì)中,每一行或每一列都成為一個(gè)完全區(qū)組,而每一處理在每一行或每一列都只出現(xiàn)一次,也就是說,在拉丁方設(shè)計(jì)中,實(shí)驗(yàn)處理數(shù)=橫行區(qū)組數(shù)=直列區(qū)組數(shù)=實(shí)驗(yàn)處理的重復(fù)數(shù)。1.5.4析因設(shè)計(jì)析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)又稱全因子實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),屬于多因素、多水平單效應(yīng)的設(shè)計(jì)。它不僅可以檢驗(yàn)每一因素各水平之間的效應(yīng)差異,而且可以檢驗(yàn)各因素之間的交互作用。交互作用是指一個(gè)因素不同水平間的效應(yīng)差受另一因素的影響,包括協(xié)同交互作用和拮抗交互作用。析因?qū)嶒?yàn)主要用于分析交互作用,當(dāng)因素及水平數(shù)過多時(shí),所需的實(shí)驗(yàn)對象數(shù)、處理組數(shù)和實(shí)驗(yàn)次數(shù)大幅度增加,故一般采用較簡單的析因?qū)嶒?yàn)。含有較多因素和水平的實(shí)驗(yàn)一般采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[5]。
2生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的描述統(tǒng)計(jì)學(xué)
2.1生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)資料的類型
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)對象(動(dòng)物)進(jìn)行干預(yù)后測定的觀測指標(biāo)通常有以下類型:①連續(xù)性數(shù)據(jù):測定結(jié)果表現(xiàn)為有數(shù)字大小和單位的數(shù)據(jù),統(tǒng)計(jì)上稱定量資料,如生理、生化指標(biāo),體重值,器官重量等。②分類數(shù)據(jù):測定結(jié)果表現(xiàn)為按某屬性劃分的定性類別,統(tǒng)計(jì)上稱為定性資料,具體又可以分為二值資料、多值名義資料和多值有序資料。如某反應(yīng)為出現(xiàn)或不出現(xiàn),死亡或未死亡,有畸形或無畸形;病理損害的嚴(yán)重程度(無、輕度、中度、重度)等。
2.2統(tǒng)計(jì)描述指標(biāo)
描述性統(tǒng)計(jì)學(xué)(或歸納統(tǒng)計(jì)學(xué))是對樣本觀察/測量數(shù)據(jù)頻率分布的定量研究,描述性統(tǒng)計(jì)的目的在于:①對測量值或觀察值進(jìn)行歸納濃縮,用統(tǒng)計(jì)量、統(tǒng)計(jì)圖或統(tǒng)計(jì)表的形式表現(xiàn);②估計(jì)總體分布的參數(shù)。2.2.1資料的整理與探索對于某一測量指標(biāo),一般應(yīng)從文獻(xiàn)資料中了解其分布類型。如果沒有判斷概率分布的理論基礎(chǔ),應(yīng)重復(fù)以大樣本測定,繪制樣本的頻數(shù)分布圖(理論上樣本量要大于100),并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)擬合其分布。2.2.2數(shù)據(jù)的描述統(tǒng)計(jì)量①連續(xù)性數(shù)據(jù)的頻數(shù)分布:通過對樣本資料編制頻數(shù)分布表或做莖葉圖,以確定資料分布的類型、頻數(shù)分布的集中趨勢和離散趨勢、估計(jì)總體參數(shù),也便于發(fā)現(xiàn)離群值。②中心位置的描述統(tǒng)計(jì)量:描述數(shù)據(jù)分布的集中趨勢,常用指標(biāo)為算術(shù)均數(shù)、中位數(shù)、眾數(shù)、幾何均數(shù)等。③離散程度的描述統(tǒng)計(jì)量:描述數(shù)據(jù)分布的離散趨勢,常用指標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)差和方差、極差和四分位數(shù)間距、變異系數(shù)和離散系數(shù)等。④統(tǒng)計(jì)學(xué)圖表:統(tǒng)計(jì)圖包括連續(xù)性數(shù)據(jù)分布的直方圖、莖葉圖,表示數(shù)據(jù)中心位置和離散程度的點(diǎn)桿圖(做圖時(shí)表示均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差)和盒須圖(做圖時(shí)表示中位數(shù)、極差、四分位數(shù)間距),描述構(gòu)成比數(shù)據(jù)資料的百分條圖、餅圖,描述經(jīng)時(shí)變化趨勢的線圖,以及預(yù)測和檢驗(yàn)分布類型的概率-概率圖(P-P圖)等[6]。統(tǒng)計(jì)表具有簡單、明了、易于理解、便于比較的優(yōu)點(diǎn)。編制統(tǒng)計(jì)表時(shí)原則上應(yīng)當(dāng)重點(diǎn)突出、層次分明、避免層次過多或結(jié)構(gòu)混亂。一般的統(tǒng)計(jì)表應(yīng)為三線表,表中只有橫線,無豎線和斜線。統(tǒng)計(jì)表的標(biāo)目應(yīng)層次清楚,不宜過于復(fù)雜。
3生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的假設(shè)檢驗(yàn)
