免疫膠體在醫(yī)學(xué)檢驗的進(jìn)展
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一、定性檢測法
免疫膠體金定性檢測法主要有斑點免疫金滲濾法(DIGFA)和膠體金免疫層析法(GICA)。二種方法都具有檢測快速、簡單、特異性強(qiáng)、靈敏度高、抗基質(zhì)干擾強(qiáng)等優(yōu)點,因此是一種適合基層現(xiàn)場篩查的快速檢測方法。
1.斑點免疫金滲濾法
免疫金滲濾技術(shù)在上世紀(jì)80年代中期從固相酶免疫檢定技術(shù)上發(fā)展出來的。斑點免疫金滲濾法作為一種初篩試驗手段，體現(xiàn)了較高的早期診斷價值，有著很好的實用前景。李春暉等人[2]認(rèn)為在糞便隱血檢測中，膠體金滲濾法的靈敏度、抗干擾能力均優(yōu)于鄰甲苯胺法。李如林等[3]利用ELISA、流式微球載體技術(shù)(FMA)和膠體金滲濾三種不同方法進(jìn)行血清梅毒抗體檢測，結(jié)果顯示ELISA、FMA和DIGFA的三種方法靈敏度分別為96.00%、100%和94.00%，三種方法的特異性均為100%，提示三種方法的檢測結(jié)果具有極強(qiáng)的一致性。
2.膠體金免疫層析法
上世紀(jì)90年代初，在免疫金滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上又建立了一種更為簡易快速的免疫層析檢測技術(shù)。Marot-Leblond等[4]采用GICA法進(jìn)行陰道念珠菌檢測,結(jié)果敏感性為100%,特異性為82%,優(yōu)于傳統(tǒng)革蘭染色鏡檢和微生物培養(yǎng)。方春元等[5]用膠體金早早孕定性檢測試驗和化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行比較：2.0IU以下與陰性的符合率為100%、2.0～1000.0IU與弱陽性的符合率為97.2%、1000.0IU以上與強(qiáng)陽性的符合率為97.5%，二者結(jié)果有著較好的一致性。王玉金等[6]建立了一種霍亂弧菌O139膠體金免疫層析快速檢測法，檢測霍亂弧菌O139群的最低檢出濃度為1×105CFU/ml；與細(xì)菌培養(yǎng)法對比檢測184份臨床標(biāo)本，特異性和靈敏度均達(dá)100％。Brunt等采用GICA技術(shù)檢測大腸桿菌O157,檢測限為500個細(xì)菌[7]。梁秋光等[8]用GICA檢測含鼠疫陽性參考血清的鼠型動物溶血血清45份，結(jié)果全部陽性，而間接血凝微量法的對照結(jié)果則無法判斷，表明GICA法在應(yīng)對溶血血清方面有著很大的優(yōu)越性。孟芳等[9]對心臟疾病患者進(jìn)行心肌三聯(lián)測試，其靈敏度肌紅蛋白為100%、肌酸肌酶同工酶為96.3%和肌鈣蛋白為85.2%；結(jié)果表明膠體金法心肌三聯(lián)檢測卡，對診斷急性心肌梗死具有較好的臨床診斷價值。
二、半定量、定量檢
測膠體金本身具有明顯的紅色或粉紅色，可用肉眼與光學(xué)傳感器判斷檢測線(T)的顏色深淺，進(jìn)行半定量、定量分析。
1.半定量檢測法
早期就有人提出硝酸纖維素膜上的顯色面積與抗體濃度呈正相關(guān)[10]，從而建立了半定量測定方法；曹丹如等[11]建立一種伴有定量質(zhì)控點的斑點免疫金滲濾法，可半定量檢測人尿中的微量白蛋白。該立法與散射免疫濁度法的結(jié)果符合性良好，已經(jīng)達(dá)到了對尿微量白蛋白篩查試驗的臨床要求。
2.定量檢測法
隨著膠體金免疫定量檢測儀的出現(xiàn)，開創(chuàng)了一種新型的快速定量分析方法。定量分析方法的原理是基于硝酸纖維素膜上檢測線(T)的顏色深淺與待測物濃度呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系[12]；利用光學(xué)傳感器對試劑條進(jìn)行掃描，與事先制定的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，從而得出定量分析的結(jié)果。由于膠體金試紙條檢測線顯色是一個動態(tài)過程，試紙條的生產(chǎn)工藝、檢測時的工作環(huán)境以及待測樣本的差異性等因素都會影響到這一動態(tài)顯色的結(jié)果[13]。因此有人提出了一種檢測線(T)/質(zhì)控線(C)比值定量法。