動(dòng)物行為學(xué)研究方法精選(九篇)

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第1篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

【關(guān)鍵詞】藥物和針刺;大鼠行為學(xué);研究進(jìn)展

doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.335 文章編號(hào):1006-1959(2010)-05-1330-02

行為醫(yī)學(xué),顧名思義,可以理解為研究人的行為的醫(yī)學(xué)。具體地說(shuō),是研究與動(dòng)物或者人的行為有關(guān)的一切知識(shí)和技術(shù),從行為入手,來(lái)揭示生物的生命活動(dòng)、健康與疾病的本質(zhì)、規(guī)律,探索診斷、治療、預(yù)防疾病、增進(jìn)健康的行為科學(xué)技術(shù)和方法。有關(guān)行為醫(yī)學(xué)的研究已經(jīng)被廣泛開展,本文僅對(duì)近一年來(lái)以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)使用藥物和針刺等外加刺激來(lái)研究其對(duì)大鼠一系列行為學(xué)治標(biāo)產(chǎn)生影響的研究進(jìn)行簡(jiǎn)要的總結(jié),并對(duì)其給予初步的分析。對(duì)藥物和針刺等外加刺激對(duì)于行為學(xué)研究的前景作以展望。

1.藥物對(duì)大鼠行為學(xué)的影響

張紅巖等[1]使用雌激素作為外加刺激,觀察雌激素對(duì)于偏頭痛模型大鼠發(fā)病時(shí)其行為學(xué)的改變。研究結(jié)果表明:雌激素能減少中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)區(qū)5-羥色胺陽(yáng)性神經(jīng)元的激活,減輕偏頭痛模型大鼠的行為學(xué)改變。張俊慧[2,3]應(yīng)用復(fù)方消疲悅意飲作為刺激,觀察了其對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性疲勞大鼠行為學(xué)的影響。結(jié)果顯示造模組造模后大鼠水平及垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)明顯減少,力竭游泳時(shí)間縮短,鼠尾懸掛不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)(P

行為學(xué)的變化與各個(gè)系統(tǒng)的生理功能密不可分。各個(gè)系統(tǒng)的機(jī)能受到各種因素的影響發(fā)生改變的同時(shí),行為學(xué)也會(huì)發(fā)生變化。各種藥物通過(guò)不同的途徑恢復(fù)機(jī)體的正常功能的同時(shí),對(duì)行為學(xué)治標(biāo)也起到了一定的改善。反過(guò)來(lái),正常的行為學(xué)體系,也就為機(jī)體的正常生理學(xué)穩(wěn)態(tài)提供了基本保證。如果機(jī)體行為學(xué)發(fā)生變化,正常的生理功能也很難保持在良好狀態(tài)。這就為今后各種疾病的預(yù)防和治療提供了新的途徑。

2.針刺對(duì)大鼠行為學(xué)的影響

針刺,作為祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)中的一朵奇葩,數(shù)千年來(lái)一直唄廣泛使用,對(duì)于各個(gè)領(lǐng)域疾病的治療和預(yù)防都起到了不俗的效果。最新研究表明針刺在行為學(xué)研究領(lǐng)域也有良好的療效。

朱書秀[6]采用Meyne核注射微量A131-40制備動(dòng)物模型,選取百會(huì)、太溪、足三里電針治療,以Morris水迷宮評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,免疫組化法觀察海馬區(qū)IL一1p、TNF-Ot的表達(dá)。觀察電針對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬區(qū)IL一113、TNF-Ot的影響,探討了電針治療的作用機(jī)理。結(jié)果表明模型組海馬區(qū)IL一1p、TNF-Ot的量增加。學(xué)習(xí)記憶能力減退。經(jīng)電針治療后,IL一113、TNF-Ot的量較模型組減少,學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)。電針可顯著改變AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,降低海馬IL一113、TNF-Ot的含量。羅文舒[7]將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、西藥組、針刺1組和針刺2組,采用長(zhǎng)期不可預(yù)見性中等強(qiáng)度應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)造成大鼠抑郁癥模型,分別測(cè)定大鼠糖水消耗量以及行為學(xué)的改變。借以觀察針刺督脈的基礎(chǔ)上加用足太陽(yáng)經(jīng)穴對(duì)抑郁癥大鼠的療效,結(jié)果與模型組相比,針刺督脈和足太陽(yáng)經(jīng)治療組的糖水消耗量增加,行為學(xué)評(píng)分升高。說(shuō)明針刺督詠和足太陽(yáng)經(jīng)可以改變抑郁模型大鼠行為學(xué)異常,在治療抑郁癥方面有一定優(yōu)勢(shì)。李麗萍[8]采用針刺百會(huì)、太沖穴對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)變化進(jìn)行了觀察研究。結(jié)果顯示造模21天后各組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)得分均較正常組明顯減少,體重增加減慢,糖水消耗量降低;而針刺治療組與阿米替林組均可顯著增加大鼠水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)得分,使體重增加,糖水消耗量增加,改善大鼠的抑郁狀態(tài),各治療組間差異不顯著。說(shuō)明針刺可以改善慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的抑郁狀態(tài)。倪麗偉[9,10]使用Cnstina Tassore報(bào)道的方法并加以改進(jìn)復(fù)制偏頭痛大鼠模型,造模成功后分別給予相應(yīng)針刺或藥物處理,采用時(shí)間分段計(jì)數(shù)法觀察造模后大鼠的行為癥狀變化。結(jié)果顯示針刺和尤舒均能顯著改善偏頭痛模型大鼠的行為學(xué)癥狀且療效相似。說(shuō)明針刺可顯著改善偏頭痛模型大鼠的行為學(xué)癥狀。

以上報(bào)道可以看出,針刺穴位可以對(duì)很多疾病起到改善作用。針刺通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的功能,能夠同時(shí)改善機(jī)體行為學(xué)的變化,進(jìn)而進(jìn)一步緩解機(jī)體功能。針刺作為一種損傷小、副作用小的方法,避免了由于長(zhǎng)期藥物治療的副作用,可以作為今后行為學(xué)治療的重要方法。

