綠色化學起源精選(九篇)

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第1篇：綠色化學起源范文

生物發(fā)光是一個很普遍的生物學現(xiàn)象。早期的生物研究大多涉及分類、形成和生態(tài)方面，后來重點轉(zhuǎn)移到生態(tài)、生化的研究，目前已進入分子生物學的研究水平。從不同生物體內(nèi)提取的熒光蛋白的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)不盡相同。迄今，腔腸動物門多管水母屬的維多利亞多管水母（aequorea victoria）的發(fā)光蛋白系統(tǒng)研究得較為深入。

多管水母體內(nèi)存在著兩種發(fā)光蛋白，即光蛋白――水母素（aequorin）和綠色熒光蛋白（GFP，green fluorescent protein）。光蛋白作為分子標記及Ca2+的生物學指示劑，已被成功地應用于哺乳動物、植物、酵母、大腸桿菌細胞，用于檢測很多重要的生理學和病理學反應。GFP作為良好的細胞、發(fā)育、分子生物學的活體標記，用于監(jiān)測各種體系中的基因表達、蛋白定位以及多種細胞活動。利用GFP進行示蹤的研究范圍相當廣泛，從細胞生物學的基礎研究如細胞骨架和細胞分化、細胞器動力學和囊泡跟蹤，到一些熱門的前沿和學科和技術(shù)領域，如器官移植、基因治療、神經(jīng)生物學等等。

日本科學家下村修（Osamu Shimomura）、美國科學家馬丁?沙爾菲（Martin Chalfie）和美籍華裔科學家錢永?。≧oger Y. Tsien）因在發(fā)現(xiàn)和研究綠色熒光蛋白方面做出貢獻而分享了2008年的諾貝爾化學獎。他們的工作不但在科學上對化學、生物學、醫(yī)學等領域具有重要的意義，而且也與人們的日常生活密切相關(guān)，對于提高人類的生活品質(zhì)以及進一步改善人類的健康有十分重要的意義。

1研究GFP的時間線索

GFP從最初被發(fā)現(xiàn)到今天廣為應用，經(jīng)歷了半個多世紀的時間。首先簡單回顧一下這半個多世紀內(nèi)和GFP相關(guān)的主要事件。

1955年人們首次注意到水母體內(nèi)的綠色熒光物質(zhì)。

1962年下村修從維多利亞多管水母中提取并分離了GFP，證實了綠色熒光物質(zhì)是一種蛋白質(zhì)。它的溶液在日光下略呈綠色，在白熾燈下略顯黃色，而在紫外燈下則發(fā)出強烈的綠色熒光。

1969年之前稱為綠色蛋白質(zhì)（green protein）得名“綠色熒光蛋白”。

1974年研究發(fā)現(xiàn)光蛋白和GFP兩種分子之間會發(fā)生能量轉(zhuǎn)移（圖2）。

1979年下村修找到了GFP中的生色基團（Chromophore）（圖3，圖5）。

1985年普臘石（Douglas Prasher）根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序拿到了光蛋白（水母素）的基因。

1992年普臘石拿到了GFP的基因。

1993年GFP中生色基團的結(jié)構(gòu)被確認。

1994年沙爾菲通過大腸桿菌和線蟲研究獲得了GFP的生色機理；是年，第一種藍色熒光蛋白被報道，并提到了它可用于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）實驗中。

1995年研制出了增強型綠色熒光蛋白（EGFP），它的轉(zhuǎn)錄速度比野生GFP快四倍。

1996年得到了野生GFP和EGFP的晶體結(jié)構(gòu)，錢永健在EGFP的基礎上，利用突變技術(shù)，設計并研制出黃色熒光蛋白。

1997年光蛋白和GFP被用于Ca2+的敏感指示劑。

1999年后各種各樣的熒光蛋白被發(fā)明、改造并用于科學研究。

在研究GFP的50多年間，2008年諾貝爾化學獎的三位得主做出了至關(guān)重要的貢獻。

2下村修與維多利亞水母

在下村修以前就有人研究過生物發(fā)光現(xiàn)象，例如螢火蟲發(fā)出熒光，是由熒光酶（luciferase）作為酶催化氧化底物分子熒光素（luciferin）以后產(chǎn)生熒光。而蛋白質(zhì)本身發(fā)光，無需底物，起源是下村修的研究。

