堅(jiān)持的故事精選(九篇)

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第1篇：堅(jiān)持的故事范文

做股票就是這樣，講究隨機(jī)應(yīng)變，還有很多朋友在講一件事，就是拿不住票，比如咱們之前提示的002362漢王科技，該股是上周四提示低吸的，到現(xiàn)在漲幅都38%，但是出局較早盈利也不多。

對(duì)于趨勢(shì)股應(yīng)該怎么辦，這里簡(jiǎn)單的講一下，如果是趨勢(shì)股的二次起漲點(diǎn)，比如漢王科技，低吸在十日線區(qū)域，理論上只要不跌破十日線就可以拿一拿，如果股價(jià)繼續(xù)收盤在五日線上方，則表示該股仍然很強(qiáng)，則可以繼續(xù)持股不動(dòng)。

什么時(shí)候出局，首要條件就是滯漲就走，或者是連續(xù)大陽線后股價(jià)脫離短期均線較遠(yuǎn)則考慮出局，比如該股上周五再次漲停后今日上攻就具備了高拋的條件。

其實(shí)做趨勢(shì)股很簡(jiǎn)單，大家掌握幾個(gè)要點(diǎn)就行了，由于本人還需要實(shí)時(shí)帶盤，所以對(duì)于每一只個(gè)股的跟蹤恐怕不會(huì)很及時(shí)，所以有時(shí)候還需要大家自己把握下。

總之，咱們要求的是低吸在起漲的位置，止損位也就設(shè)在咱們的進(jìn)場(chǎng)點(diǎn)。

說了這么多，明白了舉手下。

神農(nóng)基因：獲自然人曹歐劼舉牌

神農(nóng)基因公告，截至8月31日收盤，股東曹歐劼通過集中競(jìng)價(jià)、大宗交易方式，合計(jì)增持公司股份5120.81萬股，持股比例達(dá)到5%，觸及舉牌線，并存在繼續(xù)增持的可能。

豐林集團(tuán)：實(shí)控人的一致行動(dòng)人增持公司股份

豐林集團(tuán)（601996）公告，公司實(shí)際控制人劉一川之一致行動(dòng)人劉一暐8月31日通過集中競(jìng)價(jià)交易增持了2萬股，占公司總股本的0.0021%。

第2篇：堅(jiān)持的故事范文

長(zhǎng)期盤整的股票不買

長(zhǎng)期盤整、不隨大盤漲跌，意味著無莊家或撤莊后的股票。這種股票往往前一階段歷史有放天量暴漲的情況，正因?yàn)樵摴蔁o人照顧，只能長(zhǎng)期盤整。對(duì)于這類比較難對(duì)付的莊股，投資者寧可放棄一千，不可進(jìn)入一個(gè)，應(yīng)該適當(dāng)回避。

二、權(quán)個(gè)股堅(jiān)決不買。

除權(quán)是市場(chǎng)主力逃離的另一個(gè)機(jī)會(huì)，比如一只股從3元炒到20元，很少有人去接盤，但它10送10除權(quán)后只有10元，價(jià)格低了一半造成了價(jià)格低的錯(cuò)覺，人們喜歡貪便宜買低價(jià)，一旦散戶進(jìn)場(chǎng)接盤，市場(chǎng)主力卻逃得干干凈凈。如果大除權(quán)后又遇到天量，更是絕不可以碰。

三、利好公開的股票堅(jiān)決不買

利好公開的股票公開的股票高不可攀，價(jià)格坐上火箭。莊家的投資機(jī)構(gòu)見所有散戶進(jìn)去，便立刻反向操作，大規(guī)模洗盤，砸到散戶割肉出局為止。

公開利好幾乎沒有一次使個(gè)股和大盤上漲。不管大盤還是個(gè)股，聽到利好出現(xiàn)或傳聞的利好兌現(xiàn)，不要猶豫不決，先退為主。

四、基金重倉的個(gè)股堅(jiān)決不買。

因?yàn)榛鹳~戶不能隱瞞，一季度公布一次?；鸩蛔f，有盈利就跑。當(dāng)然這個(gè)理論有時(shí)間性。牛市一般可以忽略不計(jì)，牛市個(gè)股普漲，基金不會(huì)拋售。熊市里基金溜之大吉，散戶全部被套，所以熊市時(shí)基金重倉堅(jiān)決不買。

五、放過天量的股票不要買

天量往往是做莊機(jī)構(gòu)用利好消息在一天之內(nèi)把所有或大部分籌碼一天派發(fā)給聽到消息的散戶，有句話為“天量見天價(jià)，見了天價(jià)回老家”，非常形象。另外股市高手往往都是“天不怕地不怕，就怕成交量放大”。放天量一般是市場(chǎng)主力開始逃離的信號(hào)。如果投資者確實(shí)對(duì)放天量的股票感興趣，也應(yīng)該等一等，可以在放天量當(dāng)天的收盤價(jià)上畫一條直線，如果以后的價(jià)格碰到這條線，倒是可以考慮買進(jìn)的。

六、有大問題的個(gè)股堅(jiān)決不買。

受管理層嚴(yán)肅處理的先不進(jìn)去，先觀望一下再說。問題股如果出現(xiàn)大幅上漲，則可以肯定地認(rèn)為是機(jī)構(gòu)在炒作。但是，這些股票或者面臨監(jiān)管，或者會(huì)出現(xiàn)資金鏈斷裂，風(fēng)險(xiǎn)巨大，散戶股民駕馭不了，不值得去冒險(xiǎn)。

第3篇：堅(jiān)持的故事范文

員工持股一般可以分為投資型、激勵(lì)型、福利型三種。在我國(guó)，員工持股本應(yīng)是以完善企業(yè)治理結(jié)構(gòu)為目的，通過企業(yè)股權(quán)結(jié)構(gòu)的改變，使企業(yè)績(jī)效得到提高，這是符合企業(yè)股東利益的。也就是說應(yīng)以激勵(lì)型導(dǎo)向?yàn)橹鹘T工持股計(jì)劃。而實(shí)際實(shí)行的員工持股計(jì)劃，一般是以配送或低價(jià)出售的方式轉(zhuǎn)讓給企業(yè)內(nèi)部職工，因此有過分的福利化傾向?！皬V灑胡椒面”起不到應(yīng)有的作用。

2　股權(quán)分散或股權(quán)過于集中的情況依舊存在

在有些實(shí)行合作制的企業(yè)里，平等出資，共同經(jīng)營(yíng)，“人人擁有平等的投票權(quán)”，常會(huì)使企業(yè)的決策權(quán)相對(duì)分散。難以有效地做出決策，起不到激勵(lì)和約束作用。有一家蘇州企業(yè)在改制過程中實(shí)施了員工持股，全院200余名職工全部擁有股份，并且差距不大，改制的推進(jìn)很順亂但是幾個(gè)月后就出現(xiàn)了決策不暢，甚至達(dá)到了幾乎沒有決策就可以通過的地步。

另一個(gè)極端是員工持股比例過高，又會(huì)強(qiáng)化“內(nèi)部人控制”，并對(duì)外部股東形成歧視。內(nèi)部股東利用“內(nèi)部人”擁有企業(yè)大量信息的優(yōu)勢(shì)，為自己牟取好處。造成內(nèi)部股東的道德風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)員工過度持股會(huì)再次形成企業(yè)封閉的產(chǎn)權(quán)體系，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致企業(yè)產(chǎn)權(quán)凝滯，影響企業(yè)的長(zhǎng)期發(fā)展。常州某改制民營(yíng)企業(yè)，股權(quán)集中在初始改制企業(yè)元老的36人中，這對(duì)于股權(quán)而言還不算非常集中的情況，但是一樣有企業(yè)股東群體與非股東群體自然形成對(duì)立的局面，因?yàn)榉枪蓶|群體常常對(duì)決策層的“高壓內(nèi)部人控制”表示不滿，從而嚴(yán)重影響了生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)。

3　出資能力不足與認(rèn)股資金來源問題普遍存在

我國(guó)員工工資普遍偏低，員工積存資金有限，難以一次性支付認(rèn)股資金，導(dǎo)致很多企業(yè)在實(shí)施員工持股計(jì)劃時(shí)不斷退縮與妥協(xié)，員工持股范圍不斷縮小，客觀上起不到集資、激勵(lì)的作用。美國(guó)為推行員工持股計(jì)劃采用了貸款扶持等多種手段，而在我國(guó)通過向銀行貸款繳納認(rèn)股資金卻有一定的困難。主要原因是銀行要考慮貸款風(fēng)險(xiǎn)，許多企業(yè)經(jīng)營(yíng)前景不明，不符合貸款條件。

在實(shí)踐中經(jīng)常遇到員工想持股卻買不起的尷尬。廣州市某設(shè)計(jì)院屬于國(guó)內(nèi)高端設(shè)計(jì)院，員工500余名。固定資產(chǎn)存量也比較多。在改制過程中，辦公大樓評(píng)估價(jià)值很高，因?yàn)樵撧k公地點(diǎn)對(duì)該院而言具有多年積累下來的品牌價(jià)值，所以，不能因?yàn)楦闹贫徇w或者上繳。在增資擴(kuò)股過程中，僅僅因?yàn)橘徺I辦公大樓而產(chǎn)生的持股職工人均指數(shù)就達(dá)到數(shù)萬元以上，出現(xiàn)過導(dǎo)致改制暫時(shí)停滯。

第4篇：堅(jiān)持的故事范文

渴望暴富

女白領(lǐng)迷上炒股

2012年6月，女白領(lǐng)林曼隨閨蜜賈玲玲去澳大利亞墨爾本度假，她倆住在賈玲玲的私人別墅里：前后大花園，桂花、玉蘭、玫瑰花連成片，花團(tuán)錦簇中還有秋千架、游泳池。林曼一邊參觀一邊嘖嘖贊嘆，羨慕不已。賈玲玲告訴她在墨爾本200多萬就能買一套200平米的獨(dú)立別墅，而且還不像國(guó)內(nèi)限定房屋的使用權(quán)年限，勸林曼也在國(guó)外買套房子，自住、投資兩不誤……

