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【關鍵詞】 川芎嗪注射液; 腹膜間皮細胞; 高糖; ⅰ型膠原; 基質金屬蛋白酶?1; 基質金屬蛋白酶抑制劑?1; 體外實驗
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 65?69.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text link?out at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucose?induced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase?1 and tissue inhibitor of metalloproteinase?1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
gui?song zhu, jin?song he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase?1 (mmp?1) and tissue inhibitor of metalloproteinase?1 (timp?1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low?, medium? and high?dose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semi?quantitative reverse transcription?polymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp?1 and timp?1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp?1 and timp?1 in culture supernatants were measured by enzyme?linked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucose?induced type ⅰ collagen and timp?1 expressions in a dose?dependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium? and high?dose ligustrazine injection could significantly increase mmp?1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp?1/timp?1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase?1; tissue inhibitor of metalloproteinase?1; in vitro
腹膜纖維化是腹膜透析治療的主要并發(fā)癥,最終導致腹膜功能衰竭,這是腹膜透析患者退出治療的主要原因[1]。腹膜纖維化以細胞外基質(extracellular matrix, ecm)的過度沉積為特點[2]。研究表明,ecm的過度沉積是由于ecm合成與降解失衡而引起[3]。ⅰ型膠原是腹膜纖維化中主要的ecm[4],其降解過程受基質金屬蛋白酶?1(matrix metalloproteinase?1, mmp?1)及其特異性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑?1(tissue inhibitor of metalloproteinase?1, timp?1)調控[5]。有研究證實,高糖能上調腹膜間皮細胞(human peritoneal mesothelial cells, hpmcs)ⅰ型膠原和timp?1的表達,降低mmp?1活性[3]。本研究通過觀察川芎嗪注射液對高糖刺激下hpmcs ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1表達的影響,探討川芎嗪在防治腹膜纖維化中的作用及其機制。
1 材料和方法
