免疫多糖對幼魚性能的影響
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本文作者：屈亮1 劉立鶴2 譚斌1 齊志華1 王斌1 作者單位：1.安琪酵母股份有限公司 2.武漢工業(yè)學院動物科學與營養(yǎng)工程學院
草魚是當前我國養(yǎng)殖量最大的淡水養(yǎng)殖品種之一，年產(chǎn)量超過400萬t，在草魚的飼養(yǎng)過程中，苗種階段的飼養(yǎng)至關(guān)重要，該階段幼魚處在生長發(fā)育的關(guān)鍵時期，且這時期水溫逐漸升高，水體中病原微生物復雜多變，幼魚病害較多（腸炎、出血、爛鰓和白頭白嘴病等），病死率高。為了提高該時期苗種的成活率，養(yǎng)殖戶通常會采取一些預防性措施，比較常規(guī)的措施就是在該時期的幼魚餌料中適量加入一些抗生素藥物來降低病害的發(fā)生率，然而隨著當前抗生素藥物的使用逐漸受到限制，一些免疫增強劑逐漸被人們關(guān)注。免疫增強劑是一個有著廣闊應(yīng)用前景的新興領(lǐng)域，水產(chǎn)中較常用的免疫增強劑主要有合成化學劑類、微生物類衍生物、動植物提取物、維生素和乳鐵蛋白等，它們的生物相容性好、可降解、不會造成環(huán)境污染且對人類安全，并且能顯著提高細胞吞噬活性和溶菌酶活性，增強機體清除超氧化陰離子的能力。免疫增強劑主要通過非特異性免疫因子來達到防病和抗病目的，雖然不產(chǎn)生免疫記憶，但卻能夠在短期內(nèi)顯著提高機體的抗病能力。酵母免疫多糖就是一種富含β-葡聚糖和1,3-甘露寡糖的天然免疫增強劑，由于其使用方便而日漸受到人們的青睞。文章就酵母免疫多糖在草魚苗種中的應(yīng)用試驗來探討酵母免疫多糖對草魚生長性能及免疫功能的改善，從而為提高苗種階段草魚的成活率提供一種新的思路和理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗飼料配方及試驗設(shè)計
基礎(chǔ)飼料1為含4%魚粉的實用飼料，基礎(chǔ)飼料2不含魚粉，其組成及營養(yǎng)成分含量見表1。飼料原料全部經(jīng)粉碎，過60目篩，微量成分采取逐級擴大法添加，與大宗原料混合均勻后，加工成直徑為1.5mm的顆粒，經(jīng)600℃烘干、破碎和過篩，最終篩選出直徑在0.3~0.45mm的顆粒置于-20℃冰箱備用。根據(jù)不同的酵母免疫多糖添加量，分組進行試驗，其中2個對照組，7個試驗組，共9個處理，分別為含有4%魚粉試驗組的4個處理（0、0.5、1和2g/kg酵母免疫多糖）和不含4%魚粉的試驗組的5個處理（0、0.5、1、2和5g/kg酵母免疫多糖）。
1.2試驗魚的飼養(yǎng)管理
試驗共設(shè)9個處理，每處理組設(shè)4個平行，相應(yīng)安排36個水族箱（70cm×35cm×95cm），每個水族箱容水量為200L，靜水，氧氣頭不間斷增氧，每天換掉1/3的水并及時加注新水。飼養(yǎng)試驗在安琪酵母公司當陽試驗場進行，試驗用魚為草魚幼魚，試驗魚從魚塘取出時先經(jīng)藥液浸浴消毒后，暫養(yǎng)在水族箱中，用基礎(chǔ)飼料馴化2周，待魚安定并習慣后開始試驗。每箱放養(yǎng)30尾，試驗開始時幼魚平均體質(zhì)量（4.10±0.10）g，試驗魚規(guī)格整齊且健康活潑，隨機分配到各水族箱中，每天投飼量約占體質(zhì)量的2%，日投喂4次（早上07：00、中午11：00、下午15：00和晚上19：00），每次投餌時做到少量多次，讓幼魚盡量飽食，幼魚不搶食時停止投食。每周定期消毒2次，養(yǎng)殖試驗期間水溫（27±2）℃，溶解氧>5.0mg/L、NH3-N<0.3mg/L，晝夜持續(xù)供氣，飼養(yǎng)時間2010年8月20日至10月1日，共40d。
1.3樣品收集和分析