旅行結(jié)束，林曼的心也徹底亂了：雖然自己也過上了有車有房的生活，但和閨蜜比起來還是差了一大截！一種強(qiáng)烈的沖動(dòng)撞擊著她的五臟六腑，她實(shí)在也渴望過過閨蜜的那種優(yōu)質(zhì)生活！時(shí)年30歲的林曼是四川邛崍人，父母都是普通工人，林曼在成都一家外企上班，薪水優(yōu)厚。她的丈夫蘇興東在成都經(jīng)營(yíng)火鍋店，是重慶人?；楹髢赡?，兩人在成都市中心按揭了一套120平米的房子，購置了一輛北京現(xiàn)代，兒子房子車子都有了，林曼一度覺得自己過得還算幸福，但自從見識(shí)了閨蜜的優(yōu)質(zhì)生活，林曼的心態(tài)發(fā)生了變化。

林曼每月工資有七八千，蘇興東的火鍋店每月平均也能進(jìn)賬兩萬多，雖然兩人收入還不錯(cuò)，但是每月開銷也很大，還有房貸的壓力。而她和蘇興東的收入幾乎是固定的，兩邊的家庭也幫不上什么忙，要實(shí)現(xiàn)在國(guó)外購置別墅的愿望，除非有別的進(jìn)錢的道兒！為多掙錢，林曼努力工作，還利用業(yè)余時(shí)間去做兼職，但這種賺錢方式對(duì)于動(dòng)輒幾百萬的別墅來說無異于杯水車薪！

2012年7月初的一天，林曼聽身邊的朋友說有人靠炒股賺了好幾百萬，正為找不到發(fā)財(cái)捷徑的林曼動(dòng)心了。7月18日，此前從未涉足股市的林曼也去證券公司開了戶，并購買了厚厚一沓炒股的書籍，惡補(bǔ)理論知識(shí)，一有時(shí)間就在財(cái)經(jīng)頻道追看專家股評(píng)。不僅如此，林曼還加了好幾個(gè)炒股QQ群，在QQ群里，林曼稱自己是個(gè)炒股新手，希望群里的高手能多多指點(diǎn)自己這個(gè)“菜鳥”。最初，她比較謹(jǐn)慎，只拿出兩三萬元試水。一次，林曼在一個(gè)群友的指點(diǎn)下買了一支藥業(yè)股票，賺了1萬多元。嘗到甜頭后，林曼的心漸漸不安分了，膽子也大了起來，開始十萬八萬地炒。

自從迷上炒股后，林曼幾乎到了“走火入魔”的地步。早上醒來不刷牙、不洗臉，第一件事就是把電腦打開，看看股票行情，午睡都不敢休息，一直盯著屏幕，幾乎從開盤到收盤，都沒離開過電腦。為了炒股方便，林曼干脆把四歲的兒子送到邛崍給父母照看。每天晚上10點(diǎn)多，蘇興東從火鍋店回到家里，發(fā)現(xiàn)林曼還趴在電腦桌前，看股票走勢(shì)，開口就向他抱怨自己買的股票又跌了多少。

掉進(jìn)陷阱

200萬被蠶食殆盡

或許是運(yùn)氣不太好，林曼雖然有賺有賠，但賠的總是比賺的多。每次炒股虧了，林曼總會(huì)在群里跟群友們抱怨，說自己按照炒股書籍的理論操作，買的都是行業(yè)內(nèi)規(guī)模數(shù)一數(shù)二、凈資產(chǎn)優(yōu)良，財(cái)務(wù)報(bào)表上盈利能力都很強(qiáng)的企業(yè)股票，怎么還是不掙錢？蘇興東見妻子因?yàn)楣善闭彀β晣@氣，安慰她沒有炒股的命，勸她不要再炒股。

就在林曼因?yàn)楣善庇魫炛H，2014年5月的一天，有個(gè)網(wǎng)名叫“炒股高手”的主動(dòng)找林曼私聊，“炒股高手”自稱叫王鴻飛，已有十多年的炒股歷史，靠炒股從草根變成了千萬富翁。王鴻飛還向林曼透露，說自己一開始炒股也跟她一樣，10次炒股9次都是賠，直到后來購買了一款名叫“金宏點(diǎn)金”的炒股軟件，靠著這款炒股軟件，他在股市開始一路高歌，最終躋身千萬富翁的行列。

林曼半信半疑，問王鴻飛：“什么炒股軟件這么神奇??？”王鴻飛介紹道：“‘金宏點(diǎn)金’炒股軟件是利用金宏證券行情分析系統(tǒng)選出的股票，可分析股票K線圖，并預(yù)測(cè)何時(shí)買入、何時(shí)拋出，這款軟件不同于其他的炒股軟件，可享受導(dǎo)師實(shí)盤指導(dǎo)，一周內(nèi)獲利30%以上，所以這款軟件又被廣大股民們稱為‘炒股神器’。”王鴻飛還將自己在別墅里的生活起居和開奔馳的一系列照片發(fā)給林曼看，說別墅和奔馳都是靠炒股軟件賺來的。王鴻飛還建議林曼先進(jìn)公司的炒股群了解一下情況再?zèng)Q定是否購買。林曼決定看看效果是否真如王鴻飛說的那樣神奇，于是加入了王鴻飛推薦的炒股QQ群。

加入群里后，林曼看到這個(gè)群每天早上都會(huì)推薦若干支股票，群主聲稱都是利用“金宏證券行情分析系統(tǒng)”選出的股票，而這些股票短線都表現(xiàn)不錯(cuò)，甚至接連有股票沖上漲停，再加上群主經(jīng)常統(tǒng)計(jì)“某某股票自推薦來累計(jì)上漲50%……”通過一段時(shí)間的觀察，再加上之前有王鴻飛的現(xiàn)身說法，雖然這款炒股軟件的價(jià)格高達(dá)1.98萬每年，林曼還是掏錢購買了。

買了炒股軟件之后，銷售人員讓林曼加公司的一位導(dǎo)師為好友，導(dǎo)師接連向林曼推薦了幾支股票，林曼按導(dǎo)師的建議買進(jìn)一支科技股，僅隔幾天，就賺了5000多。2014年7月的一天，林曼跟導(dǎo)師商量，說自己在2013年購買了3萬股“xx重工”的股票，在九塊多的價(jià)位剛買入，價(jià)位就不斷走低，一直跌到現(xiàn)在的五塊多，她有點(diǎn)熬不住了，想拋掉。導(dǎo)師預(yù)測(cè)股市即將回暖，建議她再觀望一陣子。

2014年8月初，股市行情一改連續(xù)多年的頹勢(shì)，上證指數(shù)就上漲了10%，不少個(gè)股上漲幅度超過20%，林曼發(fā)現(xiàn)她購買的那支股票正在持續(xù)上漲，她更是慶幸聽了王鴻飛的建議購買了炒股軟件，不然這次就虧大了，于是對(duì)王鴻飛說了一籮筐感謝的話。然而，此后林曼按照導(dǎo)師推薦的買了幾支股票，不但沒有獲得巨額盈利，反而因?yàn)橥扑]的股票多數(shù)下跌而出現(xiàn)大幅虧損。林曼跟王鴻飛吐槽，王鴻飛勸林曼再多花點(diǎn)錢，可以換一位更高級(jí)的“導(dǎo)師”。于是林曼又花了兩萬元，換了一個(gè)更高級(jí)別的導(dǎo)師。

2014年10月初，導(dǎo)師推薦給林曼一個(gè)名叫“創(chuàng)投金融網(wǎng)”的炒股網(wǎng)站，稱這是一家香港公司，提供遠(yuǎn)程開戶的服務(wù)，開戶后可以炒A股所有的股票。和真實(shí)股票不同的是，這種在網(wǎng)上平臺(tái)炒股，可以買漲賺錢，也可以買跌賺錢（做空），同時(shí)可以像股指期貨那樣T+0交易，還可以像期貨那樣采用保證金交易的方法，實(shí)現(xiàn)以小博大的杠桿獲利，資金杠桿最高可達(dá)到100倍。同時(shí)，這家網(wǎng)站還提供“模擬盤”供投資者先熟悉一下操作方法。林曼決定嘗試一番，并用模擬賬戶試驗(yàn)了一個(gè)多月，發(fā)現(xiàn)確實(shí)很容易獲利，于是拿出5萬元開了真實(shí)賬戶。

2014年12月的一天，林曼和王鴻飛在網(wǎng)上聊股票的事情，王鴻飛告訴林曼自己新近根據(jù)導(dǎo)師的建議，在網(wǎng)上投了200萬元購買“創(chuàng)投金融網(wǎng)”的“虛擬股票”，沒想到僅僅一個(gè)多月就翻番賺了200萬，并將盈利截圖發(fā)給林曼看。見王鴻飛一個(gè)多月居然賺了200萬，林曼眼紅急了。王鴻飛分析2014年的股市有史無前例24個(gè)連續(xù)漲的“超級(jí)大牛”，8月底出現(xiàn)六連陽盛況，11月28日的深滬兩市交易額超過7000億人民幣，創(chuàng)下人類有股票市場(chǎng)以來的一個(gè)最高紀(jì)錄，牛市開啟已無任何懸念，可能還有一漲行情！

王鴻飛的分析讓林曼又重新看到了希望，她決定也投200萬購買“虛擬股票”，到時(shí)就能賺一倍，這樣她在國(guó)外買別墅的夢(mèng)想就能實(shí)現(xiàn)了。然而，200萬不是小數(shù)目，林曼手里的全部積蓄加起來也不過30萬元，于是，林曼鼓動(dòng)老公想辦法去借錢，卻遭到蘇興東的堅(jiān)決反對(duì)。

事已至此，林曼只好將手里僅有的30萬元全部買了“虛擬股票”，投資半個(gè)多月，30萬元變成了40萬元，凈賺10萬元。眼巴巴看著“虛擬股票”一路飄紅，林曼心急如焚，只好自己硬著頭皮想辦法籌措資金。此后，林曼瞞著丈夫向大姐、二姐、同事以及閨蜜借款70萬元，透支了30萬元的信用卡，又借了30萬元的高利貸，還向做藥材生意的表哥借了40萬元，許諾兩個(gè)月之內(nèi)本利歸還其50萬元，再加上之前的30萬元，一共200萬元全部用來購買“虛擬股票”。