1.1 試劑和主要儀器 川芎嗪注射液(江蘇蘇中藥業(yè)集團股份有限公司,批準號為國藥準字h20020630);50%葡萄糖注射液(江蘇方強制藥廠,批號為200710111)。磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution, pbs)、胎牛血清(fetal calf serum, fcs)、trizol和rpmi?1640粉劑等(gibco公司);胰蛋白酶和瓊脂糖粉等(promega公司);ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme?linked immunosorbent assay, elisa)試劑盒(adl公司);二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, bca)蛋白含量檢測試劑盒(南京凱基生物科技公司);ⅰ型膠原、mmp?1、timp?1和β?actin引物,m?mlv第一鏈cdna合成試劑盒和taq酶等(invitrogen公司);抗細胞角蛋白抗體、抗細胞波形蛋白抗體、第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體(北京中山生物技術有限公司)。nu?2500e二氧化碳培養(yǎng)箱(nuaire公司);全自動酶標儀(biobank公司);生物電泳圖像分析系統(tǒng)(上海復日科技有限公司)。
1.2 實驗方法
1.2.1 hpmcs的培養(yǎng)與鑒定 取來自南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術患者(排除尿毒癥、腹膜炎)捐獻的大網膜組織,按文獻[3]方法原代培養(yǎng)hpmcs,按1?3傳代,第3代細胞用于實驗,每次實驗均由來自3個患者的標本進行3次獨立實驗。倒置相差顯微鏡觀察hpmcs呈多邊形,似鋪路鵝卵石樣外觀;免疫組化鑒定抗細胞角蛋白抗體和抗波形蛋白抗體染色陽性,抗第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體染色陰性。
1.2.2 實驗步驟和分組 hpmcs用含1%fcs的rpmi?1640培養(yǎng)液同步培養(yǎng)24 h后分為5組(每組設3個樣本):正常組(完全培養(yǎng)液)、高糖對照組(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加低、中、高劑量川芎嗪(10、20和40 mg/l)組。各組完全培養(yǎng)液均為含有15% fcs的rpmi?1640培養(yǎng)液。細胞置于37 ℃、5% co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。
1.2.3 elisa法檢測細胞上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1含量 分組干預48 h后,離心收集上清液,按elisa試劑盒說明書檢測ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1表達水平。用0.1 mol/l naoh溶解細胞沉淀,bca蛋白檢測試劑盒測定細胞沉淀中蛋白質濃度,用相應蛋白質濃度結果校正檢測結果。
1.2.4 半定量rt?pcr 分組處理同上。采用trizol一步法提取總rna,2 μg總rna進行逆轉錄合成cdna,50 μl反應體系進行pcr擴增,以β?actin作內參照(引物序列及反應條件見表1)。1.5%瓊脂糖凝膠電泳(110 v,15 min)進行pcr產物鑒定,電泳圖像分析儀掃描分析,mrna相對含量用其pcr產物吸光值(absorance, a)與β?actin a值的比值表示。引物及pcr反應條件見表1。
1.3 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)用x±s表示,采用spss 15.0軟件進行統(tǒng)計分析,組間差異比較采用單因素方差分析,兩組間均數(shù)比較采用lsd?t檢驗。檢驗水準α=0.05。 表1 ⅰ型膠原、mmp?1、timp?1和β?actin引物序列及pcr反應條件
2 結 果
2.1 上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1蛋白質水平 與正常組比較,高糖對照組上清液中ⅰ型膠原和timp?1含量顯著升高(p<0.01),mmp?1含量顯著下降(p<0.01);與高糖對照組比較,低、中和高劑量川芎嗪組上清液中的ⅰ型膠原和timp?1含量顯著降低(p<0.05, p<0.01),且兩者均呈量效關系,中、高劑量川芎嗪組上清液mmp?1含量顯著增加(p<0.01)。見表2。表2 各組上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1蛋白質表達
2.2 hpmcsⅰ型膠原、mmp?1和timp?1 mrna的表達 與正常組比較,高糖對照組hpmcs ⅰ型膠原/β?actin mrna和timp?1/β?actin mrna分別上升(15.43±0.83)倍和(4.19±0.09)倍(p<0.01),mmp?1/β?actin mrna下降(86.9±0.44)%(p<0.01);與高糖對照組相比,低、中、高劑量川芎嗪組ⅰ型膠原/β?actin mrna和timp?1/β?actin mrna表達水平均顯著下調(p<0.05),兩者均呈量效關系,中、高劑量川芎嗪組mmp?1/β?actin mrna表達顯著增加(p<0.05)。見圖1和圖2。
3 討 論
高糖透析液導致ecm過度沉積是腹膜纖維化的病理基礎[2],研究表明,高糖不僅增加hpmcsⅰ型膠原的表達,并且引起ⅰ型膠原降解酶系mmp?1/timp?1的表達失衡[3]。我們的研究結果與之基本相同,此外我們發(fā)現(xiàn),川芎嗪能顯著對抗高糖的上述作用。