在養(yǎng)殖試驗開始前及結(jié)束后，將各處理組的幼魚稱質(zhì)量，統(tǒng)計各處理組的增質(zhì)量情況，試驗期間每天統(tǒng)計各組魚的采食量。試驗結(jié)束后，魚禁食1d后稱質(zhì)量，每個試驗水箱隨機取出3尾魚用MS-222麻醉后從尾鰭靜脈取血，血樣放置在4℃冰箱中保存約3h，待血清充分析出后，在3000r/min下離心15min，分離出上層血清轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中，用日立HITACHI7600-120全自動生化分析儀進行血液生化指標測定。
1.4測定指標與方法
試驗開始后，每天統(tǒng)計各試驗組幼魚的死亡情況，死魚及時撈出并測定其體質(zhì)量，并以此來矯正試驗結(jié)束時該試驗組的總增質(zhì)量。餌料系數(shù)=總投飼量（g）／（末質(zhì)量-初質(zhì)量）（g）；病死率=試驗幼魚死亡數(shù)／試驗初魚尾數(shù)×100%
1.5數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計方法
試驗結(jié)果用平均數(shù)±標準差表示，試驗數(shù)據(jù)通過SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行處理分析，數(shù)據(jù)先用單因素方差分析進行處理，百分數(shù)需經(jīng)過平方根反正弦轉(zhuǎn)換，若組間有差異，再用Duncan氏多重比較法檢驗不同酵母免疫多糖添加量下草魚幼魚的生長性能、病死率及血液各項指標間的差異顯著性，P<0.05為顯著性水平。
2試驗結(jié)果分析
2.1草魚幼魚存活率
從表2和表3可見：經(jīng)過40d飼養(yǎng)，在含有魚粉的飼料中添加酵母免疫多糖能減低幼魚的病死率，0.5‰~2‰不同梯度多糖添加對幼魚的存活率影響不大，且隨著添加量的增加，累計病死率逐漸降低。而在不含有魚粉的草魚幼魚飼料中添加酵母免疫多糖對病死率影響較大，對照組40d試驗期間累計病死率達到20.83%，是所有處理組中病死率最高的，在不含魚粉的飼料中添加酵母免疫多糖后，與該對照組相比草魚幼魚的成活率有較大幅度的提升，并隨著添加量的增加各組幼魚病死率有逐漸降低的趨勢，5‰添加組在整個試驗周期未見幼魚死亡。
2.2草魚幼魚生長性能的變化
從表2和表3可見：在含有魚粉或不含魚粉的草魚飼料中不同比例添加酵母免疫多糖能有效降低餌料系數(shù)，其中在含有魚粉的飼料中添加0.5‰酵母免疫多糖降低餌料系數(shù)的比例最大，與魚粉對照組相比降幅達12.4%，不同酵母免疫多糖添加量間的餌料系數(shù)沒有表現(xiàn)出顯著差異，0.5‰多糖組表現(xiàn)出最佳的生長性能，幼魚病死率低，增質(zhì)量最明顯。在不含魚粉的飼料中使用酵母免疫多糖也能顯著降低餌料系數(shù)，其中5‰多糖組的生長狀況最佳，整個試驗結(jié)束時未出現(xiàn)死亡情況且增質(zhì)量最明顯。魚粉添加組幼魚的生長性能普遍好于未添加魚粉組，從表3可見：酵母免疫多糖的添加極大地改善了無添加魚粉組幼魚的生長性能。
2.3草魚血液生化指標的變化
從表4可見：血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性及免疫球蛋白含量，隨著酵母免疫多糖添加量的增加有降低的趨勢，其中2‰多糖組的以上2指標顯著低于其他低劑量組（0.5‰多糖組和1‰多糖組）和對照組1，而0.5‰多糖組、1‰多糖組和對照組1三者間在這2項指標上不存在顯著性差異；血清中免疫球蛋白含量和堿性磷酸酶活性隨著酵母多糖添加量的增加有逐漸增加的趨勢，其中1‰多糖組及2‰多糖組血清中堿性磷酸酶活性顯著高于對照組1及0.5‰多糖組。從表5可見，2‰多糖組及5‰多糖組血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對照組2和酵母免疫多糖低劑量添加組，血清中免疫球蛋白含量及堿性磷酸酶活性有隨酵母免疫多糖添加量的提高而增加的趨勢，特別是多糖添加組血清中堿性磷酸酶活性均顯著高于對照組2。
3討論