然而，林曼沒想到，真實(shí)賬戶的交易速度極慢。有時(shí)候，林曼看準(zhǔn)某支股票要漲，下單后卻遲遲不能成交，等到成交時(shí)，價(jià)格和當(dāng)初看見的相去甚遠(yuǎn)，再加上杠桿放大效應(yīng)，不到一個(gè)月，林曼的噩夢(mèng)來臨了。她驚駭?shù)匕l(fā)現(xiàn)自己購買的200萬元只剩下5萬多元，林曼氣壞了，想找向自己推薦股票的導(dǎo)師理論，卻發(fā)現(xiàn)自己被對(duì)方拉黑了。當(dāng)初極力向她推薦“炒股軟件”的王鴻飛也退出了炒股群，也把她拉黑了，而“創(chuàng)投金融網(wǎng)”的網(wǎng)站也已經(jīng)打不開了，林曼這才意識(shí)到自己陷入了一個(gè)可怕的騙局，趕緊報(bào)了警。事已至此，林曼只得硬著頭皮將自己被騙200萬的事情告訴丈夫，聽說妻子因?yàn)槌垂杀或_去200萬，蘇興東險(xiǎn)些當(dāng)場(chǎng)暈倒！

徹底沉淪

劫殺富婆無歸路

隨后，警方介入調(diào)查。原來，林曼陷入了一場(chǎng)連環(huán)騙局。由騙子公司先派出一個(gè)人混入炒股QQ群尋找目標(biāo)，然后利用對(duì)方發(fā)財(cái)心切的心理伺機(jī)引誘對(duì)方購買所謂的“炒股神器”，再一步步設(shè)下圈套讓目標(biāo)購買“虛擬股票”。而這種“虛擬股票T+0”交易平臺(tái)，其實(shí)是一種違法的騙術(shù)，投資者炒的股票根本沒有到達(dá)滬深交易所，而是被網(wǎng)站的后臺(tái)公司截走，形成公司和投資人之間對(duì)賭漲跌。投資人虧錢就意味著這家公司賺錢，而這樣的公司通常會(huì)采用“延遲下單指令”、“誤導(dǎo)交易走勢(shì)”等方法，故意導(dǎo)致投資人虧損，錢就流入了這些公司手中。警方還無奈地表示由于犯罪分子隱藏得很深，因此維權(quán)困難……

自知理虧的林曼以不愿連累丈夫?yàn)橛?，向蘇興東提出離婚。雖然很氣惱妻子的鬼迷心竅，蘇興東還是決定和妻子共同面對(duì)。之后，蘇興東變賣了車子和家里所有值錢的東西，并將火鍋店盤了出去用于還債，然而，這只是杯水車薪。面對(duì)不停上門討債的債主，夫妻倆除了哀求寬限束手無策。

2015年2月的一天，不堪重壓的林曼提出到停有好車且沒有攝像頭的地方綁架有錢人，勒索巨額財(cái)物，然后想辦法移民到外國(guó)去。起初，蘇興東堅(jiān)決不同意，林曼卻表示只有這樣才能為如今雞飛狗跳的人生止損。經(jīng)不住妻子一再勸說，蘇興東最終同意了。打定主意后，兩人準(zhǔn)備了一圈紅色纖維繩、兩副墨鏡、一把仿制手槍等作案工具。隨后，兩人開始在成都一些富婆和款姐出沒的美容院、別墅等場(chǎng)合尋找搶劫對(duì)象。

3月2日晚上9點(diǎn)左右，在春熙路一家高檔美容院踩點(diǎn)的林曼發(fā)現(xiàn)一個(gè)打扮時(shí)尚的女子駕駛奧迪Q7越野汽車來到美容店消費(fèi)。兩人決定等候該女子出來。晚上11點(diǎn)，停車場(chǎng)上只剩下了女子的越野車，林曼覺得這簡(jiǎn)直就是天賜良機(jī)！沒多久，女子一個(gè)人從美容店出來后，用遙控鑰匙打開車門，剛上車還未來得及鎖門，假裝打電話的蘇興東迅速靠近車并頂住駕駛位車門阻止女子下車。隨后，蘇興東持手槍制服女子，威脅女子從駕駛位爬到后座上，林曼則進(jìn)入駕駛位置負(fù)責(zé)開車，并戴上墨鏡以防攝像頭拍到。

在此期間，女子多次表示可以給所有財(cái)物，懇求林曼、蘇興東不要加害自己，途經(jīng)加油站、收費(fèi)站時(shí)，由于蘇興東持槍威脅，女子一直沒有任何反抗或呼救。途經(jīng)銀行時(shí)，林曼檢驗(yàn)了女子說出的密碼完全正確，并發(fā)現(xiàn)卡內(nèi)竟然有300萬元巨款，但ATM機(jī)每天最多只能取兩萬元，擔(dān)心放走女子她會(huì)報(bào)警并凍結(jié)存款，林曼和蘇興東決定將其殺害。

待車輛行駛到簡(jiǎn)陽的一處僻靜路段時(shí)，蘇興東取出事先準(zhǔn)備的纖維繩將女子雙手反綁在身后，然后和林曼一起用皮帶將女子勒死。勒死女子后，由林曼繼續(xù)開車逃跑。也許是女子臨死前怒目圓睜的樣子讓林曼感到恐慌，由于情緒不穩(wěn)操作失誤，車子開出沒多遠(yuǎn)就與撞到了路旁的馬路牙子上，隨后，兩人倉皇棄車而逃。

2015年3月8日，警方在蘇興東重慶鄉(xiāng)下的老家將蘇興東和林曼抓獲。據(jù)警方調(diào)查，被蘇興東、林曼殺害的女子名叫汪雅嫻，現(xiàn)年35歲，成都人，是一家服裝公司的CEO。目前，此案正在進(jìn)一步審理中。

（文中人物均為化名）

第5篇：堅(jiān)持的故事范文

    根據(jù)《證券法》的規(guī)定，投資者持有一個(gè)上市公司已發(fā)行的股份的百分之五后，通過證券交易所的證券交易，其所持該上市公司已發(fā)行的股份比例每增加或者減少百分之五，應(yīng)當(dāng)依照規(guī)定進(jìn)行報(bào)告和公告。

    首先，這里的“持股”包括直接持有和間接持有。間接持有包括以親屬名義或者以合伙的名義的購買的股票的持有和兩個(gè)有控股關(guān)系的投資者合計(jì)持有。

    1、公告時(shí)間。投資者持有一個(gè)上市公司已發(fā)行的股份的百分之五后，通過證券交易所的交易，其所持該上市公司已發(fā)行的股份比例每增加或者減少百分之五時(shí)起三日內(nèi)，向國(guó)務(wù)院證券監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)、證券交易所作出書面報(bào)告，通知該上市公司，并予以公告。

    2、禁止行為。在報(bào)告期限內(nèi)和作出報(bào)告、公告后二日內(nèi)，不得再行買賣該上市公司的股票。這里的“二日”為公告后二日，因此，在自公告之日起五日內(nèi)都不得從事該上市公司股票的買賣。

 

第6篇：堅(jiān)持的故事范文

一、我國(guó)上市公司國(guó)有股減持的實(shí)踐

面對(duì)國(guó)有股減持、全流通這一歷史性難題，眾多學(xué)者提出了上千種減持方案，證券監(jiān)管部門與其它有關(guān)部委聯(lián)合制定了減持方案，但并未得到市場(chǎng)認(rèn)可。

1999年，中國(guó)嘉陵和黔輪胎兩家上市公司進(jìn)行國(guó)有股減持試點(diǎn)，兩家上市公司按平均每股收益的10倍市盈率計(jì)價(jià)進(jìn)行配售，但市場(chǎng)認(rèn)為配售價(jià)格偏高，導(dǎo)致二級(jí)市場(chǎng)的股價(jià)大幅下挫，管理層迫于市場(chǎng)壓力不得不停止了這一方式。

從2001年7月24日正式實(shí)施按市價(jià)減持國(guó)有股到10月22日被叫停，上證指數(shù)從2245點(diǎn)下降到1500以下，國(guó)有股套現(xiàn)不足10億元，但股市市場(chǎng)跌了3000億元，由于交易清淡，使得2001年前9月股票交易印花稅比2000年同期減少100多億元。此次以市價(jià)減持國(guó)有股籌資彌補(bǔ)社保資金的缺口有如“竹籃打水，一場(chǎng)空”。

實(shí)際上，國(guó)有股的減持存在配售、折股流通和回購等方式。其中國(guó)有股配售、折股流通牽涉到資產(chǎn)定價(jià)問題，處理失當(dāng)將對(duì)二級(jí)市場(chǎng)造成巨大的沖擊。而應(yīng)用股份回購理論，上市公司回購控股股東所持本公司的國(guó)有股，然后予以注銷，可達(dá)到減持的目的。

二、股份回購的概念及其在國(guó)有股減持中的積極作用

股份回購是指上市公司利用盈余所得后的積累資金或債務(wù)融資，以一定價(jià)格購回公司已經(jīng)發(fā)行在外的普通股，以作為庫藏股或進(jìn)行注銷的一種方法。在西方成熟的資本市場(chǎng)，上市公司進(jìn)行股份回購的主要目的有：（1）鞏固控股權(quán)或轉(zhuǎn)移公司控股權(quán)；（2）穩(wěn)定和提高公司股價(jià)；（3）優(yōu)化資本結(jié)構(gòu)，提高財(cái)務(wù)杠桿效果；（4）抵御外來收購?fù){；（5）有利于經(jīng)營(yíng)者股權(quán)激勵(lì)機(jī)制的建立。正是由于股份回購的上述優(yōu)點(diǎn)，20世紀(jì)80年代以來，股份回購得到迅猛發(fā)展，比如：可口可樂公司在1984年到1993年間共回購了5.7億股，總值58億美元；1999年在紐約股票交易所上市的公司中，股份回購總金額約為1810億美元；2002年4月份，日本上市公司宣布股份回購的總值達(dá)4.2萬億日元。

由于我國(guó)證券市場(chǎng)的特殊性，使得我國(guó)還不具備西方國(guó)家應(yīng)用股份回購所產(chǎn)生的種種功能，比如我國(guó)《公司法》第149條規(guī)定：“公司不得收購本公司的股票，但為減少公司資本而注銷股份或者與持有本公司股票的其它公司合并除外。公司依照前款規(guī)定收購本公司股票后，必須在10日內(nèi)注銷該部分股份?！币虼?，我國(guó)不允許通過股票回購實(shí)施經(jīng)營(yíng)者股權(quán)激勵(lì)。再比如，由于國(guó)家股占上市公司絕對(duì)控股地位，我國(guó)無法把股份回購作為反收購措施。