在生理條件下,hpmcs可以產生一定量的ecm和mmps/timps[3, 6]。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系,幾乎能降解全部ecm成分。timps是內源性分泌蛋白,作為mmps的特異性抑制因子,其n'端可與相應的mmps催化活性中心的鋅離子結合而抑制其催化活性[7]。本實驗通過研究川芎嗪對hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型膠原及其降解酶系mmp?1/timp?1分泌及表達的影響,旨在探討川芎嗪對hpmcs在高糖環(huán)境下ⅰ型膠原的合成和降解的干預作用及其機制。結果顯示,川芎嗪能顯著降低高糖所致的ⅰ型膠原的過度合成,同時顯著下調timp?1的表達,增加mmp?1的表達,提示川芎嗪亦能通過調節(jié)mmp?1/timp?1的平衡,從而促進ⅰ型膠原的降解,減少ecm沉積。由此我們推測,川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用。
川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一,屬酰胺類生物堿,具有活血化瘀的功效。藥理實驗證明,川芎嗪具有擴張血管、改善微循環(huán)、調節(jié)免疫和鈣離子拮抗的作用[8]。目前川芎嗪抑制ⅰ型膠原、timp?1和增加mmp?1表達的機制尚不清楚。以往的研究發(fā)現(xiàn)這可能與抑制轉化細胞生長因子β1(transforming growth factor?β1, tgf?β1)表達有關[9, 10]。tgf?β1是重要的致纖維化細胞因子,參與了腹膜纖維化的病理過程[2]。tgf?β1可增加ⅰ型膠原的合成,并且抑制mmps的活性而激活timps,使ⅰ型膠原降解減少[3, 11]。有研究報道,川芎嗪能降低多種細胞如心肌細胞、肝細胞和血管內皮細胞的膠原合成和timp?1表達,而增加mmp?1的分泌和表達,進一步的研究發(fā)現(xiàn)這可能是通過抑制tgf?β/smads信號傳導通路繼而抑制tgf?β1表達的結果[9, 10, 12]。我們前期研究證實,川芎嗪能下調高糖致hpmcs tgf?β1的表達(文章待發(fā)表)。因此我們推測,川芎嗪抑制tgf?β1的表達可能是其抑制hpmcs ⅰ型膠原合成和調整mmp?1/timp?1表達平衡的機制之一,其具體機制將是我們下一步要研究的內容。
綜上所述,川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型膠原的過度合成,并且通過調節(jié)mmp?1/timp?1的平衡,促進ⅰ型膠原降解,從而減少ecm的沉積,防止腹膜纖維化的發(fā)生和發(fā)展。因此,川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用,這對腹膜纖維化的機制及其防治的研究有一定借鑒和應用價值。
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教師簡短述職報告范文時間過的真快,轉眼有一學年過去了。驀然回首,往事歷歷在目。為今后更好的工作,現(xiàn)將本學期的工作述職如下:
一、錘煉業(yè)務
本學年我擔任五年級五個班的英語教學工作。在教學方面,首先按常規(guī)做好課前備課,認真鉆研教材,努力創(chuàng)設適合高年級教學的活動形式,以激發(fā)學生學習興趣,誘發(fā)學生的認知需求和創(chuàng)新欲望,使學生從情感、思維和行為上主動參與到學習中。教學中嘗試進行語音滲透,課下組建興趣小組,拓展語音知識,培養(yǎng)學生的自學能力。輔導的學生,參加淄博賽區(qū)希望之星英語風采大賽獲得一二三等獎。
課后,認真批改學生作業(yè),對作業(yè)嚴格要求,對學生做錯的題,做到及時糾正。在家庭作業(yè)方面,采用教師,家長,學生三者評價相結合的方式,達到學生作業(yè)有人看,學生作業(yè)天天查的目的,督促學生完成課文預習、復習這一環(huán)節(jié),努力培養(yǎng)學生良好的學習習慣,并為高效學習新知識打下基矗
二、虛心學習
作為一名新教師,我在教育教學中遇到了眾多問題。問題的解決需要細心的請教,勤奮地讀書、不斷地反思和不斷否定自我,超越自我。一年來,我通讀了《生命教育-一位小學英語教師的教育生活》、《第五項修煉》《班主任工作漫談》等教育專著。另外,通過向指導老師請教,聽課,外出學習等,開拓自己的思維,汲取別人的優(yōu)點,不斷的完善自己的教學。并在本年度取得了些許成績,在老師們的幫助下,我擔任了張店區(qū)小學英語五年級教材備課會主講并執(zhí)教研討課一節(jié),參加區(qū)英語優(yōu)質課比賽,區(qū)小學英語學科課堂教學實錄與評析比賽,全國第四屆新標準杯英語教案課件大賽中均獲一等獎。