3.研究展望

世界衛(wèi)生組織關(guān)于健康的定義是:健康不僅指一個(gè)人沒有疾病或虛弱現(xiàn)象,而是指一個(gè)人生理上、心理上和社會(huì)上的完好狀態(tài)。這就是現(xiàn)代關(guān)于健康的較為完整的科學(xué)概念?，F(xiàn)代健康的含義是多元的、廣泛的,包括生理、心理和社會(huì)適應(yīng)性3個(gè)方面,其中社會(huì)適應(yīng)性歸根結(jié)底取決于生理和心理的素質(zhì)狀況。心理健康是身體健康的精神支柱,身體健康又是心理健康的物質(zhì)基礎(chǔ)。良好的情緒狀態(tài)可以使生理功能處于最佳狀態(tài),反之則會(huì)降低或破壞某種功能而引起疾病。身體狀況的改變可能帶來(lái)相應(yīng)的心理問(wèn)題,生理上的缺陷、疾病,特別是痼疾,往往會(huì)使人產(chǎn)生煩惱、焦躁、憂慮、抑郁等不良情緒,導(dǎo)致各種不正常的心理狀態(tài)。作為身心統(tǒng)一體的人,身體和心理是緊密依存的兩個(gè)方面。而行為學(xué)正式研究這一領(lǐng)域的學(xué)科,我們通過(guò)藥物、針刺,以及其他各種療法的根本目的也就是改善機(jī)體的功能,說(shuō)到底就是改善行為學(xué)。所以,對(duì)于行為學(xué)的研究還只是剛剛開啟了大門,今后的研究還有待于進(jìn)一步的開拓新方法,拓展新領(lǐng)域。相信隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,將會(huì)有更多的研究成果被報(bào)道,更好的為人類真正意義的健康服務(wù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張紅巖.雌激素對(duì)于偏頭痛大鼠行為學(xué)改變及中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)5-HT表達(dá)的影響.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)[J],2008,34(1):131-134.

[2] 張俊慧,胡兵,沈思鈺.復(fù)方消疲悅意飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性疲勞大鼠行為學(xué)的影響[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2008,21(8):817-819.

[3] 劉雨桃,石遠(yuǎn)凱,孫燕.慢性疲勞綜合征[J].癌癥進(jìn)展,2007,5(2):209-214.

[4] 劉學(xué),李瑞香.凝血酶對(duì)大鼠腦出血后腦水腫和行為學(xué)變化的影響[J].中國(guó)校醫(yī),2008,(22)4:405-407.

[5] 李滿生.壽聰膠囊對(duì)老年癡呆模型大鼠行為學(xué)及過(guò)氧化氫酶,單氨氧化酶的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息,2008,(15)10:34-35.

[6] 朱書秀.電針對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠行為學(xué)及海馬區(qū)IL一1p、TNF-OL的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,(31)4:55-57.

[7] 羅文舒.針刺督脈和足太陽(yáng)經(jīng)對(duì)抑郁模型大鼠行為學(xué)的改善作用[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,(14)6:1-3.

[8] 李麗萍.針刺對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響[J].針灸臨床雜志,2008,(24)6:50-52.

第2篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

通過(guò)這次的《組織行為學(xué)》講座，我了解到組織行為學(xué)是研究組織中人的行為與心理規(guī)律的一門科學(xué)，其實(shí)更是一直與人溝通與人交流的一種方式和方法。它是行為科學(xué)的一個(gè)分支，隨著社會(huì)的發(fā)展，尤其是經(jīng)濟(jì)的發(fā)展促使了企業(yè)和組織的發(fā)展進(jìn)步，組織行為學(xué)越來(lái)越受到人們的重視?！皽贤ǎ瑥男拈_始”為主題的講座，令深深感受到組織行為學(xué)的魅力，建立有效溝通，完善工作方法。

通過(guò)課程，使我更加客觀的看待每個(gè)人自身的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，然而不是所有的人在任何時(shí)候都會(huì)揚(yáng)長(zhǎng)避短、知己克己、取長(zhǎng)補(bǔ)短，在生活、工作中，我們有可能不了解自己，不了解他人，不了解某個(gè)場(chǎng)合的某種情況，所以會(huì)有生活、工作中的種種不順心或者不愉快，小矛盾、大干戈油然而生。而事后，我們靜下來(lái)的時(shí)候也許還會(huì)抱怨，也許會(huì)反思，自己的不對(duì)或他人的不是。這其中就涉及到組織行為學(xué)中許多觀點(diǎn)。在現(xiàn)實(shí)的工作群體中，我們首先要進(jìn)行反思自身問(wèn)題，善待他人，他人也會(huì)善待自己。我們每個(gè)個(gè)體是相互交融在一起的，無(wú)論是家庭的一員還是作為團(tuán)隊(duì)的一員，我們要處理好團(tuán)體與個(gè)體關(guān)系，切同存異，實(shí)現(xiàn)共同進(jìn)步。

人是理性動(dòng)物，也更是感情動(dòng)物。很多時(shí)候人做事情都是會(huì)被感情所左右的，要想通過(guò)溝通達(dá)成意見的一致就要學(xué)會(huì)傾聽別人的想法，也要站在別人的立場(chǎng)上去思考問(wèn)題。心存他人，尊重他人，這樣才可以得到他人的尊重和認(rèn)可。當(dāng)做一件事情或完成一個(gè)任務(wù)，各部門或各人之間有分歧的時(shí)候，需要去積極溝通和化解分歧，但是溝通并不等于只去表達(dá)你自己的認(rèn)知和看法，以得到別人的贊同，而是要用一種尊重的態(tài)度去聆聽各部門或每個(gè)人的觀點(diǎn)，然后結(jié)合自己的想法找出分歧之處，，用最好的方式去向?qū)Ψ奖磉_(dá)你的觀點(diǎn)和看法，最后征求對(duì)方的意見已達(dá)到最后的一致。