生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中最常見的情況是給予不同受試物后進(jìn)行組間比較,通過統(tǒng)計(jì)學(xué)中的假設(shè)檢驗(yàn),說明受試物的作用。假設(shè)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意以下問題。
3.1檢驗(yàn)方法的選用依據(jù)
3.1.1資料的類型和變量的數(shù)目不同類型的資料(定量、定性)的組間比較應(yīng)采用不同的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法。單變量、多變量的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法也各不相同。3.1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)類型應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的具體類型選擇對應(yīng)的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法,以便得到處理組效應(yīng)的真實(shí)結(jié)論。3.1.3檢驗(yàn)方法的前提條件選用假設(shè)檢驗(yàn)方法前,應(yīng)了解所分析的數(shù)據(jù)資料是否滿足相應(yīng)檢驗(yàn)方法的前提條件,如t檢驗(yàn)和方差分析等參數(shù)檢驗(yàn)方法要求數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性和方差齊性,χ2檢驗(yàn)要求樣本含量大于40且理論頻數(shù)大于5。
3.2正態(tài)性檢驗(yàn)及擬合優(yōu)度檢驗(yàn)
統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)檢驗(yàn)須判定樣本的頻數(shù)分布是否符合某一理論分布,如符合要求就可按此理論分布來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對正態(tài)分布可采用正態(tài)性檢驗(yàn),其他分布可用擬合優(yōu)度檢驗(yàn)。通??赏ㄟ^查閱文獻(xiàn),了解實(shí)驗(yàn)參數(shù)符合何種理論分布。
3.3方差齊性檢驗(yàn)
連續(xù)性數(shù)據(jù)未達(dá)到參數(shù)法統(tǒng)計(jì)分析前提的第二種原因即為方差不齊。一般而言,數(shù)值愈大,其固有的變異性也愈大。例如,若某組動(dòng)物的平均反應(yīng)值為100,其數(shù)值范圍可能為80~120;而另一組動(dòng)物的平均反應(yīng)值為300,其數(shù)值范圍可能會(huì)擴(kuò)大至240~360。解決方差不齊的措施是進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換。若數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差與平均值成正比,在統(tǒng)計(jì)分析前宜將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為對數(shù)值之后再進(jìn)行分析,據(jù)此,不僅數(shù)據(jù)的變異度與平均值大小無關(guān),同時(shí)還可確保其更符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)變異度增加幅度與平均值的關(guān)系不太明顯,采用平方根轉(zhuǎn)換則更易使數(shù)據(jù)的變異度與平均值大小無關(guān)。某些數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)或平方根轉(zhuǎn)換后可能仍存在方差不齊,此時(shí)宜采用非參數(shù)檢驗(yàn)。
3.4單側(cè)檢驗(yàn)與雙側(cè)檢驗(yàn)
檢驗(yàn)假設(shè)選擇單側(cè)檢驗(yàn)或雙側(cè)檢驗(yàn),應(yīng)事先根據(jù)專業(yè)知識做出選擇。一般而言,若研究目的僅須了解是否存在組間差異、實(shí)驗(yàn)者無法預(yù)測組間變化的方向以及實(shí)驗(yàn)者希望獲得正負(fù)兩方面的結(jié)果時(shí),應(yīng)采用雙側(cè)檢驗(yàn)。若事先可預(yù)測組間差異的變化方向,實(shí)驗(yàn)者僅對某一方面的重要性感興趣,實(shí)驗(yàn)者僅希望了解與對照組差異或正或負(fù)一個(gè)方向,則應(yīng)采用單側(cè)檢驗(yàn)。此外,劑量設(shè)計(jì)預(yù)試驗(yàn)中應(yīng)采用雙側(cè)檢驗(yàn),正式試驗(yàn)在了解相關(guān)信息后可采用單側(cè)檢驗(yàn)。
3.5多重比較及多重性問題
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)常在處理組和對照組之間做多個(gè)變量的比較。即使不存在真正的實(shí)驗(yàn)效應(yīng),也有可能純粹由于偶然性而有一個(gè)或多個(gè)變量在5%檢驗(yàn)水平出現(xiàn)顯著性差別。除了上述均數(shù)多重比較導(dǎo)致Ⅰ類錯(cuò)誤概率增加的多重性問題之外,其他的多重性問題還包括多次的中期分析、關(guān)注多個(gè)結(jié)局、亞組間的多重比較。處理多重性問題的原則包括:①預(yù)先計(jì)劃進(jìn)行多重比較;②限制比較的次數(shù);③多重比較時(shí)采用更嚴(yán)格的界值標(biāo)準(zhǔn);④多重比較具有生物學(xué)方面的依據(jù)。