1962年，下村修和約翰森等在《細胞和比較生理學雜志》上報道，他們分離純化了維多利亞多管水母中的發(fā)光蛋白―水母素。據(jù)說下村修用水母提取發(fā)光蛋白時，有天下班前，他將產(chǎn)物倒進水池里。臨出門前關(guān)燈，回望了一眼水池，見到水池閃閃發(fā)光。因為水池也排放有養(yǎng)魚缸的水，他懷疑是魚缸成分影響了光蛋白。然而不久之后，他便確定鈣離子能增強光蛋白發(fā)光。

1963年，他和另一位研究者約翰森在《科學》雜志報道鈣和光蛋白發(fā)光的關(guān)系。其后Ridgway和Ashley提出可以用光蛋白來檢測鈣濃度，創(chuàng)造了檢測鈣的新方法。鈣離子是生物體內(nèi)的重要信號分子，光蛋白成為第一個有空間分辨能力的鈣檢測方法，是目前仍用的方法之一。

其實早在1955年，Davenport和Nicol就發(fā)現(xiàn)水母可以發(fā)出綠光，但不知其因。在1962年下村修和約翰森在那篇純化光蛋白的文章中，有個注腳，說還發(fā)現(xiàn)了另一種蛋白，它在日光下略呈綠色，在白熾燈下略顯黃色，而在紫外燈下則發(fā)出強烈的綠色熒光。其后他們仔細研究了其發(fā)光特性。1974年，通過純化他們得到了這種蛋白，當時稱之為綠色蛋白，即現(xiàn)在所謂的稱綠色熒光蛋白。Morin和Hastings提出光蛋白和GFP之間可以發(fā)生能量轉(zhuǎn)移。光蛋白在鈣刺激下會發(fā)光，其能量可轉(zhuǎn)移到GFP，刺激GFP發(fā)光（圖2）。

GFP是一種酸性球狀蛋白質(zhì)，它的發(fā)射光譜在505 nm具有吸收峰；激發(fā)光譜則在395 nm和470 nm具有吸收高峰（圖4）。

只有完整的GFP分子才會產(chǎn)生生物熒光，但與熒光的產(chǎn)生直接有關(guān)的是GFP分子中一小段被稱為生色基團的部位。在GFP的初級氨基酸序列上，第65個至第67個氨基酸（Ser-Tyr-Gly）形成環(huán)狀六肽三體，以共價鍵與GFP蛋白肽鍵骨架相連（圖5）。生色基團形成的機理目前尚不清楚，但在有分子氧存在的條件下，酪氨酸氧化成脫氫酪氨酸，并環(huán)化形成六肽，這可能是形成色基的必然過程。下村修最先推導了水母GFP色基結(jié)構(gòu)，后來又進行了進一步驗證與修改。

下村修本人對GFP的應用前景不感興趣，也沒有意識到應用的重要性。但他的研究卻切切實實地對之后的生物科學起到了革命性的作用。當他離開普林斯頓到Woods Hole海洋研究所后，他的同事普臘石（Douglas Prasher）對生物示蹤分子非常感興趣。1985年普臘石和日裔科學家Satoshi Inouye獨立根據(jù)蛋白質(zhì)順序拿到了光蛋白的基因（準確地說是cDNA）。1992年，普臘石拿到了GFP的基因。有了cDNA，一般生物學研究者就能很好地應用它，比使用蛋白質(zhì)更為方便。

1996年，GFP的晶體結(jié)構(gòu)也被研究得到，它是一個由11個β－折疊的蛋白質(zhì)以一個α－螺旋蛋白質(zhì)為中心軸所形成的籠狀圓柱體，生色基團是α－螺旋蛋白質(zhì)的重要組成部分，它的位置非常接近這個籠狀圓柱體的中心位置（圖6）。另一種平面的GFP表示方式如圖7，其中綠色的代表β－折疊，紅色的代表α－螺旋。