古人云:飛瀑之下,必有深潭。這深潭是飛瀑長年累月沖擊地面而成的。同樣,教學經驗和方法也是靠長時間積累起來的。在以后的教學中我還要注意對自己的知識進行分類、比較、歸納和提煉,總結了教學中的成功與失敗、經驗與教訓,更注重研究如何啟迪學生智慧,調動學生學習的積極性,真正做到揚長避短,更好地教書育人。
三、勤奮工作
作為一名青年黨員教師,我時刻牢記黨旗下的誓言,保持一顆平常心,力求做到無欲而剛,遵守教師職業(yè)道德,積極參加學校組織的政治學習,業(yè)務學習,并記好學習筆記,心得體會,參加學校組織的各項活動。工作中,不計較個人得失,吃苦在前,做事在前,輔助大隊輔導員的做好各項工作,參與校報校刊的編審。在這一年中,我做到了不遲到,不曠課,不早退,嚴格遵守學校的一切規(guī)章制度,課時足,滿工作量,圓滿地完成了本學年的各項任務。
回顧一年來的工作 ,有成績也有不足。我知道,任何事情都是在不斷的反思--改進--再反思--再改進的過程中不斷的發(fā)展進步的,我相信在領導和同事的幫助下,我能不斷地加以克服缺點,我也將一如既往地盡自己最大的努力,為學校的發(fā)展做出貢獻。
總之,在本學年度教育教學工作中,我與全體同事共同努力,為我校教育教學任務的完成,特別是我校語文教學水平的提高,作出了自己應有的貢獻,取得了一點成績。同時,自身肯定有諸多不足之處存在,逝者不可追,來者猶可鑒,在今后的工作中我將,繼續(xù)努力。
教師簡短述職報告范文時光飛逝,轉眼間,一年又過去了,在這一年當中,我擔任著現(xiàn) 五(1)班的數(shù)學教學,在這當中我認真做好自己的本職工作,在平凡的崗位上默默付出著,收獲著?,F(xiàn)就將一學年的工作總結如下:
一、政治思想方面:
首先在師德上嚴格要求自己,認真學習和領會黨的十精神,與時俱進,愛崗敬業(yè),為人師表,熱愛、尊重學生。并積極參加各種學習培訓,為了提高自己的思想覺悟,每周認真進行政治、業(yè)務學習,并做好學習筆記。我還深知要教育好學生,教師必須先以身作則,時時做到教書育人,言傳身教,以自己的人格、行為去感染學生。并在不斷地學習中,努力使自己的思想覺悟、理論水平、業(yè)務能力都得到較快的提高。
二、教育教學方面:
加強學生的思想品德教育,使學生全面發(fā)展是教師的首要任務。我充分利用數(shù)學課,科學課有針對性在開展一些活動,提高學生的思想品德素質。用“小學生守則”、“日常行為規(guī)范”嚴格要求學生,規(guī)范學生言行,提高全班學生的思想素質,促進了正確班風、學風的形成。
實施素質教育首要問題是面向全體學生,使每個學生的素質都得到提高。教師必須關注班中的每一名學生,調動他們的積極性。用同一個標準去衡量全體學生是不科學的?;谶@種認識,為了使班中每一個學生獲得不同程度的發(fā)展,我在班中開展“自己與自己比”的教育活動。在全面了解學生的思想狀況,學生基礎,智力狀況,身體素質,性格愛好的基礎上,確定每一個學生的奮斗目標,同時,要求每一個學生都客觀地、全面地總結自己過去,充分認識自我,然后在思想、學習、紀律、文體勞動、愛好特長等方面確定今后的奮斗目標,并堅持每月小結一次。
在班級學生轉化工作中,要抓得準,做得細,有恒心,樂于幫助。我善于抓住學生學習、勞動、班級活動中閃現(xiàn)的亮點,激發(fā)他們的上進心和求知欲。在課堂上,對于一些預知的疑難問題,師生共議解決后,我還特別叫他們起來復述,進行難點突破、鞏固。而課堂上沒解決的,再進行個別補習。由于長期如此,有些學生樂意配合老師的行動,他們學習也在慢慢地進步。讓學生教育學生。有些事情在大人看來是錯誤的,但在孩子眼里卻是真實和正確的。大人教育孩子時,總喜歡擺大道理,大談自己的想法和體會,沒有觸動孩子的心理,讓孩子教育孩子的方法很有效。我在課堂中開展“我是課堂小主人”的活動,讓每個學生參與到課堂的管理中來,更好地促進課堂的發(fā)展,看到班級存在的問題和優(yōu)勢,為班級的發(fā)展出一份力。因此,班級的習慣有了好轉,學生自我管理的能力有了提高。
在教學上,為了有效地提高教學質量,我首先從自己做起,改變觀念,努力改進課堂教學, 認真?zhèn)浜谜n,做好課前準備,上好每一節(jié)課。注意培養(yǎng)良好的學習習慣,提高學生的自學能力。沒有良好的學習習慣,學習談不上自覺學習,抓學生堅持預習的習慣,學生借助課后思考題,使用工具書,查閱資料,掃清學習上的障礙,做到勤檢查。培養(yǎng)書寫規(guī)范工整的習慣,和訂正作業(yè)的習慣。優(yōu)化教學方法,充分發(fā)揮學生的主體作用。課堂上,想方設法讓學生通過眼、手、口、腦各種活動,獲得學習的樂趣,培養(yǎng)健康的個性。在老師的指導下,讓學生自讀、自悟、自得。重視讓學生默讀,讓學生在讀中思考,從而培養(yǎng)學生讀書的習慣和情趣。要求學生學會學習。在學習過程中,強調學生本身積極參與、吸收,成為教學活動中的主人。
另外,我積極參加教學教研活動,與同年級的老師進行教學的研討,認真參加學校組織的公開課觀摩活動。堅持平時的聽課學習活動,積累自己的教學經驗,向最前沿的教學理念學習。
三、工作考勤方面:
我尊重自己所從事的事業(yè),因為每一個孩子的身上都牽系著一個家庭的希望,所以在每一天的工作時間內都能按時作息,并積極運用有效的時間做好自己份內的工作。有急需處理的個人事務時也能做到按規(guī)定請假。