3.6觀察值或?qū)嶒?yàn)對象的獨(dú)立性
許多統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法要求比較的觀察值或?qū)嶒?yàn)對象相互獨(dú)立,如二項(xiàng)分布的率檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和方差分析等。但是,有的生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中觀察單位并不獨(dú)立。例如,生殖和發(fā)育研究中就存在窩效應(yīng):由于遺傳因素、宮內(nèi)的發(fā)育環(huán)境和藥物的代謝環(huán)境相似,與異窩胎仔相比,同窩胎仔之間對毒性效應(yīng)的反應(yīng)概率趨于系統(tǒng),即同窩內(nèi)數(shù)據(jù)為聚集性數(shù)據(jù),這就是一種常見的非獨(dú)立數(shù)據(jù)。在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí),忽略數(shù)據(jù)的窩內(nèi)相關(guān)性具有潛在的風(fēng)險(xiǎn);因同窩母鼠所產(chǎn)k個(gè)胎仔的觀察值存在共性,其所提供的信息不及k個(gè)獨(dú)立的來自不同母鼠所產(chǎn)胎仔所提供的信息;窩內(nèi)相關(guān)性愈大,其信息量愈少。聚集性數(shù)據(jù)的均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤小于獨(dú)立的數(shù)據(jù),因此,若基于觀察值獨(dú)立的統(tǒng)計(jì)分析方法,就會(huì)增加犯Ⅰ類錯(cuò)誤的概率,即假陽性的風(fēng)險(xiǎn)增加,降低實(shí)驗(yàn)的有效性。
3.7歷史對照數(shù)據(jù)的應(yīng)用
某些情況下,尤其是在發(fā)生率較低的情況下,單項(xiàng)研究可能提示處理可影響腫瘤發(fā)生率,但無法得出明確的結(jié)論??赡芟氲降姆治鲛k法之一是將處理組的數(shù)據(jù)與來自其他研究的對照組動(dòng)物相比較。雖然歷史對照數(shù)據(jù)具有重要意義,但值得強(qiáng)調(diào)的是,眾多原因可導(dǎo)致不同研究之間的變異度大于研究之內(nèi)的變異度。動(dòng)物來源、飼料及飼養(yǎng)條件,研究期限,研究中的動(dòng)物死亡率、讀片的病理學(xué)家等均可能影響最終的腫瘤發(fā)生率。故此,忽視這些差異,將處理組的腫瘤發(fā)生率與合并的對照組發(fā)生率相比較,可能得出嚴(yán)重錯(cuò)誤的結(jié)果,并進(jìn)而明顯夸大統(tǒng)計(jì)顯著性水平。Tarone[4]曾對歷史對照組的比率數(shù)據(jù)分析進(jìn)行過綜述。
3.8假設(shè)檢驗(yàn)的局限性
關(guān)鍵詞:大鼠; 小鼠; 疾病; 證候; 四診客觀化; 辨證; 辨證論治; 藥性
中醫(yī)藥及辨證論治的研究和發(fā)展,需要開展大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),其中大鼠和小鼠是最為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。因此,建立大鼠和小鼠辨證論治的方法和標(biāo)準(zhǔn),成為中醫(yī)藥行業(yè)的關(guān)鍵學(xué)術(shù)問題、基本方法學(xué)問題。
1 大鼠和小鼠辨證論治標(biāo)準(zhǔn)的建立
大鼠和小鼠辨證論治標(biāo)準(zhǔn)的建立,涉及到一系列相互關(guān)聯(lián)的學(xué)術(shù)問題。(1)能否模擬中醫(yī)臨床,用于開展大鼠和小鼠的診法和辨證研究?大鼠、小鼠能夠采集到多少四診信息,與人類異同如何?能否滿足辨證論治需要?(2)能否實(shí)現(xiàn)其四診和辨證的標(biāo)準(zhǔn)化、計(jì)量化,如何便于操作與普及?(3)正常大鼠和小鼠是否存在體質(zhì)的差異和證候表現(xiàn);疾病大鼠和小鼠是否會(huì)自發(fā)形成證候,是否會(huì)發(fā)生證候的演變和兼夾?是否與人類近似?(4)證候形成的物質(zhì)基礎(chǔ)是什么?如何觀察?(5)能否開展大鼠、小鼠個(gè)體化的辨證論治?能否計(jì)量化地比較與評價(jià)其療效?為回答以上系列學(xué)術(shù)問題,我們開展了長達(dá)十年的研究,建立了系列標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)研究仍在繼續(xù),部分進(jìn)展介紹如下。
1.1 大鼠和小鼠可以用來模擬中醫(yī)臨床實(shí)施四診和辨證 基于在長期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中觀察到的動(dòng)物個(gè)體差異,以及中醫(yī)辨證論治理論,我們提出了大鼠和小鼠基于四診的辨證論治假說。研究證明,大鼠和小鼠是可以開展“四診”及辨證論治的[14]。比較大鼠和小鼠與人類所能采集到的所有四診信息的異同后發(fā)現(xiàn),所采集到的大鼠和小鼠四診信息,是可以滿足辨證論治需要的,具體內(nèi)容可參見《大鼠和小鼠辨證論治實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》(科學(xué)出版社)。