3沙爾菲將GFP應用于生物示蹤

將GFP表達到其他生物體這項工作，1994年由兩個實驗室獨立進行：美國哥倫比亞大學做線蟲的沙爾菲實驗室，和加州大學圣迭哥分校、Scripps海洋研究所的兩位日裔科學家Inouye和Tsuji。

沙爾菲在之前的工作中一直和Caenorhabditis elegans（一種被廣泛用于生物研究的線蟲）打交道。C. elegans這種線蟲只有959個細胞的一個腦，并且其三分之一的基因和人類基因有關(guān)。更重要的是，C. elegans是透明的，研究人員可以很方便的應用顯微鏡對其進行觀察研究。

1988年當沙爾菲得知GFP后，他意識到可以使用這一工具對C. elegans進行研究，它可以作為變化的綠色信號對線蟲不同細胞間的活動進行示蹤觀察。他將GFP基因與其他不同基因結(jié)合成可發(fā)出熒光的蛋白質(zhì)的想法付諸于實踐后，就能觀察到細胞中不同蛋白質(zhì)的形成。

沙爾菲使用DNA技術(shù)，將GFP的基因作為一個片段注射到成熟的線蟲的性腺細胞核中（圖7A），由于線蟲是雌雄同體，它可以使自已受精。GFP基因就出現(xiàn)在它的卵中（圖7B），這些卵分裂后形成新的細胞核在紫外光照射下可發(fā)出熒光（圖7C和D），圖7E中顯示了兩個這樣的細胞核。

光蛋白和GFP都有重要的應用，但光蛋白是熒光酶的一種，它需要熒光素才能發(fā)光，而GFP蛋白質(zhì)本身即能發(fā)光，在原理上有重大突破。在上世紀90年代，科學家一般認為熒光物質(zhì)在細胞中是通過許多步驟得到，每一步都需要蛋白質(zhì)來控制，并且此過程需要一些特殊的蛋白質(zhì)（熒光素）來產(chǎn)生GFP中的生色基團。但沙爾菲用實驗證實了這個假設是錯誤的。沙爾菲的研究向人們展示了綠色熒光蛋白作為發(fā)光的示蹤分子的作用。

當時沙爾菲的論文引起了巨大轟動，很多生物學研究者紛紛將GFP引入自己的系統(tǒng)。在一個新系統(tǒng)表達GFP就能在《自然》、《科學》上發(fā)表文章，其實不過是跟風性質(zhì)，沒有原創(chuàng)性。

將GFP用作示蹤分子，具有以下優(yōu)點：①熒光穩(wěn)定；②檢測方便；③無種屬特異性，也沒有細胞種類和位置的限制；④GFP對受體細胞基本無毒害；⑤由于其他生物本身不含有GFP，因此不會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；⑥不需任何反應底物和輔助因子；⑦可制成永久標本；⑧靈敏度高。

盡管GFP作為報告基因或示蹤分子有許多優(yōu)點，但野生GFP發(fā)出的熒光較弱。其次，熒光反應不是酶反應，不能通過添加某些物質(zhì)來加強信號，且不易對熒光進行定量檢測。另一方面，GFP基因在植物細胞內(nèi)的表現(xiàn)頻率并不高，甚至在某些植物細胞中并不表現(xiàn)。所以有更多的科學家對GFP進行了改進。

從1961年到1974年，下村修和約翰森的研究遙遙領先，而很少被人注意。在1974年以后，特別是八十年代后的后繼工作，很多研究生都能夠完成。其中例外的是錢永健所在實驗室所發(fā)現(xiàn)的變種出現(xiàn)新顏色，這一發(fā)現(xiàn)卻非顯而易見。