然而，我國(guó)實(shí)踐證明，股份回購在減持國(guó)有股方面具有特殊意義。

1.通過股份回購減持國(guó)有股，有助于國(guó)有資本的戰(zhàn)略性轉(zhuǎn)移，提高國(guó)有資本運(yùn)營(yíng)效率。國(guó)有大型上市公司由于國(guó)家股的高比例和低流通性使得巨額國(guó)有資本沉淀在公司的長(zhǎng)期資產(chǎn)中。通過股份回購，將國(guó)有股權(quán)從實(shí)物形態(tài)轉(zhuǎn)化現(xiàn)金或其他流動(dòng)資產(chǎn)，可實(shí)現(xiàn)國(guó)有資產(chǎn)的保值增值。同時(shí)，股份回購有利于國(guó)有資產(chǎn)有計(jì)劃有步驟的退出競(jìng)爭(zhēng)性領(lǐng)域，并加強(qiáng)能源、交通等基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)。

2.通過股份回購減持國(guó)有股能平衡各方利益。在眾多的國(guó)有股減持方案中，牽涉到國(guó)家、上市公司、社會(huì)公眾股東等多元利益主體，如何平衡各方主體的利益，是國(guó)有股減持方案的關(guān)鍵，更是設(shè)計(jì)國(guó)有股減持方案的難點(diǎn)。近幾年我國(guó)的證券市場(chǎng)顯示了國(guó)有股減持與全流通是一項(xiàng)復(fù)雜的系統(tǒng)工程，到目前為止尚未找到一條萬全之策。而以回購方式減持國(guó)有股可避免對(duì)股市造成較大沖擊，將回購的國(guó)有股注銷，可提高每股收益，提升公司內(nèi)在價(jià)值。

3.上市公司進(jìn)行股份回購是優(yōu)化公司治理結(jié)構(gòu)的一種理性選擇。在我國(guó)，國(guó)有股及國(guó)有法人股占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，部分股東大會(huì)流于形式；董事會(huì)缺乏獨(dú)立性，監(jiān)事會(huì)的功能弱化，缺乏權(quán)威。導(dǎo)致公司治理中的“內(nèi)部人控制”和對(duì)中小股東的利益歧視。通過回購部分國(guó)有股作為庫藏股還有助于建立股票期權(quán)制度，激勵(lì)經(jīng)營(yíng)者減少敗德行為和逆向選擇，優(yōu)化股權(quán)結(jié)構(gòu)，完善公司治理結(jié)構(gòu)。

4.上市公司進(jìn)行股份回購是解決國(guó)家股、國(guó)有法人股等歷史遺留問題的一種有益嘗試。我國(guó)證券市場(chǎng)的普通股劃分為國(guó)家股、國(guó)有法人股和社會(huì)公眾股，對(duì)國(guó)家股和法人股進(jìn)行回購能部分消除中國(guó)股市國(guó)股不同權(quán)，股權(quán)分割等怪異現(xiàn)象和隱患。

5.有利于推動(dòng)我國(guó)上市公司的實(shí)質(zhì)重組。近年來，大股東占用上市公司巨額資金，使一些上市公司成為“空殼”。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前至少有100家左右的上市公司存在大股東欠款情況，平均每家占用的資金將近4億元。如果允許上市公司回購大股東所持股份并注銷，用回購款來抵銷大股東所欠款項(xiàng)，可以縮減股本規(guī)模，改善財(cái)務(wù)狀況，為重組創(chuàng)造條件。

三、上市公司運(yùn)用股份回購減持國(guó)有股的應(yīng)注意的幾個(gè)問題

1.股份回購方式及其定價(jià)問題

中國(guó)的證監(jiān)會(huì)頒步的《上市公司章程指引》中明確規(guī)定了上市公司股份回購的方式：一是向全體股東發(fā)出要約；二是通過公開交易方式購回；三是法律、行政法規(guī)和國(guó)務(wù)院證券主管部門批準(zhǔn)的其它情況。全體要約回購主要適用于短期大規(guī)?；刭徆竟煞?，由于我國(guó)上市公司股權(quán)結(jié)構(gòu)特殊，短期內(nèi)這種方法不適合我國(guó)上市公司。公開交易方式主要運(yùn)用于小規(guī)模流通股的回購，其價(jià)格由市價(jià)決定，上市公司回購流通股的成本過高。我國(guó)的股份回購主要采用第三種方式，其特點(diǎn)在于與大股東協(xié)議回購國(guó)有股。

由于國(guó)有股的不可流通性，其回購價(jià)格不能參照上市公司的市價(jià)，否則國(guó)有股東原始1至2元的投資以數(shù)倍數(shù)十倍的價(jià)格收回，對(duì)公眾股東極不公平。國(guó)有資產(chǎn)管理委員會(huì)2003年12月15日公布的《關(guān)于規(guī)范國(guó)有企業(yè)改制工作的意見》明確指出，上市公司國(guó)有股轉(zhuǎn)讓價(jià)格在不低于每股凈資產(chǎn)的基礎(chǔ)上，參考上市公司盈利能力和市場(chǎng)表現(xiàn)合理定價(jià)。1999年，云天化按照每股凈資產(chǎn)2.83元回購大股東所持有的20000萬股國(guó)有股。長(zhǎng)春高新于2000年12月以每股凈資產(chǎn)3.40元為基礎(chǔ)，按每股3.44元回購大股東所持有的7000萬股國(guó)有股。這說明，以每股凈資產(chǎn)或加上一定限度溢價(jià)、采用協(xié)議回購方式是比較合適的。

2.上市公司股份回購的條件和范圍

第一，國(guó)有股比例過高或流通股比例達(dá)不到法定要求

按照《公司法》所規(guī)定的上市條件：社會(huì)公眾股應(yīng)占總股本的25%以上；總股本超過4億元的，流通股應(yīng)在15%以上。在我國(guó)深滬兩市還有相當(dāng)公司達(dá)不到這樣的要求，同時(shí)，對(duì)于處于競(jìng)爭(zhēng)性行業(yè)且國(guó)有股比例過高的上市公司，應(yīng)優(yōu)先考慮回購國(guó)有股。

第二，允許大股東以所持上市公司股權(quán)償還對(duì)上市公司的債務(wù)。從2002年申報(bào)公布的情況來看，大股東欠款超過1個(gè)億的上市公司有五六十家之多，上市公司以每股凈資產(chǎn)值回購大股東所持股份，然后注銷或向擬收購的新股東定向增發(fā)流通股。

第三，為了降低財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)，保證上市公司的可持續(xù)發(fā)展，只有主業(yè)經(jīng)營(yíng)狀況良好，收益穩(wěn)定，有足夠的現(xiàn)金或較高變現(xiàn)能力的上市公司，方可進(jìn)行股份回購。

3.對(duì)社會(huì)法人股東、債權(quán)人和社會(huì)公眾股東利益的保障問題

第一，目前我國(guó)實(shí)施的股份回購都是發(fā)生在上市公司與其國(guó)有大股東之間，如果在回購時(shí)把社會(huì)法人股被排斥在外，這無疑違背了同股同權(quán)與公平待遇原則，容易引起社會(huì)法人股東的不滿。

第7篇：堅(jiān)持的故事范文

關(guān)鍵詞 以人為本 安全 預(yù)防

中圖分類號(hào)：G647 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

2006年4月28日，國(guó)務(wù)委員陳至立在全國(guó)高校輔導(dǎo)員隊(duì)伍建設(shè)工作會(huì)議上指出：根據(jù)新形勢(shì)發(fā)展要求，著力建設(shè)一支高素質(zhì)、高質(zhì)量、高水平的輔導(dǎo)員隊(duì)伍。這支隊(duì)伍真正做到“政治強(qiáng)、業(yè)務(wù)精、紀(jì)律嚴(yán)、作風(fēng)正”，永葆生機(jī)和活力。這就客觀上要求高職院校輔導(dǎo)員必須堅(jiān)持“以人為本”的教育理論，以尊重學(xué)生、研究學(xué)生、服務(wù)學(xué)生、發(fā)展學(xué)生為目標(biāo)，積極地引導(dǎo)學(xué)生，讓學(xué)生們?cè)谛０残摹穼W(xué)、會(huì)學(xué)，使社會(huì)放心、家長(zhǎng)放心。

然而，學(xué)校是人群集聚的地方，同時(shí)一些學(xué)校實(shí)行的是寄宿制，客觀上發(fā)生安全事故的可能性會(huì)大大增加。近幾年來，一些學(xué)校發(fā)生的重大安全事故：2008年11月14日6時(shí)10分許發(fā)生在上海商學(xué)院一學(xué)生宿舍出現(xiàn)學(xué)生使用“熱得快”電器故障，并引燃周圍可燃物發(fā)生火災(zāi)，并有4名女生情急之下跳樓死亡；2013年3月27日華南理工大學(xué)廣州學(xué)院一名學(xué)生被發(fā)現(xiàn)猝死于宿舍中，根據(jù)初步尸檢報(bào)告，該生死于心臟病發(fā)。這些事情的發(fā)生，客觀上學(xué)校將面臨一個(gè)問題――如何預(yù)防校內(nèi)學(xué)生人身安全事故的發(fā)生，杜絕人身傷害的出現(xiàn)，堅(jiān)持“以人為本”的教育理論。筆者認(rèn)為可以采取以下預(yù)防措施：