1.2 利用大鼠、小鼠可以實(shí)現(xiàn)四診和辨證的標(biāo)準(zhǔn)化、計(jì)量化,所建立的方法便于實(shí)驗(yàn)操作與普及 我們提出大鼠和小鼠四診工作站的假說及設(shè)計(jì)原則,創(chuàng)建了四診工作站,并不斷有所調(diào)整和發(fā)展。同步開展了大量正常及荷瘤小鼠證候研究和常見不同虛證造模方法的比較研究。期間不斷檢驗(yàn)、發(fā)展和完善四診工作站及其標(biāo)準(zhǔn),實(shí)現(xiàn)了基于大鼠和小鼠四診的辨證。發(fā)現(xiàn)常見虛證模型動(dòng)物間存在復(fù)雜的證候差異或表現(xiàn)為復(fù)合證,證明其證候?qū)傩杂写俦孀C、再評價(jià)。在早期建立小鼠四診采集項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)、小鼠四診工作站及其操作標(biāo)準(zhǔn)、小鼠常見證候辨證標(biāo)準(zhǔn)等的基礎(chǔ)上,進(jìn)而發(fā)展出大鼠、小鼠系列診法和辨證標(biāo)準(zhǔn)。大量的實(shí)驗(yàn)證明,所建立的四診工作站,有助于大鼠或小鼠的四診檢測,可以開展大樣本的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[514];有助于發(fā)展和建立標(biāo)準(zhǔn)化、計(jì)量化的四診檢測與辨證方法,實(shí)現(xiàn)計(jì)量化的辨證及療效評價(jià)。以上研究,被授權(quán)專利一項(xiàng),我們出版了方法學(xué)專著《辨證論治實(shí)驗(yàn)方法學(xué)——實(shí)驗(yàn)小鼠診法與辨證》(上??茖W(xué)技術(shù)出版社),獲得1項(xiàng)部級成果三等獎(jiǎng)。
1.3 正常大鼠和小鼠存在體質(zhì)和證候的差異,常見疾病大鼠或小鼠會(huì)自發(fā)形成證候,發(fā)生證候的演變和兼夾,與人類近似 為了進(jìn)一步觀察常見疾病動(dòng)物是否存在“同病異證”和“異病同證”的現(xiàn)象,我們開展了大量的疾病動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[1521],涉及肝癌、肺癌、胃癌等荷瘤小鼠(包括裸鼠、C57近交系小鼠、昆明種小鼠),糖耐量異常、2型和1型糖尿病及自發(fā)性糖尿病大鼠,肥胖模型大鼠,高血脂模型大鼠,不同方法造模的高血壓大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠,以及不同方法造模的胃潰瘍大鼠、小鼠等疾病模型。發(fā)現(xiàn)與人類近似,正常大鼠或小鼠普遍存在體質(zhì)和證候的差異;不同常見疾病大鼠和小鼠普遍存在證候的自然發(fā)生、演變和兼夾,沒有必要疊加證候造模;不同疾病大鼠、小鼠既普遍存在“有是病便有是證”及程度差異,又普遍存在同病異證和異病同證。充分證明,疾病模型大鼠、小鼠的證候是可以標(biāo)準(zhǔn)化、計(jì)量化采集的,并可準(zhǔn)確地評價(jià)其證候及其嚴(yán)重程度。荷瘤小鼠早期的邪毒壅盛證預(yù)后差,這對于治未病是有意義的。
1.4 證候存在復(fù)雜的物質(zhì)基礎(chǔ),涉及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)各組織基因表達(dá)與剪接的差異 為準(zhǔn)確和客觀揭示證候復(fù)雜的物質(zhì)基礎(chǔ),我們采用了多病種、多證候同步研究的方法。
1.4.1 疾病和證候的選擇 第一階段實(shí)驗(yàn),觀察了H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛證、氣虛證,中期陽氣虛證和中晚期氣陰陽虛證等4個(gè)常見證候(淘汰不典型或復(fù)雜兼證小鼠),與正常無證候小鼠對照。其中邪毒壅盛證、氣虛證是典型的同病異證。第二階段實(shí)驗(yàn),觀察正常、氣虛大鼠,氣盛、氣虛證自發(fā)性高血壓大鼠和自發(fā)性糖尿病大鼠(非典型證候大鼠留作它用),以及早期邪毒壅盛證、氣虛證,中期陽氣虛證、氣虛證,中晚期氣陰陽虛證、氣虛證荷瘤小鼠等(淘汰非典型證候小鼠)多病種、多階段的同病異證和異病同證。
1.4.2 檢測的目標(biāo)組織 檢測下丘腦、垂體、腎上腺、甲狀腺和組織,其中荷瘤小鼠增檢胸腺、脾臟、腫瘤,高血壓大鼠增檢腎臟,糖尿病大鼠增檢胰腺。
1.4.3 主要檢測技術(shù) 主要采用Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array和Rat Exon 1.0 ST Array。初步研究發(fā)現(xiàn),以上不同疾病或證候在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)及相關(guān)組織普遍存在基因表達(dá)和外顯子剪接的差異,表明同病異證和異病同證有其復(fù)雜的物質(zhì)基礎(chǔ),而外顯子表達(dá)譜芯片提供了高效可靠的檢測技術(shù)[2227]。這在多層次組織分子層面證明了證候是客觀存在的,該研究仍在進(jìn)行之中。
【關(guān)鍵詞】
醫(yī)學(xué)生;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利;教育
作者單位:510515南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心
通訊作者:顧為望 E-mail:
1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的提出與發(fā)展