最后要感謝王延駿和李可永等教授和老師辛苦授課和講解，也衷心的感謝新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)精心為我們組織了一次“溝通，從現(xiàn)在開始”的為主題的講座，讓我們更深入了解了組織行為學(xué)的魅力和精髓所在。

第3篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

[關(guān)鍵詞] 嗅覺; 嗅覺障礙; 評(píng)估方法; 動(dòng)物實(shí)驗(yàn); 文獻(xiàn)綜述

[中圖分類號(hào)] R339.12 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1671-7562(2010)04-0434-04

doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2010.04.041

嗅覺是人體原始的感覺功能之一,它同視覺、聽覺一樣,是人體捕獲外界信息的特殊裝置。嗅覺還可以通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響人的情緒、調(diào)節(jié)生命周期。嗅覺障礙患者對(duì)周圍的事物不感興趣,反應(yīng)平淡,生活質(zhì)量下降,更可以造成精神上的壓抑或憂郁。王鴻等[1]報(bào)道用T&T測(cè)試法測(cè)試了1 035例慢性鼻竇炎鼻息肉患者,86.3%的患者有嗅覺功能障礙,與患者的主訴有極顯著的差異,說(shuō)明嗅覺功能改變沒有受到患者的注意。近幾年隨著人們對(duì)生活質(zhì)量要求的提高,對(duì)嗅覺障礙的關(guān)注程度有了很大的提高。

嗅覺評(píng)估不僅僅是要判斷嗅覺功能是否正常,還需要進(jìn)一步判斷嗅覺障礙的程度、性質(zhì)、部位等因素,如果能提示病因以及預(yù)后則更有臨床、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的價(jià)值。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中關(guān)于嗅覺功能的研究已經(jīng)有了較長(zhǎng)的歷史,出現(xiàn)了多種實(shí)驗(yàn)方法,但是目前為止還沒有一個(gè)全面、客觀、高特異性的金標(biāo)準(zhǔn)方法出現(xiàn),本文就目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的常見的嗅覺評(píng)估方法進(jìn)行一個(gè)概括性的介紹。

1 行為學(xué)方法

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)的最大區(qū)別在于動(dòng)物無(wú)法準(zhǔn)確地和實(shí)驗(yàn)者交流,所以行為學(xué)方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中就顯得極為重要。嗅敏動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力、尋食能力等與嗅覺有很高的相關(guān)性,可以觀察、記錄其行為學(xué)的改變,從而判斷其嗅覺功能的變化。目前報(bào)道較多的可以評(píng)估嗅覺功能的行為學(xué)方法有以下幾種。

1.1 埋藏食物小球?qū)嶒?yàn)(buried food pellet test,BFPT)

BFPT是目前最常用于檢測(cè)動(dòng)物嗅覺功能的行為學(xué)檢測(cè)方法[2]。目前比較通用的方法由Nathan等[3]于2004年報(bào)道,他的實(shí)驗(yàn)中使用找尋食物小球等待時(shí)間作為數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,即從小鼠被隨機(jī)放置于盒子中開始,到小鼠揭開食物小球并用它的前爪或牙齒抓住食物小球的時(shí)間,如果5 min(300 s)內(nèi)小鼠未找到食物小球,即被移走。林靜等[4]以300 s(5次測(cè)試的平均值)內(nèi)未找到食物小球作為判定小鼠存在嗅覺功能障礙的標(biāo)準(zhǔn),并認(rèn)為以300 s作為分組標(biāo)準(zhǔn)是合理的。

1.2 嗅覺測(cè)量?jī)x

Slotnick等[5]利用行為學(xué)原理設(shè)計(jì)出一種用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的嗅覺測(cè)量?jī)x,可以通過(guò)改變氣味的濃度后觀察動(dòng)物的行為學(xué)變化來(lái)評(píng)價(jià)其嗅覺。該系統(tǒng)經(jīng)眾多實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)動(dòng)物嗅覺的檢測(cè)是有效的[6],因操作方便且可進(jìn)行多種設(shè)計(jì),此方法被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物嗅覺功能的評(píng)估。

1.3 雙瓶實(shí)驗(yàn)

有研究證實(shí)小鼠、大鼠在分辨某些物質(zhì)的時(shí)候主要是依賴于嗅覺而非味覺,例如鹽酸、鹽酸奎寧(quinine HCl, QHCl)等有一定揮發(fā)性的物質(zhì) [7]。因嗅覺障礙時(shí)動(dòng)物分辨飲用水和實(shí)驗(yàn)溶液的能力下降,通過(guò)兩種溶液被動(dòng)物飲用的程度可以評(píng)估動(dòng)物嗅覺障礙的程度。

1.4 幼鼠超聲發(fā)聲實(shí)驗(yàn)

新生小鼠嗅覺的產(chǎn)生比其他的感覺要早。新生小鼠嗅到成年鼠窩的氣味時(shí)可發(fā)出一種超聲作為回應(yīng),檢測(cè)這種超聲的出現(xiàn)與否可以判斷其嗅覺功能是否正常[8]。Lemasson等[8]用3-甲基吲哚來(lái)破壞新生小鼠的嗅上皮,結(jié)果成功地證實(shí)了該檢測(cè)方法的可行性。而且在該實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)由于被破壞嗅覺的小鼠無(wú)法正確識(shí)別,其生存率大大降低,證明了嗅覺對(duì)新生小鼠有極其重要的作用。