1 積極預(yù)防是應(yīng)對(duì)突發(fā)事件的前提

掌握學(xué)生動(dòng)態(tài)是有效預(yù)防突發(fā)事件的前提條件，是輔導(dǎo)員開展思想政治教育工作的基礎(chǔ)。實(shí)踐證明，只有構(gòu)建暢通的信息交流和信息反饋渠道，才能使輔導(dǎo)員及時(shí)準(zhǔn)確掌握學(xué)生學(xué)習(xí)、生活和思想各方面動(dòng)態(tài)。學(xué)?？梢酝ㄟ^組織輔導(dǎo)員培訓(xùn)、學(xué)生干部會(huì)議、黨支部會(huì)議等多種途徑，從關(guān)心、幫助同學(xué)的角度出發(fā)，向廣大輔導(dǎo)員和學(xué)生闡明匯報(bào)意識(shí)在預(yù)防處理突發(fā)事件工作中的積極意義，從而引導(dǎo)學(xué)生干部、黨員，甚至是普通同學(xué)在學(xué)生當(dāng)中出現(xiàn)異常情況時(shí)能從大局出發(fā)，以主人翁的意識(shí)及時(shí)向輔導(dǎo)員匯報(bào)情況，從而使輔導(dǎo)員能隨時(shí)掌握學(xué)生動(dòng)態(tài)，把握主動(dòng)，及時(shí)開展思想政治教育工作，進(jìn)而有效預(yù)防突發(fā)事件的發(fā)生，做到“早發(fā)現(xiàn)、早匯報(bào)、早預(yù)防”，將不安全因素消滅在萌芽狀態(tài)中。

2 適當(dāng)?shù)募本戎R(shí)培訓(xùn)

每年開學(xué)的時(shí)候，總有極少部分患有諸如心臟病、癲癇等疾病的學(xué)生到校報(bào)到，而這些疾病由于受天氣、自身情緒、人際關(guān)系等因素的影響隨時(shí)都可能復(fù)發(fā)，這時(shí)就需要其身邊有一些懂得急救知識(shí)的同學(xué)在其旁邊進(jìn)行急救。因此，在新生入校前進(jìn)行適當(dāng)?shù)募本戎R(shí)的培訓(xùn)，讓每一位新生都了解適當(dāng)?shù)募本戎R(shí)，才能在遇到突發(fā)疾病的時(shí)候，有一部分學(xué)生能在醫(yī)生沒有到來之前進(jìn)行自我救助，爭(zhēng)取救治時(shí)間，一部分學(xué)生則聯(lián)系校醫(yī)、120急救中心和輔導(dǎo)員，大家分工合作完成救治，減少意外的發(fā)生。

3 認(rèn)真排查校園安全隱患，特別是不易察覺的地方

為了避免校園內(nèi)人身安全事故的發(fā)生，學(xué)校保衛(wèi)處應(yīng)結(jié)合本校實(shí)際情況對(duì)全校存在的安全隱患進(jìn)行經(jīng)常性的全面的排查，對(duì)發(fā)現(xiàn)安全隱患的地段，應(yīng)樹立“此處危險(xiǎn)，不得靠近”的醒目字樣，對(duì)樓道的電燈應(yīng)保持明亮，同時(shí)安裝應(yīng)急照明燈，以便在停電時(shí)照明。定期檢查各種安全設(shè)施，并指定專人負(fù)責(zé)。另外，對(duì)存在安全隱患的地方要派人經(jīng)常巡查，并做好巡查記錄，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)上報(bào)。

4 準(zhǔn)備必要的室內(nèi)軍訓(xùn)訓(xùn)練場(chǎng)地

由于軍訓(xùn)是大學(xué)生進(jìn)入高校的第一堂必修課，而軍訓(xùn)期間是最容易發(fā)生人生傷亡事故。因?yàn)榇髮W(xué)軍訓(xùn)一般都安排在每年開學(xué)的九月上中旬，這時(shí)正是夏末秋初，立秋以后，還有秋老虎，天氣還比較炎熱。不僅新生的身體素質(zhì)參差不齊，而且站軍姿、走正步的動(dòng)作不停的重復(fù)幾百次，強(qiáng)度很大，不可避免會(huì)發(fā)生一些新生極其不適應(yīng)在炎熱天氣下訓(xùn)練，甚至發(fā)生意外傷亡事故。為此，各個(gè)高校應(yīng)準(zhǔn)備必要的室內(nèi)訓(xùn)練場(chǎng)地，在天氣較熱時(shí)在室內(nèi)訓(xùn)練，避免因發(fā)生意外事件。

5 積極開展校園安全疏散模擬演練

由于學(xué)校是人口集聚的場(chǎng)所，一旦發(fā)生安全事故，容易造成人員傷亡，客觀上就要求學(xué)校開展適當(dāng)?shù)陌踩枭⒛M演練。通過開展模擬疏散演練，讓學(xué)生們熟悉疏散的各個(gè)通道，具備事故發(fā)生時(shí)所具有的鎮(zhèn)定心態(tài)。這樣，當(dāng)事故發(fā)生時(shí)，學(xué)生們才能保持鎮(zhèn)定的心態(tài)，才能做到有條不紊的疏散，才能避免踩踏而導(dǎo)致更多人員傷害的發(fā)生。

總之，安全無小事，輔導(dǎo)員始終堅(jiān)持“以人為本”的教育理論，時(shí)刻將學(xué)生的利益裝在心里，讓學(xué)生們?cè)谛０踩?、安心、樂學(xué)、會(huì)學(xué)，使社會(huì)放心、家長(zhǎng)放心。

參考文獻(xiàn)

[1] 李建剛，黃愛明.高職學(xué)生工作“精細(xì)化”工程及相關(guān)問題探究[J].學(xué)校黨建與思想教育，2010（11）.

第8篇：堅(jiān)持的故事范文

（江蘇省特種設(shè)備安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院無錫分院，江蘇 無錫 214174）

摘要：橋式起重機(jī)齒輪減速箱是典型的旋轉(zhuǎn)機(jī)械，一旦減速箱中相關(guān)零部件發(fā)生故障，在運(yùn)轉(zhuǎn)過程中就會(huì)產(chǎn)生振動(dòng)和噪音，嚴(yán)重影響整個(gè)起重機(jī)的運(yùn)轉(zhuǎn)?，F(xiàn)針對(duì)橋式起重機(jī)齒輪減速箱運(yùn)行故障，分析主要類型及其原因，并從傳統(tǒng)信號(hào)處理技術(shù)、非平穩(wěn)信號(hào)處理技術(shù)兩方面介紹目前檢測(cè)齒輪減速箱故障的主要手段。

關(guān)鍵詞 ：橋式起重機(jī)；齒輪減速箱；故障；信號(hào)處理；經(jīng)驗(yàn)?zāi)B(tài)分解

0引言

齒輪減速器是起重機(jī)上關(guān)鍵的承載和傳動(dòng)部件，長(zhǎng)期處于高負(fù)載、工況多變等狀態(tài)下，非常容易發(fā)生故障，造成停機(jī)事故。通常齒輪減速器故障產(chǎn)生的特征信號(hào)都比較微弱，采用常規(guī)的信號(hào)檢測(cè)方法難以精確地診斷故障特征。因此，需要分析減速箱的運(yùn)行規(guī)律和故障類型的基本特點(diǎn)，并結(jié)合先進(jìn)的故障特征放大技術(shù)和噪聲抑制技術(shù)進(jìn)行減速器故障檢測(cè)和診斷［1］，這對(duì)準(zhǔn)確地判斷齒輪減速器的故障，保證橋式起重機(jī)運(yùn)行穩(wěn)定性具有重要的工程意義。

1齒輪減速器故障特點(diǎn)及類型

橋式起重機(jī)齒輪減速器是一種典型的旋轉(zhuǎn)機(jī)械［2］，發(fā)生故障時(shí)，會(huì)產(chǎn)生異響和異常振動(dòng)等故障信號(hào)，如表1所示。根據(jù)減速箱的振動(dòng)信號(hào)的特點(diǎn)，可對(duì)其故障來源進(jìn)行預(yù)先診斷。然而，對(duì)于減速箱等旋轉(zhuǎn)類機(jī)械，其故障是由于很多種因素的共同作用。此外，對(duì)旋轉(zhuǎn)傳動(dòng)類機(jī)械進(jìn)行故障檢測(cè)，一般不需要將設(shè)備整件解體，否則會(huì)導(dǎo)致再次裝配精度的降低，而且某些故障特征不明顯，需要緩慢長(zhǎng)期觀察才能確定，這使得旋轉(zhuǎn)傳動(dòng)類機(jī)械的狀態(tài)監(jiān)測(cè)和故障診斷的難度較大。

1.1齒輪軸軸承損壞

起重機(jī)的工作類型復(fù)雜多樣，減速器的正常工作時(shí)間決定了齒輪與軸承的磨損和疲勞程度，影響其使用壽命。滾動(dòng)軸承的部分失效原因?yàn)槠邳c(diǎn)蝕，主要表現(xiàn)為軸承的元件在較大沖擊動(dòng)載荷和靜載荷作用下發(fā)生塑性變形，磨粒磨損嚴(yán)重，導(dǎo)致破裂損壞，進(jìn)而會(huì)產(chǎn)生輪齒的不正?？ㄗ琛Ш?，間接導(dǎo)致齒輪發(fā)生變形和折斷，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)斐蓽p速箱卡滯現(xiàn)象，軸承元件點(diǎn)蝕造成的減速箱故障容易被發(fā)現(xiàn)，可通過觀察減速箱的運(yùn)轉(zhuǎn)狀況或?qū)崟r(shí)監(jiān)聽噪音進(jìn)行診斷。

1.2齒輪精度達(dá)不到要求

齒輪由于加工精度、裝配誤差等原因的存在，在運(yùn)轉(zhuǎn)工況時(shí)會(huì)產(chǎn)生不同幅度特征的振動(dòng)。不同的原因?qū)е虏煌恼駝?dòng)，目前最主要的振源為嚙合振動(dòng)。齒輪在嚙入和嚙出的過程中，齒與齒之間發(fā)生周期性碰撞，從而生成振動(dòng)。除了嚙合振動(dòng)，還有如制造誤差引起的損傷、外界環(huán)境引起的損傷的存在，導(dǎo)致齒廓、齒形等偏離正常范圍，增大了碰撞沖擊力度，會(huì)導(dǎo)致更大的振動(dòng)。