19世紀(jì)末,隨著生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展和社會(huì)文明的進(jìn)步,動(dòng)物越來越多地用于生物醫(yī)學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利成了人們關(guān)注的焦點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利就是在以科學(xué)研究為目的的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)和使用中最大限度地保證動(dòng)物健康、安樂、舒適,從而獲得客觀、科學(xué)、準(zhǔn)確的科研數(shù)據(jù)[1]。
近幾年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利問題受到了國際關(guān)注,2008年11月,歐洲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)協(xié)會(huì)聯(lián)盟稱,它希望更新法規(guī)以更好地保護(hù)整個(gè)歐洲的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;2010年4月,新聞報(bào)道稱,歐盟將實(shí)施動(dòng)物實(shí)驗(yàn)新法規(guī),新的歐盟條約中有條款提到,“聯(lián)盟國應(yīng)該給足動(dòng)物應(yīng)有的福利,因?yàn)閯?dòng)物是有感知的生物[2]?!?/p>
落實(shí)和貫徹實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利已成為國際趨勢,是社會(huì)文明和經(jīng)濟(jì)發(fā)展到一定階段的必然產(chǎn)物,在未來建立一個(gè)國際通用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利標(biāo)準(zhǔn)已成為共識。
2 我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的現(xiàn)狀
中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的起步很晚,基礎(chǔ)很差,但自80年代以來發(fā)展迅速,前國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)委員會(huì)主席羅塞爾曾感慨道:“我親眼看到中國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技事業(yè)在不到十年的時(shí)間里,走完了西方國家半個(gè)世紀(jì)的路程?!北M管我國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)突飛猛進(jìn),有關(guān)政策及標(biāo)準(zhǔn)不斷完善,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利問題引起越來越多的重視,但在維護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利方面,我國與國外相比有很大的差距。
我國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利只有相關(guān)的管理辦法和部分條款,可操作性不強(qiáng),缺乏明確具體的處罰規(guī)定,導(dǎo)致人們普遍漠視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利;在教學(xué)中,由于施教者動(dòng)物福利意識的淡漠,并不會(huì)在涉及到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)際操作和演示中向?qū)W生傳達(dá)有關(guān)維護(hù)動(dòng)物福利的信息,而給學(xué)生造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物只是一種資源和工具的印象:動(dòng)物在清醒的狀態(tài)下或未麻醉徹底就進(jìn)行操作、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后不給予人道處死使動(dòng)物在巨大的痛苦中逐漸死亡、在垃圾堆中也時(shí)常會(huì)看到奄奄一息的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,這些場面令人極為難受;只有少數(shù)實(shí)驗(yàn)性專業(yè)和研究生教學(xué)中開設(shè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)課程,導(dǎo)致醫(yī)學(xué)生對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利缺乏認(rèn)識,甚至毫無概念,在實(shí)際操作中不能切實(shí)維護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利,其中有些人甚至無視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的痛苦,戲弄甚至傷害它們。目前情況,因?yàn)闆]有受到正規(guī)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育,大部分醫(yī)學(xué)生在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)和實(shí)際操作時(shí)根本不會(huì)顧及到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的感受。