行為學(xué)方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的嗅覺評(píng)估中有很重要的作用,歷史悠久、技術(shù)成熟,實(shí)驗(yàn)方法較為簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)裝置花費(fèi)較少,對(duì)嗅覺功能的初步評(píng)估價(jià)值較為肯定(尤其是埋藏食物小球?qū)嶒?yàn)和Slotnick的嗅覺測(cè)量?jī)x),可行性及可重復(fù)性較高。需要注意的是本類實(shí)驗(yàn)受個(gè)體差異影響較大,實(shí)驗(yàn)前應(yīng)經(jīng)預(yù)評(píng)估剔除先天差異比較大的個(gè)體,而且樣本量不宜過(guò)小,有時(shí)候還需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)先的訓(xùn)練。為保證實(shí)驗(yàn)的客觀性,需要很好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與控制,有時(shí)連晝夜節(jié)律等變化的影響都需要考慮在內(nèi)。行為學(xué)測(cè)試結(jié)果對(duì)嗅覺功能評(píng)估只是一個(gè)綜合的結(jié)果,對(duì)嗅覺障礙程度、部位等的判斷較差,如果能結(jié)合嗅覺誘發(fā)電位等客觀檢查可以做到更加客觀、可信。在過(guò)去的實(shí)驗(yàn)中行為學(xué)測(cè)試往往與組織學(xué)檢查相結(jié)合,既增加了實(shí)驗(yàn)的客觀性,又為進(jìn)一步研究嗅覺產(chǎn)生機(jī)制或嗅覺障礙的原因提供了基礎(chǔ)。

2 客觀評(píng)估方法

嗅覺的感受、傳導(dǎo)是個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程,氣味分子通過(guò)鼻腔到達(dá)嗅黏膜后被其表面的黏液所吸附,進(jìn)而在黏膜層中擴(kuò)散,到達(dá)嗅細(xì)胞。達(dá)到閾濃度的氣味分子可刺激嗅細(xì)胞產(chǎn)生嗅覺電位,這是其感受過(guò)程。產(chǎn)生的嗅覺電位通過(guò)嗅神經(jīng)穿過(guò)篩骨篩板,到達(dá)嗅球,其內(nèi)有第2級(jí)神經(jīng)元,再通過(guò)嗅束傳導(dǎo)至初級(jí)嗅皮質(zhì)及皮質(zhì)內(nèi)側(cè)核,而后至海馬回的內(nèi)嗅皮層即次級(jí)嗅皮層,神經(jīng)沖動(dòng)引起大腦皮層的激活才能最后引發(fā)嗅覺。嗅覺功能的客觀評(píng)估方法包括了對(duì)嗅覺感受、傳導(dǎo)通路上各種指標(biāo),例如影像學(xué)、電生理學(xué)、組織學(xué)等的測(cè)量。目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中使用較多的及可能有較大發(fā)展前景的客觀評(píng)估方法包括以下幾類。

2.1 組織學(xué)方法

這里的組織學(xué)是泛指解剖取組織后進(jìn)行的所有檢查,包括大體解剖學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等諸多學(xué)科的檢查方法。嗅覺系統(tǒng)的改變既可以由病變本身引起也可以是因?yàn)樾嵊X障礙后的退行性變引起。組織檢查比結(jié)構(gòu)影像檢查更有評(píng)估價(jià)值,因其可以更好地提示病因,也利于更好地研究嗅覺通路和嗅覺障礙產(chǎn)生的機(jī)制。目前組織學(xué)方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中有很廣泛的應(yīng)用,從部位選擇上看整個(gè)嗅覺傳導(dǎo)通路包括從嗅黏膜直到海馬回的內(nèi)嗅皮層都有報(bào)道,從實(shí)驗(yàn)方法上看更是復(fù)雜多樣,最常用的幾種方法有如下幾種。

2.1.1 病理學(xué)檢查

這是早期免疫學(xué)技術(shù)及分子生物學(xué)技術(shù)還不是很發(fā)達(dá)時(shí)常用的檢查手段,在早期嗅覺研究中有較多的應(yīng)用,在嗅覺障礙的動(dòng)物標(biāo)本上可以看到細(xì)胞凋亡、空泡等變化,雖然特異性較差,但是也能提供宏觀的信息,現(xiàn)在常常和其他檢查方法一起使用,例如在陳志宏等的實(shí)驗(yàn)中在進(jìn)行其他檢查之前使用了HE染色方法檢查了模型小鼠的嗅上皮,發(fā)現(xiàn)其嗅上皮變薄,其中的感覺神經(jīng)元的細(xì)胞核層數(shù)變少[9]。

2.1.2 蛋白及核酸表達(dá)的檢查

對(duì)相應(yīng)組織中某些標(biāo)志性蛋白及核酸的檢查可以間接地反映嗅覺功能及提示嗅覺障礙的原因。例如用免疫組化方法檢查嗅覺通路中嗅標(biāo)記蛋白(olfactory marker protein, OMP)、酪氨酸羥(tyrosine hybroxylas, TH)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)、c-Fos蛋白等標(biāo)記物在許多文獻(xiàn)中都有記載。Buron等[10]在丙酮吸入誘導(dǎo)的嗅覺障礙實(shí)驗(yàn)中使用了嗅上皮組織的OMP及增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)作為觀察指標(biāo),發(fā)現(xiàn)丙酮對(duì)于嗅上皮的損傷是有選擇性的。有學(xué)者使用多巴胺及細(xì)小白蛋白作為標(biāo)記物進(jìn)行免疫組化檢查,發(fā)現(xiàn)失嗅動(dòng)物模型的嗅球中含多巴胺及細(xì)小白蛋白的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量明顯減少,認(rèn)為通過(guò)該失嗅動(dòng)物模型可以對(duì)嗅球萎縮進(jìn)行定量描述,提示多巴胺及細(xì)小白蛋白在嗅球中的表達(dá)對(duì)于失嗅的作用[11]。c-Fos蛋白可反映大腦組織活動(dòng)程度,對(duì)c-Fos蛋白的觀察可以一定程度上起到功能磁共振的作用[12]。