T/C比值法是依據(jù)硝酸纖維素膜上的T、C線顯色反應(yīng)的影響因素基本一致，通過T、C線吸光值的比值，在一定程度上可以消除時間、溫度和待測樣本等因素對試紙條顯色過程的影響[14]，是一種較為合理的定量檢測方法。謝士嘉等[15]建立的膠體金免疫層析定量方法，能準(zhǔn)確地檢測樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素B，其檢出限為8ng/ml，線性范圍為8~1000ng/ml。聶聰?shù)萚16]所建立的基于T/C比值的膠體金免疫層析方法,對相思子毒素檢測的靈敏度已達(dá)到為30ng/ml，線性范圍30~600ng/ml，敏感性與ELISA法相近，已達(dá)到臨床檢測范圍。
三、膠體金技術(shù)的其他應(yīng)用
1.在免疫電鏡上的應(yīng)用
隨著膠體金技術(shù)的不斷發(fā)展，人們將其與電鏡技術(shù)相結(jié)合，逐步形成了膠體金免疫電鏡技術(shù)。它具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定位精確等優(yōu)點。吳淑燕等[17]建立膠體金標(biāo)記血小板膜糖蛋白的免疫電鏡技術(shù)，結(jié)果表明利用膠體金技術(shù)可以顯著的提高樣品的檢出率，為開展血小板功能研究奠定基礎(chǔ)。
2.在納米磁與核酸適配體上的應(yīng)用
納米磁分離-膠體金與核酸適配體-膠體金為當(dāng)前二種新型的膠體金技術(shù)。納米磁性微粒和核酸適配體作為特異性識別元件，能夠?qū)蟹肿訌某煞謴?fù)雜的生物體系中分離出來，起到樣品的濃縮作用，從而提高檢測的靈敏度和檢出率[18]。
3.在多項聯(lián)合檢測技術(shù)上的應(yīng)用
多項聯(lián)合檢測技術(shù)可以同時檢測多種成分，能節(jié)省大量的檢測時間和成本，具有很大的應(yīng)用價值，是未來的發(fā)展方向。吳堅美等[19]建立了一種新型膠體金免疫層析試紙條，可同時檢測巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、弓形蟲和單純皰疹病毒的4種抗體；與ELISA法對比，其符合率為97.90%~100%。吳文曄等[20]建立了一種能同時檢測檢測黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A兩種真菌毒素的膠體金試紙條，二種毒素的靈敏度均可達(dá)到2.5μg/L，且二者之間互不干擾，重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好。
四、結(jié)語
作為一種新的免疫學(xué)方法，免疫膠體金技術(shù)是繼免疫酶標(biāo)技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)之后的第四大免疫標(biāo)記技術(shù)[21]。與其他方法比較，具有快捷方便等優(yōu)勢，但也存在著檢測結(jié)果易受到試驗環(huán)境因素的影響等不足。如血、尿等標(biāo)本形成的試紙條背景噪聲，對儀器定量分析有明顯的干擾作用[22]。另外，免疫膠體金與其他傳統(tǒng)檢測方法相比，在檢出率、靈敏度方面都還存在一定的差異。有報道以ELISA法為標(biāo)準(zhǔn)時，免疫膠體金法測定HBsAg的檢出率為56.76%(105/185)[23]；以電化學(xué)發(fā)光免疫分析法為標(biāo)準(zhǔn)時，檢出率只有為32.00％(16/50)[24]。穆煜等[25]將膠體金免疫層析法甲型/乙型流感快速檢測試劑用于H1N1型流感病毒的篩查，其陽性預(yù)示值為40.0%，陰性預(yù)示值為95.8%；實驗靈敏度為66.7%，診斷特異性是88.5%。認(rèn)為此法作為初步篩查實驗時還具有一定的局限性。由此可見，有必要建立一套膠體金制備的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，以保證試劑質(zhì)量，提高檢測穩(wěn)定性。同時將免疫膠體金與其他不同平臺相結(jié)合，可使其檢測技術(shù)再上一個新的臺階，在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用也會更為廣泛，對于急診標(biāo)本或疫情現(xiàn)場的快速檢測都有著重大意義。
作者：章小雨 戴曉愛 單位：縉云縣疾病預(yù)防控制中心檢驗科