3 重視醫(yī)學(xué)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育的意義
3.1 培養(yǎng)術(shù)德兼?zhèn)涞暮细袢瞬诺男枰?/p>
“大醫(yī)精誠”,“精”指專業(yè)熟練,“誠”指品德高尚。所謂“大醫(yī)”,除了高超精湛的醫(yī)術(shù),還要仁慈博愛,悲天憫人。仁慈博愛方能做到“以天地之心為己心,視人之子猶己之子,勿以勢利之心易之”,悲天憫人方能做到深切同情,感同身受,以人為本,尊重生命。醫(yī)學(xué)生在學(xué)習(xí)階段,生理、病理、毒理、解剖、外科手術(shù)等多門課程都要涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,畢業(yè)后無論從事科研還是臨床,依然離不開實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,如果對動(dòng)物的痛苦和福利漠視,縱使可以“精術(shù)”,卻很難“立德”,更難以確保對病患“一視同仁,貴義賤利”、“一心赴救,視病猶親”、“廉潔淳良,不唯名利”、“寬厚仁和,傾誠無忌”,有“術(shù)”無“德”是教育的失敗,更是社會(huì)的損失。
3.2 有助于醫(yī)學(xué)生道德上的自我完善
殘忍的對待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)使人墮落。同情和憐憫是人性的組成部分,人類如果對動(dòng)物殘忍,就會(huì)鈍化和減弱他們對動(dòng)物的痛苦的惻隱之情,進(jìn)而在與別人交往的過程中,弱化甚至泯滅自身可以助人的本性。對動(dòng)物殘忍實(shí)際上是“恃強(qiáng)凌弱”,長期如此,這種心理和行為會(huì)投射到人類內(nèi)部,演變成強(qiáng)勢個(gè)體虐待弱勢個(gè)體,喪失良知、愛心和同情心。
3.3 提高醫(yī)學(xué)生的思辨能力
加強(qiáng)醫(yī)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育,還有助于他們學(xué)會(huì)辯證地、科學(xué)地思考問題。動(dòng)物福利和動(dòng)物利用是對立統(tǒng)一的兩個(gè)方面。提倡動(dòng)物福利,不等于人類不能利用動(dòng)物,不能做任何的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),重要的是應(yīng)該怎么合理、人道地利用動(dòng)物,怎樣科學(xué)地設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)使實(shí)現(xiàn)研究目的所使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量降低到最少,怎樣改善條件使飼養(yǎng)和使用過程中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受到的損傷和痛苦最小,著名的“3R”原則就是在平衡科研欲求與動(dòng)物痛苦的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的。
3.4 獲得準(zhǔn)確、真實(shí)、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的需要
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛟卺t(yī)學(xué)科學(xué)研究中發(fā)揮重要作用,前提是必須選擇符合標(biāo)準(zhǔn)的、健康的、遺傳背景清楚的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,同時(shí)還要排除各種干擾因素,消除不利影響。受污染、受虐待以及發(fā)育不良、營養(yǎng)欠佳的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于實(shí)驗(yàn),其結(jié)果必然失去準(zhǔn)確性、真實(shí)性和可靠性,甚至得出錯(cuò)誤的結(jié)論。此外,實(shí)驗(yàn)實(shí)施之前,如果對動(dòng)物進(jìn)行溫柔地?fù)嵛?,?dòng)物會(huì)顯得比較平和、溫順,有的甚至能配合操作者進(jìn)行實(shí)驗(yàn);反之,如果操作者態(tài)度惡劣、動(dòng)作野蠻粗暴,動(dòng)物也會(huì)產(chǎn)生反抗情緒,有時(shí)動(dòng)物會(huì)有意與人作對,拒不配合,實(shí)驗(yàn)很難繼續(xù)進(jìn)行,即使勉強(qiáng)進(jìn)行下去,也得不到真實(shí)、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[3]。
3.5 發(fā)表學(xué)術(shù)文章的角度