2.2 電生理學(xué)方法

2.2.1 嗅電圖

將電極直接置于嗅區(qū)黏膜,當(dāng)其接受嗅素刺激時(shí)記錄到的一種慢相負(fù)性電位變化稱為嗅電圖,目前普遍認(rèn)為它是單個(gè)嗅細(xì)胞電位變化的總和,嗅電圖已經(jīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)[13]。嗅電圖最大的缺陷在于雖然其對(duì)嗅黏膜損傷引起的嗅覺障礙有較大的意義,但是對(duì)于黏膜后傳導(dǎo)通路以及嗅球、海馬回等中樞病變導(dǎo)致的嗅覺障礙沒有什么評(píng)估價(jià)值。

2.2.2 嗅覺腦電圖

嗅覺誘發(fā)腦電圖是指在給予嗅刺激時(shí),實(shí)驗(yàn)對(duì)象的腦電圖可發(fā)生變化,Hirano等[14]用狗做實(shí)驗(yàn)時(shí)成功地獲得了該變化,在他的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)腦電圖的快波對(duì)嗅覺功能的意義較大。嗅覺誘發(fā)腦電圖又相繼在大鼠等其他動(dòng)物身上得到了驗(yàn)證[15]。嗅覺腦電圖產(chǎn)生的機(jī)制還不是很明確,而且其特異性不是很高,故目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中研究、應(yīng)用的較少。

2.2.3 嗅覺誘發(fā)電位

又稱為嗅覺事件相關(guān)電位(olfactory event-related potentials,OERP),最早是用電刺激動(dòng)物嗅黏膜時(shí)在頭皮特定部位記錄到穩(wěn)定的腦電位的變化,該方法經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的發(fā)展后認(rèn)為其和自然嗅覺之間有一定的差距,故逐漸被化學(xué)氣味誘導(dǎo)的嗅覺誘發(fā)電位所取代,目前使用的已經(jīng)比較少。早期化學(xué)氣味刺激除了有嗅覺刺激外還常常伴有物理刺激及對(duì)三叉神經(jīng)的化學(xué)刺激,這些非嗅刺激干擾了正常嗅覺誘發(fā)電位的獲得。隨著僅能興奮嗅覺系統(tǒng)而不興奮三叉神經(jīng)系統(tǒng)的化學(xué)物質(zhì)如香草醛等,以及Kobal式嗅覺刺激器的出現(xiàn),嗅覺誘發(fā)電位研究成為嗅覺研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。嗅覺誘發(fā)電位儀至少包括嗅覺刺激器及腦電采集系統(tǒng),測(cè)量時(shí)需要在電聲屏蔽室進(jìn)行,且需要給予一定的白噪聲掩蔽刺激探頭釋放刺激時(shí)產(chǎn)生的干擾噪聲。目前動(dòng)物嗅覺誘發(fā)電位各波的具體來(lái)源以及與疾病間的相互關(guān)系還不清楚,嗅覺誘發(fā)電位的出現(xiàn)是否意味著動(dòng)物確實(shí)產(chǎn)生了嗅覺還不能肯定,所以用來(lái)證明嗅覺傳導(dǎo)通路是否暢通比較可行[16],而暫不能用于嗅性疾病的定位、定性診斷。嗅覺誘發(fā)電位應(yīng)該是最可能成為動(dòng)物嗅覺評(píng)估客觀標(biāo)準(zhǔn)的檢查方法。

3 影像學(xué)方法

3.1 嗅覺系統(tǒng)結(jié)構(gòu)影像檢查

有研究證明嗅球及嗅束等神經(jīng)結(jié)構(gòu)的生長(zhǎng)與周圍神經(jīng)沖動(dòng)的輸入有關(guān)[17],所以嗅覺障礙后嗅覺系統(tǒng)各部位可有一定的不依賴于年齡的結(jié)構(gòu)改變,通過(guò)磁共振影像檢查可以發(fā)現(xiàn)這些改變,例如嗅球體積變小、嗅溝缺失或變淺、嗅束缺失等現(xiàn)象,從而間接評(píng)價(jià)嗅覺功能。

3.2 嗅覺系統(tǒng)功能影像檢查

這是目前嗅覺研究的熱點(diǎn)方向之一,主要技術(shù)有功能性磁共振成像(fMRI)、PET成像和腦信號(hào)的光學(xué)成像等。

3.2.1 功能磁共振檢查

功能磁共振檢查技術(shù)有很多,用于嗅覺系統(tǒng)功能的fMRI技術(shù)主要是(blood level dependent fMRI, BOLD fMRI),當(dāng)氧合血紅蛋白的比例增加時(shí)或去氧血紅蛋白含量減少時(shí),T2信號(hào)縮短效應(yīng)減弱,表現(xiàn)為MR信號(hào)增強(qiáng)。嗅覺功能成像既能反映血流的變化,也能反映神經(jīng)元活動(dòng)的代謝變化,近些年在研究神經(jīng)功能方面發(fā)揮著巨大的作用,特別是fMRI無(wú)放射暴露,可反復(fù)測(cè)試,且時(shí)間、空間分辨率要優(yōu)于PET成像,故是目前嗅覺功能成像的主要方法。在大鼠實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí),7 T的fMRI能夠顯示氣味刺激后大鼠嗅球的活化[11]。其空間分辨率很高,對(duì)于研究嗅覺相關(guān)皮層的定位、嗅覺功能障礙情況下嗅覺相關(guān)皮層反應(yīng)的變化等有極大的應(yīng)用價(jià)值。有學(xué)者擬通過(guò)信息技術(shù)將嚙齒類動(dòng)物嗅球的激活圖像編成二維的氣味圖(OdorMap,OM)及氣味圖數(shù)據(jù)庫(kù)(OdorMap Database,OMDB)以利于嗅覺工作者對(duì)嗅覺系統(tǒng)的研究[18]。功能磁共振應(yīng)用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的嗅覺評(píng)估中需要注意的是:首先動(dòng)物是不能配合磁共振檢查的,故需要在麻醉下進(jìn)行;其次磁共振是強(qiáng)磁場(chǎng)環(huán)境,故嗅覺刺激裝置不能由金屬制成。