4錢永健改造并發(fā)展了GFP的應用

隨著生物信息學、定點突變，DNA－shuffling等一系列理論和技術(shù)的應用，綠色熒光蛋白的家族成員不斷擴大，出現(xiàn)熒光光譜、溫度敏感性等改變的多種變異型。具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得拓寬了GFP的應用范圍，解決了許多單獨運用GFP不能解決的問題。GFP基因的改進目前主要通過以下幾個途徑得到突變體GFP：①更換GFP生色團氨基酸；②改變堿基組成；③除去GFP基因中隱蔽剪接位點；④插入植物內(nèi)含子；⑤更換強啟動子等突變體GFP；⑥增加熒光強度和熱穩(wěn)定性。

目前已有的具不同光譜的突變型有EBFP（增強型藍色熒光蛋白）、ECFP（增強型青色熒光蛋白）、EGFP（增強型綠色熒光蛋白）和EVFP（增強型黃色熒光蛋白），分別呈現(xiàn)藍、青、綠、黃四種顏色。至今所獲得突變型的最大發(fā)射波長為529nm，為黃綠色熒光。

錢永健是和下村修研究相關(guān)的一位重要科學家。從八十年代一開始，他的工作就非常引人矚目。同時他十分肯定下村修的工作，較早公開介紹下村修的發(fā)現(xiàn)。在他的研究工作中，有兩項重要工作都與下村修有一定聯(lián)系。

一項是研究鈣染料。1980年錢永健發(fā)明檢測Ca2+濃度的染料分子，1981年改進了將染料引入細胞的方法，以后發(fā)明了更多、更好的染料，被廣泛地應用。檢測鈣的方法有三種：選擇性電極、光蛋白、鈣染料。在錢永健研制的鈣染料沒有出現(xiàn)以前，具有空間檢測能力的只有光蛋白，但當時光蛋白需要注射到細胞內(nèi)，應用不方便。錢永健的鈣染料可以通透到細胞里面去。

錢永健的第二項工作是研究GFP。1994年起，錢永健開始研究并改造GFP，并獲得了多項發(fā)現(xiàn)。世界上用的大多數(shù)是錢永健實驗室改造后的變種。改造后的GFP促進了生色基團的折疊，改善了其熒光特性，甚至可以得到紅色、黃綠色、藍色等多種顏色的熒光蛋白，有的可激活、可變色，大大拓寬了GFP研究的領域。他被公認為這方面的先驅(qū)。

錢永健對人們理解GFP及GFP族的化學熒光特性做出了重要的貢獻，他使不同的GFP產(chǎn)生的熒光顏色覆蓋了整個可見光譜，同時他改善了生色基團，增強了GFP的熒光效應，也使熒光的穩(wěn)定性增強。他發(fā)展了GFP，使之成為極有效的研究動態(tài)生命過程的基因標記工具。

5結(jié)束語

科學上一個偶然的發(fā)現(xiàn)往往會引起巨大的科學革命，新工具的出現(xiàn)會使研究取得意想不到的新成果。當年下村修研究了GFP，但他并沒有意識到GFP重要的應用前景。沙爾菲恰恰在自己的實驗研究過程中采用了最新的GFP研究成果，并發(fā)展了GFP的應用領域。而當今世界上用的GFP大多數(shù)是錢永健實驗室改造后的變種。

獲得2008年諾貝爾化學獎的三位科學家在發(fā)現(xiàn)和研究GFP的過程中各有貢獻，而且可以看出他們的研究是一脈相承的。隨著分子生物學理論與技術(shù)的發(fā)展，對GFP研究的進一步深入，GFP在分子生物學領域的應用進一步加強。GFP工程，包括GFP蛋白工程和GFP基因工程，尤其GFP基因作為新型報告基因越來越受到關(guān)注。當然在應用GFP作為研究工具時，也遇到了一些問題。例如將GFP作為選擇標記基因成功構(gòu)建多種表達外源基因的重組質(zhì)粒時發(fā)現(xiàn)一些因素影響著GFP的檢測。此外，在細胞生物學的研究過程中發(fā)現(xiàn)新生GFP通過折疊和加工成為具有活性的形式過程十分緩慢。但隨著生物技術(shù)的發(fā)展，對GFP的基礎理論研究的進一步深入和新型突變體的不斷出現(xiàn)，有理由相信這些問題終將會得到解決，從而使GFP更好地為科學研究服務。