1.3齒輪軸及與電機(jī)軸軸心線偏差較大

齒輪箱裝配不精確，容易造成減速箱高速軸與電機(jī)軸的軸心線偏差。偏差過大時(shí)會(huì)導(dǎo)致減速箱輪齒的嚙合出現(xiàn)故障，輪齒受力狀況不均勻，造成齒輪軸在彎曲扭矩的作用下發(fā)生變形，彎曲扭矩的重復(fù)作用和應(yīng)力集中作用會(huì)造成輪齒的過度疲勞磨損；同時(shí)也會(huì)使減速箱和電機(jī)的連接螺栓松動(dòng)變形，造成電機(jī)在運(yùn)行中振幅過大，增大減速箱的輪齒嚙合縫隙，輪齒的連續(xù)沖擊載荷導(dǎo)致輪齒變形折斷。

2基于信號(hào)處理的齒輪減速箱故障診斷

橋式起重機(jī)齒輪減速箱發(fā)生故障時(shí)，會(huì)產(chǎn)生異響、異常振動(dòng)和噪音，利用信號(hào)處理技術(shù)分析振動(dòng)信號(hào)的時(shí)域、頻域或幅值域等信號(hào)特征，進(jìn)而判別齒輪減速箱的工作運(yùn)行狀態(tài)，可檢測(cè)出故障部位及其原因。

2.1傳統(tǒng)信號(hào)處理方法

以往主要采用時(shí)域和頻域分析這兩種信號(hào)處理技術(shù)來進(jìn)行齒輪減速器故障診斷。前者主要是采用時(shí)域同步平均法、相關(guān)函數(shù)診斷法或概率分析法，分析振動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的時(shí)域信號(hào)特征，如振幅、相位、振動(dòng)頻率、偏度、峭度、裕度等。后者則是基于傅立葉變換（FFT）進(jìn)行倒頻譜、包絡(luò)、頻譜等方面的分析。傳統(tǒng)的基于FFT的信號(hào)處理技術(shù)在理論和實(shí)踐中已有廣泛的應(yīng)用，但它目前僅用于較平穩(wěn)信號(hào)的分析，卻不適用于工程實(shí)踐中所測(cè)得的絕大多數(shù)非平穩(wěn)、非線性、非高斯分布的振動(dòng)信號(hào)。

2.2非平穩(wěn)信號(hào)的分析方法

2.2.1小波變換

繼傅立葉變換后，小波變換分析法由于具有一并提供信號(hào)的時(shí)域和頻域變化信息、“數(shù)學(xué)顯微”等特性，成為描述非平穩(wěn)性動(dòng)態(tài)信號(hào)、提取微弱信號(hào)、早期故障診斷以及分離機(jī)器零部件故障特征頻率的高效分析工具［3］。雖然小波變換在工程實(shí)踐的非平穩(wěn)信號(hào)分析中得到了較為廣泛的應(yīng)用，但其也存在缺點(diǎn)：首先，小波變換是線性的，其本質(zhì)是在窗口中可調(diào)的傅立葉變換；其次，在選擇小波基和分解尺度后，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)頻帶固定的信號(hào)，其頻帶范圍僅與信號(hào)的采樣頻率有關(guān)，不受信號(hào)本身影響，這就造成小波分析變換的自適應(yīng)性差，限制了其工程應(yīng)用。

2.2.2經(jīng)驗(yàn)?zāi)B(tài)分解

Hilbert-Huang變換（HHT）分析方法將任意信號(hào)分解為內(nèi)在模態(tài)函數(shù)（IMF）——經(jīng)驗(yàn)?zāi)B(tài)分解（EMD）法，然后進(jìn)行時(shí)頻分析，其主要包括EMD法和Hilbert變換兩個(gè)過程，具體如下：（1） 進(jìn)行信號(hào)平穩(wěn)化處理，并逐級(jí)分解出信號(hào)中不同尺度的波動(dòng)，得到一系列具有不同特征尺度的IMF分量，進(jìn)一步分析和提取更準(zhǔn)確的原數(shù)據(jù)的特征信息；（2） 通過EMD分解法得到每個(gè)IMF分量的信號(hào)，再對(duì)每個(gè)單分量進(jìn)行Hilbert變換后能夠反映其真實(shí)的物理意義，由此得到的Hilbert譜能更加精確地反映出能量在空間（或時(shí)間）尺度上的分布規(guī)律。另外，EMD分解出的分量隨信號(hào)本身的變化而改變，因此，該方法具有自適應(yīng)性，可對(duì)多種非平穩(wěn)、非線性信號(hào)進(jìn)行時(shí)頻分析。

EMD方法能將非線性、非平穩(wěn)信號(hào)序列x（t）有限地分解為不同信號(hào)特征的IMF的和，IMF分量分別記為c1，c2，…，cn和殘差項(xiàng)r。其分解步驟如下：

（1） 解析原始信號(hào)的所有極值點(diǎn)。

（2） 將極大值點(diǎn)和極小值點(diǎn)分別連接起來，確保由極大值點(diǎn)構(gòu)成的上包絡(luò)曲線和由極小值點(diǎn)構(gòu)成的下包絡(luò)曲線要涵蓋所有的原始數(shù)據(jù)點(diǎn)。

（3） 求出上、下包絡(luò)曲線的平均值m1，并求出：

x（t）－m1=h1（1）

（4） 首先判定h1是否是IMF分量，若h1為信號(hào)x（t）的第一個(gè)IMF分量，則將其定義為c1，并直接進(jìn)入步驟（5）計(jì)算；若否，則h1作為新的原始數(shù)據(jù)，并重復(fù)（1）～（4）的步驟，以此類推。

（5） 將c1從x（t）中提取出來，得：

r1=x（t）－c1（2）

（6） 重復(fù)（1）～（5）的步驟n次并得到有限n個(gè)IMF分量。即：

當(dāng)rn成為一個(gè)單調(diào)函數(shù)時(shí)就停止上述步驟。將式（2）代入式（3）可得：

式中，rn是信號(hào)的殘余項(xiàng)。

從基函數(shù)理論來看，不同信號(hào)分解出的基函數(shù)即IMF分量c1，c2，…，cn包括了從高到低不同頻率段且是不等帶寬的信號(hào)成分，能自適應(yīng)地提取故障沖擊信號(hào)，特別適用于處理非平穩(wěn)和非線性信號(hào)。

3結(jié)語

本文針對(duì)橋式起重機(jī)齒輪減速箱運(yùn)行故障，分析主要類型及其原因，并從傳統(tǒng)信號(hào)處理技術(shù)、非平穩(wěn)信號(hào)處理技術(shù)兩方面介紹目前檢測(cè)齒輪減速箱故障的主要手段。經(jīng)分析，經(jīng)驗(yàn)?zāi)B(tài)分解（EMD）是目前檢測(cè)非平穩(wěn)、非線性信號(hào)最適用的方法。

［

參考文獻(xiàn)］

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［2］丁保華，李占芳.齒輪箱故障診斷中振動(dòng)信號(hào)處理方法綜述［J］.煤礦機(jī)械，2005（8）：136-138.

［3］姜洪開，王仲生，何正嘉.基于自適應(yīng)提升小波包的故障微弱信號(hào)特征早期識(shí)別［J］.西北工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，26（1）：99-103.

第9篇：堅(jiān)持的故事范文

【摘要】 【目的】 探討白細(xì)胞分化抗原40配體免疫球蛋白(CD40LIg)基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)對(duì)異種胰島移植排斥反應(yīng)的抑制作用?【方法】 建立Wistar-SD大鼠異種胰島移植模型，用攜帶分泌型CD40LIg基因的重組腺病毒感染的MSC進(jìn)行干預(yù)治療?取糖尿病大鼠45只，隨機(jī)分為3組(每組15只):對(duì)照組植入胰島細(xì)胞;單純MSC組植入MSC和胰島細(xì)胞;基因轉(zhuǎn)染MSC組植入CD40LIg基因轉(zhuǎn)染的MSC和胰島細(xì)胞?觀察糖尿病大鼠胰島移植后生存情況?血糖變化和移植物病理形態(tài)學(xué)改變，檢測(cè)移植物CD40LIg和胰島素的表達(dá)以及移植大鼠細(xì)胞因子水平變化?【結(jié)果】 ①糖尿病大鼠血糖平均在移植后2 d恢復(fù)正常，對(duì)照組血糖平均在移植后7 d升高，單純MSC組和基因轉(zhuǎn)染MSC組血糖分別在20 d和47 d升高?②對(duì)照組?單純MSC組和基因轉(zhuǎn)染MSC組，移植物存活時(shí)間分別為(9.5 ± 3.2)d?(25.2 ± 5.3)d和(53.6 ± 7.5) d，各組間比較具有顯著差異(F=5.362，P < 0.05);移植糖尿病大鼠生存時(shí)間分別為(24.1 ± 6.8)d?(51.7 ± 7.9)d?(95.2 ± 12.7)d，各組間比較差異具有顯著性(F=6.821，P < 0.05)?③對(duì)照組在胰島移植后7 d內(nèi)，IL-2和TNF-α的水平均急劇上升，IL-4和IL-10的水平較移植前顯著下降(P < 0.01)?④兩個(gè)治療組移植物內(nèi)均可見成片的胰島細(xì)胞團(tuán)，未見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)染MSC組移植物內(nèi)可見CD40LIg和胰島素的表達(dá)?【結(jié)論】 CD40LIg基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以延長(zhǎng)胰島移植物的存活時(shí)間，抑制大鼠異種胰島移植的排斥反應(yīng)?