3.2.2 腦功能光學(xué)成像

腦功能光學(xué)成像是近年來(lái)神經(jīng)外科的熱點(diǎn)研究方向,目前主要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)有激光散斑襯比成像和內(nèi)源信號(hào)光學(xué)成像。而應(yīng)用于嗅覺功能檢查的主要是內(nèi)源信號(hào)光學(xué)成像,這里所指的內(nèi)源信號(hào),并不是神經(jīng)元所表現(xiàn)出來(lái)的電信號(hào),而是指由神經(jīng)元活動(dòng)所引起的有關(guān)物質(zhì)組分、運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的改變而導(dǎo)致其光學(xué)特性的變化,在與某些特定波長(zhǎng)的光量子相互作用后,得到的包含了這些特性的光信號(hào),包括:血紅蛋白信號(hào)、氧合血紅蛋白信號(hào)、光散射特征信號(hào)等[19-20]。許多生理性過(guò)程如血紅蛋白氧合度、細(xì)胞色素的氧合狀態(tài)、神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元腫脹、功能性血流量改變等變化,都會(huì)影響到組織光反射特性的改變。通過(guò)探測(cè)反射光的變化量,就可以獲得這種特異性的內(nèi)源光學(xué)信號(hào)。內(nèi)源光學(xué)信號(hào)成像在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已用于多種腦功能皮層功能的檢查,比如視覺(貓、小鼠等)、軀體感覺皮層(大鼠、貓、松鼠猴等)、聽覺皮層(南美栗鼠、貓、雪貂等)。Bathellier等[21]在實(shí)驗(yàn)中使用了內(nèi)源光學(xué)信號(hào)原理和突觸素?zé)晒鈽?biāo)記兩種方法分別獲得了香芹酮、苯甲酸甲酯刺激后大鼠嗅球的激活情況,在內(nèi)源光學(xué)信號(hào)成像下,激活的嗅小球反光率下降,呈相對(duì)的冷色調(diào),而在熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中激活區(qū)域熒光反應(yīng)較強(qiáng)。雖然內(nèi)源光學(xué)信號(hào)成像的時(shí)空分辨率都較高,但是其穿透腦皮層的能力受限(大約數(shù)百微米),所以對(duì)于深層腦組織的觀察就沒有什么效果了。由于內(nèi)源光學(xué)信號(hào)的確切生理來(lái)源至今沒有定論,所以為了闡述內(nèi)源光信號(hào)對(duì)應(yīng)的生理意義及其與神經(jīng)元電活動(dòng)的關(guān)系,還需要與其他方法進(jìn)行對(duì)比研究。

從其他感覺的評(píng)估方法來(lái)看,功能磁共振和誘發(fā)電位是研究的發(fā)展方向,但目前嗅覺產(chǎn)生、傳導(dǎo)機(jī)制尚未完全明了,相關(guān)檢查技術(shù)尚處于起步階段,還需要進(jìn)行大量的研究。目前的嗅覺研究可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求及實(shí)驗(yàn)條件選擇不同的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)方法的組合。嗅覺誘發(fā)電位及功能磁共振檢查由于其初期投入較大,對(duì)硬件及技術(shù)條件要求較高,開展難度較大,在國(guó)內(nèi)只有少數(shù)醫(yī)院在從事這方面的實(shí)驗(yàn)。行為學(xué)方法操作簡(jiǎn)單,技術(shù)成熟,效果肯定,有很強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值。組織學(xué)方法對(duì)于機(jī)理的研究十分重要,并且隨著對(duì)嗅覺認(rèn)知的加深,越來(lái)越多的標(biāo)記物被發(fā)現(xiàn),評(píng)估方法也越來(lái)越豐富。如果可以出現(xiàn)一種簡(jiǎn)單易行的嗅覺評(píng)估方法,那么可以極大地促進(jìn)嗅覺的研究。

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第4篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

1鳥類腦大小對(duì)覓食創(chuàng)新的影響

很多動(dòng)物行為學(xué)家都認(rèn)為，在動(dòng)物前腦大小與覓食創(chuàng)新之間存在著神經(jīng)生物學(xué)聯(lián)系［3］，因?yàn)榍澳X與動(dòng)物行為的可塑性密切相關(guān)。通常是前腦越大，覓食創(chuàng)新能力越強(qiáng)。根據(jù)這一基本原理，Lefebvre等人（2004）［4］研究了北美洲和大不列顛群島上各種鳥的前腦大小與覓食創(chuàng)新之間的關(guān)系。所謂覓食創(chuàng)新是指能取食和利用新的食物種類或采用新的覓食技巧。為此，研究人員利用了9種鳥類學(xué)雜志所提供的資料，收集了322種覓食創(chuàng)新（或覓食新技能），其中126種覓食新技能屬于大不列顛群島上的鳥類，192種屬于北美洲的鳥類（表1）。這些覓食創(chuàng)新包括銀鷗捕到小嚙齒動(dòng)物后將它們?nèi)拥綆r石上摔死或沉入水中淹死；也包括普通烏鴉利用過(guò)路的小汽車把堅(jiān)果壓碎，這相當(dāng)于把小汽車當(dāng)鉗子使用［5］Lefebvre等人曾計(jì)算過(guò)這些創(chuàng)新行為在不同類群（目鳥類中的分布情況，同時(shí)還分析過(guò)不同類群鳥類在大不列顛和北美洲的常見程度或稀有程度。在掌握各種鳥類覓食創(chuàng)新行為的同時(shí)，研究人員還獲得了這些鳥類前腦相對(duì)大小的資料［6］。無(wú)論是在大不列顛群島還是北美洲，鳥類前腦的大小都與覓食創(chuàng)新密切相關(guān)。凡是前腦比較大的鳥類，其覓食創(chuàng)新行為也更為常見。雖然有很多覓食創(chuàng)新都是在一次觀察中發(fā)現(xiàn)的，但對(duì)多達(dá)322例覓食創(chuàng)新行為的大規(guī)模分析中，發(fā)現(xiàn)在前腦大小與覓食創(chuàng)新之間確實(shí)存在著直接的關(guān)系，這表明，這是動(dòng)物行為學(xué)中一個(gè)重要而有意義的研究新領(lǐng)域。Sol等人（2006，2007）［7－8］曾研究過(guò)鳥類腦子較大是否對(duì)其生存和生殖有利的問(wèn)題。長(zhǎng)期以來(lái)人們一直未經(jīng)驗(yàn)證地認(rèn)為，腦相對(duì)較大有助于提高動(dòng)物的適合度（fitness），特別是當(dāng)種群進(jìn)入一個(gè)新的陌生環(huán)境的時(shí)候，這時(shí)覓食創(chuàng)新對(duì)動(dòng)物的生存和生殖就特別重要［9－10］。Sol等人曾研究了646例物種被引入新環(huán)境的實(shí)驗(yàn)（涉及196種鳥），其中大多是研究人員將一種鳥引入一個(gè)島嶼或原分布區(qū)以外的地方［11－12］。研究人員還收集了196種鳥有關(guān)腦大小的資料，并根據(jù)鳥大腦就大，鳥小腦就小的基本事實(shí)作了相應(yīng)的校正，最終發(fā)現(xiàn)，在鳥的腦大小和能在新環(huán)境中成功定居之間存在著正相關(guān)關(guān)系，這是因?yàn)槟X子較大的鳥類具有更強(qiáng)的覓食創(chuàng)新能力，這種能力可大大提高鳥類的食物攝取率，從而能提高鳥類的生存機(jī)會(huì)和生殖機(jī)會(huì)。