參考文獻：

[1]Baird G. S，Zachatias D. A，Tsien R. Y．Circular permutation and receptor insertion within green fluorescent proteins[J]．Proc Natl Acad Sci USA，1999(20)：11241~11246．

第2篇：綠色化學起源范文

市場營銷學起源于美國，是商品經(jīng)濟發(fā)展到一定高度的產(chǎn)物。這一學科主要的研究方向是市場營銷活動規(guī)律，在促進商品交易、推動經(jīng)濟水平提升方面具有重要作用。市場營銷學教學內(nèi)容所涉及的學科眾多，包含工商管理、經(jīng)濟學等方面的相關(guān)知識，并在市場經(jīng)濟的發(fā)展中，不斷補充各個領域的知識內(nèi)容?，F(xiàn)階段的市場營銷所涉及領域已經(jīng)不再僅僅是商業(yè)領域，而是逐漸向服務業(yè)等領域發(fā)展，其應用也開始向全球范圍擴展。新時期，經(jīng)濟全球化發(fā)展迅速，市場營銷的運用也使我國經(jīng)濟水平得到了進一步提升，并引起了國家和教育界的重視。為滿足市場發(fā)展需求，我國各大院校也積極開設市場營銷學課程，并加強了對市場營銷教學模式的創(chuàng)新，遵循市場發(fā)展規(guī)律，培養(yǎng)應用型的市場營銷人才。

二、新時期市場營銷教學面臨的困境

1.相關(guān)理論不成熟。我國市場營銷學發(fā)展時間較短，大多數(shù)的理論知識都借鑒于西方發(fā)達國家，而這些理論知識往往與我國經(jīng)濟市場實際情況和國家未來經(jīng)濟發(fā)展目標不相符，其中包含我國自身實踐經(jīng)驗較少，導致相關(guān)理論并不成熟，理論體系還不完善，一定程度上影響了新時期我國市場營銷教學的效果。

2.教學內(nèi)容缺乏先進性。目前我國市場營銷教學所用的教材中，多為西方發(fā)達國家的理論知識和案例，學生在學習過程中學習的西方國家的營銷模式，而我國實際市場情況與西方國家理論并不相符，為學生所學知識的實際運用帶來了一定難度。同時，我國經(jīng)濟發(fā)展十分迅速，市場變化較快，而市場營銷教材未能緊緊跟隨市場變化及時調(diào)整，內(nèi)容缺乏先進性。如教材中關(guān)于營銷理論的部分，僅僅是對以往營銷理論的復述，未能添加新時期我國市場上新興的綠色營銷、網(wǎng)絡營銷等相關(guān)理論知識。新時期下，社會對市場營銷人才提出了更高的要求，人才要充分了解新時期的市場新變化、新特點，并在工作中實現(xiàn)市場營銷理論的靈活運用，才能適應時展需求，而教學內(nèi)容先進性的缺乏，不僅大大降低了教學質(zhì)量，也影響了學生日后工作中市場營銷知識的應用效果。

3.教學方法缺乏創(chuàng)新。由于市場營銷教學內(nèi)容復雜，學生很難理解，因此在教學過程中，教師更偏重于教師單一授課的方式，十分注重理論方面的講解。雖然隨著信息技術(shù)的發(fā)展，市場營銷教學中也融入了多媒體技術(shù)等先進信息技術(shù)，但是教學上仍然缺乏創(chuàng)新，僅將多媒體作為傳統(tǒng)教學中板書的替代品，未能實現(xiàn)多媒體技術(shù)的有效運用，再加上學校對市場營銷教學創(chuàng)新方面的重視程度不足，導致教學方法創(chuàng)新投入較少，學生難以被教學內(nèi)容所吸引，教學效果并不明顯。

4.實踐方面的教學缺乏。新時期的市場對市場營銷人才的需求逐漸趨向應用型，而我國的市場營銷教學中，實踐方面的教學卻相對缺乏。受傳統(tǒng)教學理念影響，教師在教學過程中，往往對理論知識的講解更為注重，對學生營銷能力培養(yǎng)并不重視，導致學生在畢業(yè)后，無法靈活運用市場營銷知識，在人才競爭中，專業(yè)優(yōu)勢不明顯，難以適應新時期市場要求。