【關(guān)鍵詞】 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞; CD40LIg; 胰島移植; 糖尿病

Abstract: 【Objective】 To investigate the effects of cluster of differentiation 40 ligand immunoglobulin (CD40LIg) modified bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) on the rejection of rat islet xenografts. 【Methods】 The islet xenografts model was established with islet cells of Wistar rat transplant under the left kidney capsule of diabetic SD rat. MSC were infected with the recombinant adenoviruses containing CD40LIg gene as intervention treatment. Forty-five modeled diabetic rats were randomly pided into three groups with 15 in each: only islet cells were transplanted to rats in control group (A)， islet cells and MSC were transplanted to rats in MSC group (B) and islet cells and MSC infected with CD40LIg gene were transplanted to rats in transfected MSC group (C). The blood sugar and the survival of transplantation rats and grafts were observed after transplantation. The morphological changes of grafts were observed. Expression of CD40LIg and insulin were detected by immunohistochemical staining and cytokines were quantified by ELISA. 【Results】 (1) The blood sugar of transplantation rats decreased to normal level on day 2 after transplantation. The average level blood glucose of control group (A)， MSC group (B)， transfected MSC group(C) increased on day 7，20，47， after transplantation respectively. (2) The grafts of group A， B， and C survived for (9.5 ± 3.2)， (25.2 ± 5.3)， and(53.6 ± 7.5) days， respectively. There are significant deviation of the grafts survival among group A， B and C(F=6.821，P < 0.05). The survival of transplantation rats were (24.1 ± 6.8)，(51.7 ± 7.9)，and(95.2 ± 12.7) days in group A， B， and C， respectively. The survival of transplantation rats compared each other were same as the survival of grafts (F=6.821，P < 0.05).(3)In group A， Serum IL-2 and TNF-α concentration were elevated to a high level within seven days post-transplantation and significantly increased compared with that pre-transplantation(P

Key words: islet xenografts; diabetes mellitus; bone marrow mesenchymal stem cells; CD40LIg

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種慢性心血管疾病，嚴(yán)重威脅人類健康?盡管動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜病理過程，但血液中的單核細(xì)胞遷移至內(nèi)皮下分化為巨噬細(xì)胞后吞噬脂質(zhì)，特別是氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein， ox-LDL)，進(jìn)而形成泡沫細(xì)胞仍然是關(guān)鍵環(huán)節(jié)?巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)主要通過細(xì)胞膜上的清道受體(scavenger receptors， SRs)完成?其中，A類清道夫受體(scavenger receptor A，SR-A)和B型清道夫受體CD36(cluster of differentiation36，CD36)在巨噬細(xì)胞攝取各種修飾型低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)過程中發(fā)揮了重要作用[1]?近年來研究表明，微小RNA(microRNA) 參與調(diào)控了心血管系統(tǒng)的多種功能， 其表達(dá)異常與多種心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[2]?MicroRNA-155(miR-155)是一個(gè)典型的多功能microRNA，已有資料表明，miR-155在免疫反應(yīng)?炎癥?腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮了重要的作用[3]?最近的研究顯示miR-155在巨噬細(xì)胞泡沫化過程中表達(dá)上調(diào)[4]，但其對(duì)巨噬細(xì)胞泡沫化和動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用尚不清楚?本研究探討了miR-155對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞泡沫化過程的影響及其可能機(jī)制，以評(píng)估m(xù)iR-155是否可作為防治動(dòng)脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)?

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

人類單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞(中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所);RPMI1640 細(xì)胞培養(yǎng)基?胎牛血清?青/鏈雙抗(GIBCOBRL公司);佛波酯(PMA)?油紅O?Hoechst33258?蛋白酶抑制劑cocktail(Sigma公司);SR-A和CD36抗體(R&D公司);HRP標(biāo)記的驢抗山羊IgG(Santa Cruz公司);l，l’-dioctadecyl-3，3，3’，3’-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate(DiI)熒光探針(Probe公司);其余試劑均為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純產(chǎn)品?

CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)Precision公司);SW-CJ-IF超凈工作臺(tái)(江蘇蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司);pH計(jì)(瑞士Mettler Toledo公司);倒置顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠);激光掃描共聚焦顯微鏡(日本Olympus公司);超速離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司);酶聯(lián)免疫儀(美國(guó)MJ RESEARCH公司);小型垂直電泳和電轉(zhuǎn)裝置?熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)?

1.2 Ad-miR-155和Ad-anti-miR-155腺病毒載體構(gòu)建

腺病毒載體的構(gòu)建參照文獻(xiàn)報(bào)道的方法[5]?Ad-miR-155(5′-TCGAGCCCCTATCACGATTAGCA TTAATTCAAGAGATTAATGCTAATCGTGATAGGGGA-3′)和Ad-anti-miR-155(5′-CTAGTCCCCTATC ACGATTAGCATTAATCTCTTGAATTAATGCTAATCGTGATAGGGGC-3′)的制備按照 AdMax(Microbix)和pSilencerTM adeno 1.0-CMV (Ambion) systems說明書進(jìn)行?病毒經(jīng)HEK293A細(xì)胞進(jìn)行包裝?擴(kuò)增后，CsCl純化，含100 mL/L甘油的20 mmol/L Tris緩沖液透析，于-70 ℃保存?腺病毒滴度測(cè)定按照Adeno-X Rapid Titer kit (BD Biosciences Clontech， Palo Alto， CA， USA) 試劑盒說明書進(jìn)行?實(shí)驗(yàn)中以Ad-LacZ轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照?

1.3 Ox-LDL和DiI-oxLDL的制備

Ox-LDL的制備按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[6]，采用硫酸銅氧化法，簡(jiǎn)述如下:健康人血漿購自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液科，采用密度梯度離心的方法，制備LDL?將LDL于4℃透析24 h，期間換液3次?在37℃下用終濃度為5 μmol/L 的CuSO4氧化24 h?接著分別用含200 μmol/L EDTA和不含EDTA的PBS 4 ℃下分別透析24 h和48 h?用Bradford法測(cè)定蛋白含量?在無菌條件下采用0.45 μm濾膜過濾除菌，4 ℃避光保存，一周內(nèi)用完?

DiI-oxLDL(1，1′-dioctadecyl-3，3，3′3′-tetra-methy-lindocyanide percholorate (DiI)-labeled oxLDL)的制備方法如下[7-9]，采用密度梯度離心的方法，制備LDL，用一定量的無脂蛋白血清調(diào)節(jié)LDL濃度至1 mg/mL，每毫升LDL中加入5 μL濃度為30 mg/mL的DiI儲(chǔ)存液，37 ℃避光孵育18 h，使LDL轉(zhuǎn)變?yōu)镈il-LDL?經(jīng)密度梯度離心提取DiI-LDL，PBS透析48 h，期間換液3次?加入終濃度為5 μmol/L的CuSO4，37 ℃氧化24 h，然后分別用含200 μmol/L EDTA和不含EDTA的PBS分別透析24?48 h?采用0.45 μm濾膜過濾除菌，4 ℃避光保存，一周內(nèi)用完?

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組

THP-1細(xì)胞株由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所提供，用含100 mL/L小牛血清，1%雙抗的RMPI1640培養(yǎng)基，置于體積分?jǐn)?shù)5% CO2，37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)?將細(xì)胞按1×106密度接種于35 mm培養(yǎng)皿中，以100 ng/mL的PMA刺激THP-1細(xì)胞48 h后誘導(dǎo)其分化成巨噬細(xì)胞?實(shí)驗(yàn)分組如下:在觀察過表達(dá)miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞的影響時(shí)分為6組:空白對(duì)照組?Ad-LacZ組?ox-LDL+Ad-LacZ組?ox-LDL+Ad-miR-155(25 MOI)組?ox-LDL+Ad-miR-155(50 MOI)組?ox-LDL+Ad-miR-155(100 MOI)組;在觀察抑制miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞的影響時(shí)分為4組:Ad-LacZ組?Ad-anti-miR-155(50 MOI)組?ox-LDL+Ad-LacZ組?ox-LDL+Ad-anti-miR-155(50 MOI)組?

1.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ox-LDL對(duì)miR-155表達(dá)的影響

參照操作手冊(cè)，用Trizol法抽提總RNA?2 μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄至終體積為20 μL，采用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)miR-155的表達(dá)?用miR-155特異性的具有莖環(huán)樣結(jié)構(gòu)的引物5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTC-CGAGGTATTCGCAC TGGATACGACCCCCTA-3’合成互補(bǔ)的DNA，檢測(cè)miR-155的表達(dá)?定量多聚酶鏈反應(yīng)(qPCR)引物設(shè)計(jì)，正向引物:5’-CTGTTAATGCTAATCGTGAT AG-3’;反向引物5’-GCAGGGTCCGAGGT-3’?核內(nèi)小分子RNA U6作為內(nèi)參，引物設(shè)計(jì)如下，正向引物:5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’;反向引物:5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’?PCR反應(yīng)體系包括:1 μL RT逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，10 μL SYBR Green PCR Master Mix和500 nmol/L正向以及反向引物?反應(yīng)采用MyiQ單色實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)系統(tǒng)(Bio-Rad)，先95 ℃孵育30 min，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)(95 ℃10 s， 60 ℃ 30 min)?U6做為內(nèi)參，采用2-CT法分析基因相對(duì)表達(dá)量?

1.6 Western Blot檢測(cè) SR-A 和CD36蛋白表達(dá)情況

總蛋白的提取:用冰浴的PBS洗滌細(xì)胞3遍，加入RIPA裂解液100 μL，冰上裂解30 min?刮下并收集細(xì)胞，4 ℃，12 000 r/min(r=9.5 cm)離心10 min，吸取上清液，用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，-80℃保存?Western Blot檢測(cè)SR-A和CD36蛋白表達(dá):以 60 μg蛋白每泳道上樣，經(jīng)8% SDS-PAGE 電泳分離，電轉(zhuǎn)移蛋白至PVDF膜，5% 脫脂牛奶室溫封閉1 h 后，一抗(SR-A，1∶4 000;CD36，1∶1 000)，4 ℃孵育過夜; TBST洗滌3次，每次5 min，二抗(HRP標(biāo)記的驢抗山羊IgG 1∶4 000;1∶2 000)，室溫孵育1 h，TBST 洗滌3次，每次10 min?ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白表達(dá)，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算蛋白表達(dá)的相對(duì)變化?

1.7 激光共聚焦顯微鏡觀察miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞結(jié)合?攝取DiI-oxLDL能力的影響

按文獻(xiàn)報(bào)道的方法進(jìn)行[10]，主要步驟簡(jiǎn)述如下:病毒轉(zhuǎn)染24 h后，加入ox-LDL處理細(xì)胞48 h?隨后各組分別加入終濃度為10 μg/mL的DiI-oxLDL，于4 ℃下孵育細(xì)胞2 h(反映巨噬細(xì)胞結(jié)合DiI-oxLDL能力)或37 ℃下孵育細(xì)胞4 h(反映巨噬細(xì)胞攝取DiI-oxLDL能力)，經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定10 min后，加入終濃度5 mg/L的Hoechst33258避光染色5 min，PBS洗滌3次后，激光共聚焦顯微鏡下(600×)觀察拍攝?各組隨機(jī)選取5個(gè)視野，運(yùn)用confocal自帶Fluorescence View軟件測(cè)定視野內(nèi)所有細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度并計(jì)算平均值?