2動(dòng)物有計(jì)劃未來(lái)的能力嗎？

學(xué)習(xí)是動(dòng)物借助于個(gè)體生活經(jīng)歷和經(jīng)驗(yàn)使自身行為發(fā)生適應(yīng)性變化的過(guò)程，從這一學(xué)習(xí)的定義可以看出，任何當(dāng)前發(fā)生的行為都是與此前的生活經(jīng)歷和經(jīng)驗(yàn)相關(guān)聯(lián)的。如果動(dòng)物也能像我們?nèi)祟惸菢幽軌蚋鶕?jù)先前的經(jīng)歷和經(jīng)驗(yàn)預(yù)測(cè)和計(jì)劃未來(lái)的話，那一定會(huì)大大增加自身的存活機(jī)會(huì)和適合度。目前屬于這方面的研究還很少，因?yàn)殚L(zhǎng)期以來(lái)人們一直認(rèn)為計(jì)劃未來(lái)是人類獨(dú)有的能力，這也是人類與所有其他動(dòng)物存在的一個(gè)主要差異［13］。然而隨著時(shí)間的推移已變得越來(lái)越清楚的是，動(dòng)物也具有一些一度被認(rèn)為是人類所獨(dú)有的行為，例如使用工具和純粹是有利于未來(lái)生存的行為，這促使動(dòng)物行為學(xué)家開始對(duì)動(dòng)物有沒有計(jì)劃未來(lái)的能力產(chǎn)生興趣并進(jìn)行研究。動(dòng)物行為學(xué)家認(rèn)為，要想確認(rèn)計(jì)劃未來(lái)的行為必須滿足兩個(gè)條件：首先該行為必須是創(chuàng)新的或新穎的，它不是某些本能行為的表現(xiàn)，例如：遷飛行為有很多本能成分，雖然顯示有一定的“計(jì)劃性”，但不是我們要求的那樣；其次，計(jì)劃未來(lái)的行為不一定與動(dòng)物當(dāng)前的動(dòng)機(jī)狀態(tài)相關(guān)，而必定會(huì)涉及到未來(lái)某一時(shí)刻的動(dòng)機(jī)狀態(tài)。下面介紹一個(gè)最新的關(guān)于動(dòng)物計(jì)劃未來(lái)的研究實(shí)例，這就是松鴉為了計(jì)劃未來(lái)而改變其覓食行為的現(xiàn)象［14］。松鴉是進(jìn)行這類研究的一個(gè)極好的物種，因?yàn)樗哂辛钊穗y以置信的記憶力，它生活在高海拔地區(qū)，常常要為未來(lái)貯藏大量的食物，每個(gè)個(gè)體每年大約要貯藏3萬(wàn)多粒種子，冬季和春季幾乎完全依賴秋季貯藏的種子為生。松鴉不僅能記住它們貯藏食物的地點(diǎn)，而且還十分注意當(dāng)它們?cè)谫A藏食物時(shí)誰(shuí)在觀察它們。在這種情況下，它們此后會(huì)把食物重新挖出來(lái)并進(jìn)行深埋，以防這些食物被偷食［15］。Raby等人（2007）［16］利用一個(gè)簡(jiǎn)單而巧妙的實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)了松鴉是否具有計(jì)劃未來(lái)的能力。研究人員為松鴉提供兩個(gè)隔室，其中一個(gè)隔室中含有食物松子，另一個(gè)隔室中沒有食物，每天早晨松鴉只能見到和進(jìn)入一個(gè)隔室，在連續(xù)6天的實(shí)驗(yàn)期間，兩個(gè)隔室是交替出現(xiàn)的，各出現(xiàn)3次。每天實(shí)驗(yàn)的前一天晚上，不為松鴉提供任何食物，因此它們?cè)谝姷礁羰移陂g是處于饑餓狀態(tài)。6天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每天天黑前兩小時(shí)，只為松鴉提供一點(diǎn)點(diǎn)食物，使它們得不到可供貯藏的種子。此后再為它們提供一個(gè)備有大量松子的場(chǎng)所，并提供兩個(gè)以前曾多次拜訪過(guò)的隔室，但現(xiàn)在每個(gè)隔室內(nèi)又安裝了一個(gè)能貯藏食物的“貯食杯”，使鳥類在天黑前可以把食物貯藏起來(lái)，如果它們?cè)敢膺@樣做的話。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在兩個(gè)隔室中它們總是在其中的一個(gè)隔室中貯藏更多的食物（松子），而這個(gè)隔室是它們以前拜訪過(guò)的那個(gè)不含有食物的隔室，這說(shuō)明在越是缺乏食物的環(huán)境中，它們貯藏食物的行為就表現(xiàn)得越明顯，這對(duì)于保障未來(lái)的生存是很重要的，這實(shí)際上是“為未來(lái)著想的一種行為適應(yīng)性”。接下來(lái)Raby等人又安排了一個(gè)更加有趣的實(shí)驗(yàn)，他們訓(xùn)練松鴉使其知道在一個(gè)隔室中可以吃到花生，而在另一個(gè)隔室中可以吃到谷粒，松鴉對(duì)這兩種食物都很愛吃。當(dāng)按照上述同樣的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)松鴉在含有花生的隔室中貯藏的食物是谷粒，而在含有谷粒的隔室中貯藏的是花生，這表明松鴉很注意并喜歡使它們的食物多樣化，在它們?yōu)槲磥?lái)準(zhǔn)備食物時(shí)也是遵循這一使食譜多樣化的原則。除鴉科鳥類（如松鴉和星鴉）外，其他動(dòng)物是否也有“為未來(lái)著想”和計(jì)劃未來(lái)的行為，目前還研究得很少，尚有待于擴(kuò)展研究范圍。