為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,以及符合一定的社會(huì)倫理原則,嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)刊物在接受和發(fā)表涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的文章時(shí),都要求動(dòng)物的來源、飼養(yǎng)和操作等遵循相應(yīng)的法律、法規(guī)或條例[3],比如《CELL》的投稿規(guī)定,當(dāng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是脊椎動(dòng)物或更高級的動(dòng)物時(shí),在實(shí)驗(yàn)操作部分中要有明確的實(shí)驗(yàn)方案得到專門委員會(huì)認(rèn)可的陳述;《NATURE》雜志對作者的要求與《CELL》的基本一致;《Biology of Reproduction》的投稿須知更詳細(xì),其中提及了美國三個(gè)部門對受試動(dòng)物管理和愛護(hù)等方面的規(guī)章。因此,從發(fā)表學(xué)術(shù)文章的角度也應(yīng)該加強(qiáng)醫(yī)學(xué)院校學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育。
3.6 打破貿(mào)易壁壘的制約
目前中國的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展,中國成為新藥研發(fā)中心的必備因素都已具備[4],需要大量的醫(yī)學(xué)生從事生物技術(shù)研究和承接生物醫(yī)藥合同外包服務(wù),而藥品的檢定中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量以及福利狀況都會(huì)影響對外貿(mào)易。因此,我國加入WTO后,必須重視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利,加強(qiáng)醫(yī)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育,否則這將成為制約我國對外貿(mào)易的技術(shù)壁壘[5]。
3.7 人類有善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的責(zé)任
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為特殊的動(dòng)物群體是生物醫(yī)學(xué)研究不可缺少的基礎(chǔ)和支撐條件,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以及較早的普通動(dòng)物對生命科學(xué)特別是醫(yī)學(xué)的發(fā)展做出了巨大的貢獻(xiàn),從1901年到2006年總共106年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)中,70年的獲獎(jiǎng)直接涉及25種動(dòng)物,其中常規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如小鼠、大鼠、兔、犬、豚鼠、地鼠、貓、豬、猴、雞、蛙的使用頻率是91次,非常規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如鳥類、馬、魚、蛇、果蠅、蜜蜂、線蟲等是27次。過去半個(gè)世紀(jì)的醫(yī)學(xué)與獸醫(yī)學(xué)的進(jìn)步大于人類歷史上的任何時(shí)期,假如沒有進(jìn)行涉及動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)工作,這種進(jìn)步是不可能的[3]。
3.8 體現(xiàn)社會(huì)文明的進(jìn)步
一個(gè)國家的國民對待動(dòng)物的態(tài)度如何,是衡量一個(gè)社會(huì)文明程度的重要標(biāo)志。人類是地球上最具智慧和潛能的生命,但人類也歸屬于動(dòng)物大家庭,與其他動(dòng)物共享這個(gè)星球,而沒有“主宰”其他動(dòng)物的權(quán)利。隨著社會(huì)文明的進(jìn)步,人類應(yīng)當(dāng)擴(kuò)大關(guān)懷的范圍,設(shè)身處地考慮動(dòng)物的處境,善待動(dòng)物,尤其應(yīng)善待對人類有著巨大貢獻(xiàn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,尊重生命,盡量減少動(dòng)物不必要的痛苦。愛因斯坦說:“我們的任務(wù)是一定要解放我們自己,這需要擴(kuò)大我們同情的圈子,包容所有的生靈,擁抱美妙的大自然?!奔訌?qiáng)醫(yī)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育,是社會(huì)文明進(jìn)步的需求。
4 如何加強(qiáng)醫(yī)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育
4.1 普遍開設(shè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)課程,加大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教學(xué)比例