酵母免疫多糖是酵母細胞壁的重要組成部分，占酵母細胞壁干質(zhì)量的40%，因提取方式的不同，其組成也有所變化，其主要成分為β-葡聚糖和甘露寡糖。酵母細胞壁多糖能激發(fā)和增加機體的免疫力和抗病力，對細菌、真菌和病毒引起的水產(chǎn)動物疾病及運輸、分塘、氣候變化和養(yǎng)殖水環(huán)境變化等引起的應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生非特異性免疫力，從而降低由應(yīng)激導致的疾病發(fā)生率。
3.1酵母免疫多糖對草魚幼魚病死率及生長性能的影響
通過試驗可見，在草魚飼料當中適當添加酵母細胞壁多糖確實能提高草魚幼魚的生長性能，降低幼苗階段的病死率。尤其是對于沒有添加魚粉的飼料組來說，酵母免疫多糖的添加不僅有效降低成本，而且顯著降低了餌料系數(shù)，促進了幼魚的快速生長。酵母免疫多糖能提高草魚苗種的成活率和生產(chǎn)性能，可能主要由于酵母免疫多糖的添加激活了幼魚自身免疫系統(tǒng)，從而提高了幼魚對周圍應(yīng)激及養(yǎng)殖病害的抵抗能力，一方面減少養(yǎng)殖病害的發(fā)生，另一方面減少了機體在應(yīng)對病原菌方面的能量消耗進而間接促進了生長性能的提高，與李海燕對豐產(chǎn)鯽的研究結(jié)果相一致。酵母免疫多糖的添加增加了飼料的適口性，進而增強了幼魚采食餌料的主動性并提高采食量。在日常投飼過程中我們也發(fā)現(xiàn)添加了酵母免疫多糖的餌料明顯具有誘食作用，草魚幼魚表現(xiàn)出集群和搶食等現(xiàn)象，而沒有添加酵母免疫多糖的對照組幼魚采食不積極。推測主要是因為該酵母免疫多糖中還含有未被完全分離的酵母抽提物，而酵母抽提物中含有豐富的氨基酸和核苷酸能顯著改善飼料原料的適口性，促進動物采食。Brunt等2005年也報道了用含酵母免疫多糖（2.5‰的添加量）的飼料作為虹鱒幼苗的開口餌料能顯著提高幼苗的攝食量，最終提高幼魚的成活率及體長和體質(zhì)量。
3.2酵母免疫多糖對草魚幼魚血液生化指標的影響
關(guān)于酵母免疫多糖對水產(chǎn)動物的免疫效果的影響，以前已經(jīng)做過一些試驗，試驗表明：酵母免疫多糖對提高水產(chǎn)動物的免疫能力效果明顯。試驗也再次驗證了這一結(jié)論，表明在草魚幼魚飼料中添加酵母免疫多糖，對提高攝食量和增質(zhì)量及降低病死率和料重比有明顯的效果。試驗結(jié)果表明：在飼料中添加一定質(zhì)量濃度的酵母免疫多糖，能夠顯著降低病死率和料重比，同時增加草魚的攝食量，對草魚的肝功能也有一定改善效果，這與異育銀鯽的研究結(jié)果相一致。血清中酶活性主要來源于肝膽系統(tǒng)，試驗顯示，飼料中添加酵母多糖能顯著降低谷丙谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性，預示著具有保護肝組織結(jié)構(gòu)完整性和改善肝功能的作用。堿性磷酸酶是一種重要的代謝調(diào)控酶，與DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的代謝有關(guān)，對水生動物的生長有重要意義，也是溶菌體酶的重要組成部分，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，試驗中與對照組相比酵母免疫多糖的添加提高了堿性磷酸酶活性，使機體處于良好的生理狀態(tài)，維持機體旺盛的代謝功能，草魚幼魚從而表現(xiàn)出良好的生長狀態(tài)，機體非特異性免疫力也有所提高。
4結(jié)論
酵母免疫多糖具有提高存活率和促生長作用，同時能減少抗生素類藥物的用量，是控制水產(chǎn)養(yǎng)殖動物特別是甲殼類動物傳染性病害的有效途徑，有利于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。是一種安全、可靠且能廣泛應(yīng)用的免疫增強劑，一般來說在疾病預防期或萌發(fā)期使用最為有效，隨著研究的深入和認識的加深，它必將成為控制水產(chǎn)動物疾病的有效工具。
