金威消石湯治療結(jié)石小鼠泌尿系統(tǒng)

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泌尿系統(tǒng)結(jié)石是臨床的常見病及多發(fā)病，目前在臨床上主要依靠手術(shù)及藥物進行治療，部分患者或選擇保守治療及體外碎石進行治療。隨著醫(yī)學研究的迅猛發(fā)展，越來越多的先進醫(yī)療設(shè)備及手術(shù)方法被應用于臨床。需要注意的是，先進醫(yī)療設(shè)備及手術(shù)治療方法在應用于臨床取得良好治療效果的同時，存在著一定的局限性，如手術(shù)適應證、治療后殘余結(jié)石等，尤其是在降低泌尿系統(tǒng)結(jié)石復發(fā)方面。在祖國醫(yī)學傳統(tǒng)理論中，結(jié)石屬于“石淋”范疇，是由于體內(nèi)濕熱釀火，灼燒津液所致，需化濕降火，滋陰排石。利用傳統(tǒng)中藥治療結(jié)石，具有安全性能好、針對性強、患者痛苦少、治療效果好、副作用少等優(yōu)點，受到臨床醫(yī)護工作者及患者的歡迎。在泌尿系統(tǒng)疾病的醫(yī)學研究中，通過泌尿系統(tǒng)結(jié)石動物模型進行試驗是普遍而有效的做法。通過動物試驗，不僅能夠更加深入地了解中藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的應用價值，還能明確其中藥理，印證關(guān)于泌尿系統(tǒng)結(jié)石病因及病程的理論。本次研究選擇健康昆明種小鼠90只，均為6周齡，雌雄各半，通過三氯氰胺建立泌尿系統(tǒng)結(jié)石造模成功后，選用金威排石湯(JWT)進行治療，取得了不錯的治療效果，現(xiàn)報告如下。

1實驗動物與研究方法

1.1實驗動物

本次研究選擇健康昆明種小鼠90只，雌雄各半，體重18～25g，均為6周齡，將其隨機分為4組，分別為空白對照組、結(jié)石模型對照組、結(jié)石模型+PSHC(枸櫞酸氫鉀鈉顆粒)組、結(jié)石模型+JWT組，其中后兩組再分成低劑量及高劑量2個亞組?？瞻讓φ战M10只，給予蒸餾水灌胃，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型對照組16只，給予三聚氰胺溶液灌胃，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型+PSHC組中高劑量及低劑量亞組均為16只，在結(jié)石模型組基礎(chǔ)上加入PSHC灌胃，PSHC含量分別為1.25g/mL及0.5g/mL，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型+JWT組在結(jié)石模型組基礎(chǔ)上加入金威消石湯粉劑及湯劑進行小白鼠灌胃，高劑量亞組及低劑量亞組均為16只，JWT濃度分別為0.625g/10g與2.50g/mL，0.3125g/10g與1.23g/mL，灌胃量均為0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d。其中，先期進行預試驗，使用三聚氰胺溶液含量分別為每kg溶液含三聚氰胺500mg、1000mg、1500mg及2000mg，同時設(shè)立空白對照組，每組均為5只小鼠，連續(xù)灌胃30d后，將小鼠常規(guī)處死，并將其雙側(cè)腎臟制成病理切片觀察以確定三聚氰胺建立泌尿系統(tǒng)結(jié)石小鼠模型應用劑量。本次研究中應用三聚氰胺劑量為2000mg/kg，泌尿系統(tǒng)結(jié)石為草酸鈣晶體結(jié)石。

1.2研究方法

本次試驗研究方法主要包括采集樣本與觀察指標。其中，本次試驗采集樣本及觀察指標包括以下幾點:

(1)試驗期間觀察各組小鼠每日活動狀態(tài)，以及毛色變化情況，小鼠在試驗期間每周均需稱重1次;

(2)觀察泌尿系統(tǒng)組織成石情況，灌胃30d對所有小鼠進行稱重后處死，并立即進行解剖，采集膀胱內(nèi)尿液，通過pH試紙檢測pH值，并應用尿液常規(guī)鏡檢查找結(jié)晶體，同時對解剖后的小鼠泌尿系統(tǒng)組織內(nèi)成石情況通過肉眼進行觀察，確定結(jié)晶體顆粒形成情況;

(3)腎功能檢測，試驗開始15d及30d后，分別采集試驗小白鼠尾部靜脈血標本各1mL，送實驗室，檢測血液中血清肌酐、尿素氮及尿酸水平;

(4)觀察試驗小鼠體內(nèi)腎臟形態(tài)學變化，并對其腎臟進行稱重，沿腎門區(qū)輸尿管將腎臟剪斷后，對半切開，通過福爾馬林緩沖固定、脫水機石蠟包埋后，常規(guī)進行切片及HE染色，在顯微鏡下對腎臟內(nèi)病理方面變化、結(jié)晶體形成情況進行觀察及記錄，按照腎臟損害程度及炎癥反應表現(xiàn)將其分成三級，并通過免疫組化法檢測小白鼠腎臟組織內(nèi)TNF－Ar表達相關(guān)情況。