1.8 數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)

所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ± s)表示?采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組資料比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P

2 結(jié) 果

2.1 Ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞miR-155表達(dá)上調(diào)

實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，在THP-1細(xì)胞，80 μg/mL的ox-LDL可以誘導(dǎo)miR-155的表達(dá)上調(diào)?Ox-LDL作用后2 h，miR-155表達(dá)開始增加，6 h達(dá)到最高?盡管8 h開始有所降低，但ox-LDL作用后一直到72 h，miR-155表達(dá)仍維持在較高表達(dá)水平(圖1)?

2.2 過表達(dá)miR-155抑制巨噬細(xì)胞結(jié)合?攝取DiI-oxLDL

為明確ox-LDL誘導(dǎo)miR-155表達(dá)上調(diào)的功能，我們觀察了腺病毒轉(zhuǎn)染miR-155(Ad-miR-155)后對(duì)巨噬細(xì)胞結(jié)合和攝取DiI-oxLDL的影響?結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，ox-LDL處理細(xì)胞48 h后，巨噬細(xì)胞攝取DiI-oxLDL的能力明顯增加?Ox-LDL處理后細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度從對(duì)照組的262±25增加至433 ± 29(n=6， P < 0.05)?Ad-miR-155轉(zhuǎn)染可明顯抑制巨噬細(xì)胞攝取DiI-oxLDL的能力?Ad-miR-155不同滴度(25 MOI，50 MOI，100 MOI)轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度分別降至353 ± 22(n=6，P < 0.05)，285 ± 11(n=5， P < 0.01)和247 ± 12(n=6，P < 0.01)?而Ad-LacZ轉(zhuǎn)染無作用(圖2A)?

同時(shí)我們觀察到，ox-LDL處理細(xì)胞48 h后，巨噬細(xì)胞結(jié)合DiI-oxLDL的能力亦明顯增加?Ox-LDL處理后細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度從對(duì)照組的84 ± 6增加至221 ± 12(n=6， P < 0.05)?Ad-miR-155轉(zhuǎn)染(50 MOI)可明顯抑制巨噬細(xì)胞與DiI-oxLDL的結(jié)合，Ad-miR-155轉(zhuǎn)染使細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度降至146 ± 16(n=6， P < 0.01)(圖2B)?

2.3 抑制miR-155促進(jìn)巨噬細(xì)胞結(jié)合?攝取DiI-oxLDL

為進(jìn)一步明確miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞結(jié)合和攝取DiI-oxLDL的影響?我們研究了腺病毒轉(zhuǎn)染反義-miR-155(Ad-anti-miR-155)的作用?圖3A顯示，Ad-anti-miR-155轉(zhuǎn)染(50 MOI)后，基礎(chǔ)狀態(tài)和ox-LDL刺激后的巨噬細(xì)胞攝取DiI-oxLDL的能力均明顯增強(qiáng)?Ad-anti-miR-155作用后，基礎(chǔ)狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度從Ad-LacZ轉(zhuǎn)染組的292 ± 26增加至明顯增加402 ± 34(n=5，P < 0.05)?Ox-LDL處理后，細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度較對(duì)照組增加(481 ± 33 vs. 292 ± 26， n=5，P < 0.05)?Ad-anti-miR-155轉(zhuǎn)染可進(jìn)一步增強(qiáng)oxLDL的作用，使細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度增加至559 ± 34(n=5， P < 0.05)?另一方面，巨噬細(xì)胞結(jié)合DiI-LDL的能力也明顯增加?在基礎(chǔ)狀態(tài)下和和ox-LDL刺激后，Ad-anti-miR155轉(zhuǎn)染分別使巨噬細(xì)胞內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度從142 ± 7增加至 190 ± 10(n=5，P

轉(zhuǎn)貼于

2.4過表達(dá)miR-155降低了SR-A和CD36的表達(dá)

由于巨噬細(xì)胞攝取脂質(zhì)主要通過膜上的清道夫受體完成，因此，我們進(jìn)一步分析了腺病毒轉(zhuǎn)染miR-155(Ad-miR-155)后對(duì)巨噬細(xì)胞SR-A和CD36表達(dá)的影響?結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨Ad-miR-155轉(zhuǎn)染滴度的增加，SR-A和CD36的表達(dá)逐漸降低?MiR-155不僅抑制基礎(chǔ)狀態(tài)下SR-A和CD36的表達(dá)，而且逆轉(zhuǎn)ox-LDL誘導(dǎo)的SR-A和CD36蛋白表達(dá)的上調(diào)(圖4A，圖4B)?

2.5 抑制miR-155上調(diào)SR-A和CD36的表達(dá)

進(jìn)一步我們觀察了抑制miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞清道夫受體表達(dá)的影響?Western Blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染Ad-anti-miR155(50 MOI)可顯著增加基礎(chǔ)狀態(tài)下巨噬細(xì)胞中SR-A和CD36的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=6，P < 0.05)(圖5A)?加入ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞后，SR-A和CD36的表達(dá)上調(diào)?預(yù)先轉(zhuǎn)染Ad-anti-miR155 (50 MOI)，可進(jìn)一步增加SR-A和CD36的表達(dá)上調(diào)(n=6，P < 0.05)(圖5B)?

3 討 論

MicroRNA 是一類長(zhǎng)約 18~24 個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA，通過與特異性靶基因 mRNA的3′-UTR 區(qū)結(jié)合，抑制其翻譯或使其降解，從而調(diào)控目的基因的表達(dá)?MicroRNA在細(xì)胞增殖?凋亡?分化，胚胎發(fā)育和免疫應(yīng)答等過程中發(fā)揮著重要的作用，與機(jī)體多種疾病尤其是心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[11]?如在心血管組織異性高表達(dá)的miR-1?miR-133 和 miR-208等，其表達(dá)異常均可導(dǎo)致心臟發(fā)育缺陷[12]?

動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)生發(fā)展過程中，是否也受到了microRNA的調(diào)控，成為近年來的研究熱點(diǎn)[13]?MiR-155位于非編碼基因Bic內(nèi)，在血液細(xì)胞中高表達(dá)?已有研究表明miR-155參與調(diào)控T淋巴細(xì)胞?B淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的分化，從而影響機(jī)體的免疫功能?在單核巨噬細(xì)胞，一些促炎因子如TNFα，LPS等可通過NF-κB信號(hào)通路上調(diào)miR-155的表達(dá)?提示miR-155可能參與調(diào)控了機(jī)體的炎癥反應(yīng)過程?已往研究發(fā)現(xiàn)，在ox-LDL刺激的巨噬細(xì)胞中，miR-125a-5p?miR-146和miR-155等的表達(dá)上調(diào)[4]?但miR-155是否影響巨噬泡沫細(xì)胞的形成，尚不清楚?

最近，Huang等[14]發(fā)現(xiàn)ox-LDL誘導(dǎo)miR-155上調(diào)可能參與了巨噬泡沫細(xì)胞的形成，抑制miR-155表達(dá)可抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的聚集?該作用與LOX-1，CD36和CD68的表達(dá)上調(diào)有關(guān)?但miR-155對(duì)細(xì)胞膜上清道夫受體的功能以及對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下巨噬細(xì)胞攝取脂質(zhì)的影響，尚不明了?為了進(jìn)一步闡明miR-155在巨噬泡沫細(xì)胞形成中的作用，本研究中，我們從過表達(dá)和下調(diào)miR-155表達(dá)兩個(gè)不同的角度，探討了miR-155對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下和ox-LDL處理后的巨噬細(xì)胞結(jié)合和攝取脂質(zhì)的能力以及細(xì)胞膜上清道夫受體表達(dá)的影響?我們發(fā)現(xiàn)ox-LDL可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞miR-155表達(dá)上調(diào)?由于巨噬細(xì)胞吞噬大量脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞是動(dòng)脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此我們通過轉(zhuǎn)染miR-155和反義miR-155病毒，上調(diào)或抑制巨噬細(xì)胞上miR-155的表達(dá)，觀察其對(duì)細(xì)胞結(jié)合和攝取DiI-oxLDL能力的影響?結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論是基礎(chǔ)狀態(tài)還是ox-LDL處理后，過表達(dá)miR-155均可明顯抑制巨噬細(xì)胞對(duì)DiI-oxLDL的結(jié)合和攝取;而抑制miR-155則促進(jìn)巨噬細(xì)胞結(jié)合和攝取DiI-oxLDL?這些結(jié)果說明miR-155表達(dá)的上調(diào)可抑制巨噬泡沫細(xì)胞的形成?已知巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的結(jié)合和攝取主要是通過膜上的清道夫受體SR-A和CD36等實(shí)現(xiàn)的，所以我們進(jìn)一步分析了miR-155對(duì)SR-A和CD36蛋白表達(dá)的影響?我們的結(jié)果顯示過表達(dá)miR-155，不僅抑制基礎(chǔ)狀態(tài)下SR-A和CD36的表達(dá)，而且逆轉(zhuǎn)了ox-LDL誘導(dǎo)的 SR-A和CD36的表達(dá)上調(diào);而抑制miR-155則明顯上調(diào)SR-A和CD36的表達(dá)?這些結(jié)果表明miR-155通過下調(diào)SR-A和CD36的表達(dá)，影響巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的結(jié)合?攝取，從而抑制巨噬細(xì)胞泡沫化過程?但miR-155影響SR-A和CD36表達(dá)的具體機(jī)制，尚不清楚?我們的資料提示ox-LDL作用于巨噬細(xì)胞，一方面通過激活氧化應(yīng)激系統(tǒng)等信號(hào)通路，促進(jìn)巨噬泡沫細(xì)胞的形成?同時(shí)亦可激活抑制泡沫化形成的機(jī)制(如上調(diào)miR-155表達(dá)等)?ox-LDL最終影響巨噬細(xì)胞泡沫化形成取決于上述兩種因素的相互作用?

總之，本研究發(fā)現(xiàn)miR-155可通過下調(diào)巨噬細(xì)胞上清道夫受體如SR-A和CD36等的表達(dá)，抑制巨噬泡沫細(xì)胞的形成?提示miR-155可能是防治巨噬細(xì)胞泡沫化，進(jìn)而防治動(dòng)脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)?

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