三、新時期市場營銷教學模式改革思路

1.遵循“以學生為主體”的教學理念。市場營銷學教學的目的是為社會培養(yǎng)專業(yè)的人才，而學生是教學的主體。因此，在新時期的市場營銷教學中，教師應充分尊重學生的主體地位，遵循“以學生為主體”的教學理念。如在教學過程中，注重學生對市場營銷知識的接收情況，為學生提供獨立思考問題的時間，培養(yǎng)學生獨立解決問題的能力。同時注重對學生營銷能力的培養(yǎng)和溝通能力的培養(yǎng)，如在教學過程中，教師盡可能多地講解與實際工作有密切關(guān)連的理論知識，鼓勵學生與教師進行互動，或是提出話題要求學生之間討論，以便于學生在日后的營銷工作中，能夠與同事、客戶、競爭對手等進行有效溝通，實現(xiàn)學生綜合素質(zhì)的提升。

2.實現(xiàn)多樣化課堂教學。傳統(tǒng)的教學方法較為單一，學生很難被教學內(nèi)容所吸引，新時期的市場營銷教學中，教師應創(chuàng)新教學方法，采用多樣化的教學手段，運用案例教學法、情景教學法等教學方法，激發(fā)學生興趣，深化學生對理論知識的理解，同時培養(yǎng)學生的知識應用能力。案例教學法主要是要求教師作為教學活動的引導者，根據(jù)新時期市場變化形式，編寫符合市場情況和學生發(fā)展需求的案例，包括對是營銷環(huán)境的分析、營銷戰(zhàn)略的制定等，使學生能夠根據(jù)案例，詳細、具體的了解理論知識，降低學生的學習難度。如在教學過程中，教師利用模擬案例，向?qū)W生講解營銷環(huán)境相關(guān)知識，通過案例對比，使學生了解不同環(huán)境下企業(yè)的市場營銷情況，并要求學生進行SWOT分析，深入了解理論知識。同時，教師也可以采用分組討論或是辯論的形式要求學生進行案例探討，并利用理論知識加以引導，使學生在探討過程中，能夠?qū)虒W內(nèi)容進行深入理解，提升理論運用能力和對知識的掌握能力。情景教學法主要是通過教師對情境的創(chuàng)設，使學生在不同角色的扮演中，模擬營銷活動，獲得營銷知識水平和營銷能力的提升。在這一教學法的運用中，教師也可以借助先進信息技術(shù)手段，運用營銷模擬軟件進行情景模擬，或是將案例教學與之融合，如PDCA循環(huán)法。在情景教學法中，教師首先需要對教學過程進行全方面的規(guī)劃，合理安排學生任務和角色，如要求學生分別扮演營銷人員、顧客等，要求扮演營銷人員的學生按照顧客需求合理采用體驗營銷、服務營銷等營銷方法，再由扮演顧客的學生分析其中的不足之處和較好的對策，實現(xiàn)雙方的共同進步。這種方法更為生動，符合實際，更容易激發(fā)學生的學習興趣，并為學生提供良好的知識運用機會。

3.增強教學實踐性。市場營銷學具有較強的實踐性和應用性。傳統(tǒng)教學較為注重理論知識的傳授，學生營銷能力較為缺乏，無法適應市場變化，因此，新時期的市場營銷教學應增強教學的實踐性，如加強與企業(yè)的合作，要求在職營銷人員前來授課，或是建立教學實踐基地，定期組織學生前往企業(yè)參觀，體驗營銷工作，增加學生的實踐應用能力，積累營銷經(jīng)驗。同時，積極鼓勵學生到校外實習，為學生安排學習任務，如要求學生完成實習報告、根據(jù)實習經(jīng)驗分析企業(yè)營銷現(xiàn)狀、撰寫營銷策劃書等，使其能夠在與實際工作的接觸中，得到對市場的敏感度的提升和創(chuàng)新能力的增強。

四、結(jié)語