1.3試驗藥物

本次試驗應用金威消石湯配方包括:

(1)湯劑，金錢草(80g)、黃芪(60g)、王不留行(30g)、牛膝(30g)、益母草(30g)及雞內(nèi)金(20g)，按照常規(guī)方法將其制成濃縮液(生藥質(zhì)量濃度設(shè)定為2.50g/mL及1.23g/mL);

(2)粉劑，包括元明粉(10g)、琥珀(5g)及黑木耳粉(10g)，按照常規(guī)方法將藥材研磨成粉末，制成粉劑。本次試驗選用PSHC，即枸櫞酸氫鉀鈉顆粒，將其加入蒸餾水中，制成高、低劑量溶液，含量分別為1.25g/mL及0.5g/mL。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS18.0軟件對本次試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，分別采用χ2檢驗及t檢驗，當P＜0.05，數(shù)據(jù)差異比較明顯，具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1結(jié)石小鼠體重及毛色變化

30d內(nèi)，4組試驗小鼠體重變化均不明顯。其中，空白對照組小鼠毛色無變化，其余小鼠毛色逐漸黯淡無光，但組間比較差異不顯著，P均＞0.05。

2.2結(jié)石小鼠泌尿系統(tǒng)成石情況比較

4組小鼠體內(nèi)泌尿系統(tǒng)成石情況按照腎臟損傷程度及炎癥反應分成3個等級進行比較，差異比較明顯，P＜0.05。

2.3結(jié)石小鼠中血清肌酐、尿素氮及尿酸水平比較

4組小鼠在試驗開始后15d及30d，分別抽取尾靜脈血進行靜脈檢測血清肌酐、尿素氮及尿酸。其中，結(jié)石模型藥物治療組共兩組，血清中尿素水平治療后同結(jié)石模型組小鼠相比較，下降均比較明顯，以結(jié)石模型+JWT組中高劑量亞組下降幅度最明顯，P＜0.05，

2.4小鼠腎臟重量及TNF－Ar表達情況

由于金威消石湯及PSHC均對小鼠具有一定的利尿作用，故試驗結(jié)束后將小鼠腎臟稱重，結(jié)石模型組小鼠腎臟重量相對較高，而結(jié)石模型+JWT組高劑量亞組小鼠TNF－Ar表達情況相對最好。

3討論

泌尿系統(tǒng)結(jié)石，在臨床又稱為尿石癥，或石淋，是指在腎或膀胱等泌尿系統(tǒng)組織中形成的晶體物質(zhì)，在某種或某幾種原因作用下逐漸下移，引起機體出現(xiàn)的一系列臨床表現(xiàn)，在泌尿系統(tǒng)疾病發(fā)病率中位居第三位，是急診泌尿科中的常見病，多發(fā)于30～50歲年齡人群。臨床常見的幾種治療方法中，手術(shù)或體外沖擊波碎石屬于西醫(yī)治療措施，具有創(chuàng)傷大、后遺癥多等缺點，但保守治療措施臨床療效不佳。而應用中藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石則可得到較好的臨床效果，廣泛應用于結(jié)石直徑不足1cm的尿石癥治療中，臨床上常聯(lián)合如體外碎石等措施治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石。據(jù)臨床研究顯示，中藥治療尿石癥方劑較多，如八珍湯等，治療尿石癥，有效率最高可達73%～98%。而且結(jié)石中主要成分多為草酸鈣或磷酸鈣，在所有結(jié)石中約占82%左右，其中，腎結(jié)石中草酸鈣發(fā)病率多于磷酸鈣。本研究所用金威消石湯為我院校合作自制排石中藥驗方，具有化堅消石、活血補腎止痛的作用，在所有受試小鼠分組中，排石效果最好，對草酸鈣晶體關(guān)于其生長及聚集方面的抑制作用最強。此外，還可通過在中藥方劑中加入豬苓等藥材抑制腎臟中的腎小管向外擴張，降低腎小管上皮細胞出現(xiàn)的變形、腫脹等異常，而且能夠明顯降低尿液和腎臟組織內(nèi)鈣離子含量，同樣對尿草酸鈣結(jié)石的排除也具有一定的作用及經(jīng)驗，已經(jīng)證實與豬苓麥角甾醇關(guān)系比較密切。由此可推測，金威消石湯能夠減緩草酸鈣晶體聚集速度，促進小鼠排尿，增加排尿量，本次研究中以用藥后3h內(nèi)最為明顯。綜上所述，金威消石湯能夠有效治療小鼠泌尿系統(tǒng)結(jié)石，促進小鼠提高尿量，若聯(lián)合其他藥物可得到更好療效。

作者：趙燕芬 邵少慰 肖劍 單位：肇慶醫(yī)學高等?？茖W校 肇慶市第二人民醫(yī)院