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的內(nèi)容作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)這門課程的重要組成部分,可以貫穿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的各個(gè)方面予以強(qiáng)調(diào)突出,生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、護(hù)理學(xué)專業(yè)以及其他有關(guān)生命科學(xué)的在校生,包括??粕?、本科生、研究生,都應(yīng)把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的內(nèi)容作為必修的課程;各門學(xué)科的教學(xué)中凡涉及到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,始終貫徹“3R”原則:即替代、減少、優(yōu)化,將科學(xué)發(fā)展的需要與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利相結(jié)合,闡明如何科學(xué)合理地使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
4.2 發(fā)揮教師的主導(dǎo)作用,加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教學(xué)
切實(shí)保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利,要做到知行合一。這要求培訓(xùn)教師本身具有較高的素質(zhì),師資隊(duì)伍比較穩(wěn)定,身教勝于言教,首先教師要加強(qiáng)自身對動(dòng)物福利內(nèi)涵的認(rèn)識,定期接受以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利規(guī)章制度、相關(guān)技術(shù)為主的培訓(xùn),在實(shí)際的教學(xué)工作中以身作則,通過言傳身教對學(xué)生產(chǎn)生影響,潛移默化中使動(dòng)物福利的觀念和意識深入人心;涉及到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí),在實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用上做到最大程度的科學(xué)、合理并兼顧仁愛,同時(shí)依據(jù)自身?xiàng)l件并參照相關(guān)法規(guī)建立符合實(shí)際情況的、切實(shí)可行的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利制度,遵照執(zhí)行。
4.3 定期開展講座,廣泛宣傳教育
醫(yī)學(xué)院校成立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì),定期宣講實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利理念,對本校教師和學(xué)生以及社會(huì)民眾普及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利知識,舉行祭奠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的儀式等,以促進(jìn)培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生、科研工作者和全體教職員工善待動(dòng)物、尊重生命的觀念,同時(shí)近一步敦促全社會(huì)推動(dòng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利事業(yè)的發(fā)展[6]。
綜上,重視并保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利是科學(xué)文明社會(huì)發(fā)展的必然結(jié)果,對醫(yī)學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育意義重大,無論是從高校培養(yǎng)高素質(zhì)合格人才的角度,還是為了醫(yī)學(xué)生自身的完善和發(fā)展,加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利教育都勢在必行,刻不容緩。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] 賀爭鳴,李根平,李冠民,等.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科學(xué).北京:科學(xué)出版社,2011:13.
[2] 王寧,王蕭,王金林.基于動(dòng)物福利的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理.第九屆中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì)論文集,2010:522.
[3] 秦川.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:152-153,13,8.
[4] 盧勝明,趙德明.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)業(yè)化發(fā)展現(xiàn)狀及方向研究. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué),2008,25(4):33-44.
級別:省級期刊
榮譽(yù):中國優(yōu)秀期刊遴選數(shù)據(jù)庫
級別:部級期刊
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