3腦海馬大小與貯食行為的關(guān)系

為了了解鳥類覓食行為與空間記憶力的問(wèn)題，Hea－ley和Krebs（1992）［17］曾研究了7種鴉科鳥類的腦海馬大小與貯藏食物的能力之間的關(guān)系。他們之所以選擇研究腦海馬是因?yàn)橐阎B類大腦的這個(gè)區(qū)域與食物的回收（復(fù)得）有密切關(guān)系。同時(shí)，鴉科鳥類也是研究這一問(wèn)題的最好對(duì)象，因?yàn)樵邙f科鳥類的各個(gè)物種之間，貯食行為的表現(xiàn)各不相同，便于用比較研究法進(jìn)行分析。有些鴉科鳥類根本就不貯藏食物，而另一些鴉科鳥類則 必須在長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月期間完全依賴貯藏的食物為生［18－19］。Healey和Krebs［17］研究了兩種幾乎不貯藏食物的鴉科鳥類，即寒鴉（Corrus　monedula）和紅嘴山鴉（Pyr－rhocorax　graculus），還研究了4種貯藏食物的鴉科鳥類，它們是禿鼻烏鴉（Corvus　frugilegus）、歐洲烏鴉（Corviscorone）、喜鵲（Pica　pica）和紅嘴藍(lán)鵲（Cisia　erythro－rhyncha），此外還研究了1種不僅貯藏食物，而且在長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月期間必須記住6　000～11　000粒種子埋藏地點(diǎn)的鴉科鳥類，即歐洲松鴉（Garrulus　grandarius）。當(dāng)檢查貯食行為與腦海馬大小之間關(guān)系的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)這些鳥類都表現(xiàn)出明顯的正相關(guān)關(guān)系，即海馬體積越大，貯藏食物的行為就越發(fā)達(dá)，這表明：海馬大小是鴉科鳥類空間記憶力和貯食行為進(jìn)化的關(guān)鍵因素。此外，動(dòng)物行為學(xué)家還研究了在一個(gè)物種內(nèi)部個(gè)體之間海馬大小與貯食能力之間的關(guān)系，例如：生活在食物短缺環(huán)境中的個(gè)體比生活在食物豐富環(huán)境中的個(gè)體具有更發(fā)達(dá)的貯食能力，腦海馬的體積也比較大［20］。這就是說(shuō)，當(dāng)鳥類生活在嚴(yán)酷環(huán)境中的時(shí)候，自然選擇有利于增強(qiáng)它貯存食物的能力和此后重新找回這些食物的能力，也有利于海馬體積的增大和海馬神經(jīng)元數(shù)量的增加。Pravosudo及其同事用來(lái)自食物豐富的科羅拉多州和來(lái)自食物短缺的阿拉斯加州的兩個(gè)黑冠山雀（Po－ecile　atricapilla）種群檢驗(yàn)和證實(shí)了這一觀點(diǎn)。他們從阿拉斯加州的安克雷奇（Anchorage）捕捉15只活鳥，從科羅拉多州的溫澤（Windsor）捕捉20只活鳥，然后將它們帶回加利福尼亞大學(xué)的實(shí)驗(yàn)室，45天后測(cè)定這些鳥類貯藏種子之后再重新找到這些種子的能力。當(dāng)為這些鳥提供可供貯藏的種子時(shí)，發(fā)現(xiàn)來(lái)自阿拉斯加（食物短缺）的山雀比來(lái)自科羅拉多（食物豐富）的山雀要貯藏更多的種子。同樣重要的是，阿拉斯加山雀不僅比科羅拉多山雀貯藏更多的種子，而且它們重新找回這些種子的效率也更高，所犯錯(cuò)誤也最少。從海馬大小的角度進(jìn)行比較，雖然阿拉斯加山雀比科羅拉多山雀的個(gè)體小體重輕，但其海馬的體積卻比后者大，而且海馬所含有的神經(jīng)元數(shù)量也更多。有趣的是，在不給予兩地山雀貯藏食物的機(jī)會(huì)的情況下，它們之間海馬大小的差異仍然存在，這表明：貯藏行為本身并不會(huì)使阿拉斯加山雀的海馬變大，相反，兩地山雀之間的差異應(yīng)當(dāng)是自然選擇作用于海馬大小的結(jié)果。目前，有關(guān)這一領(lǐng)域的大量工作正在進(jìn)行之中。

第5篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

【摘要】 目的 建立兔脊髓缺血再灌注損傷模型，觀察其行為功能改變，探討發(fā)生脊髓缺血再灌注損傷的時(shí)間窗, 為治療提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法 40只新西蘭大白兔隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血15min組、缺血30min組、缺血45min組和缺血60min組，每組8只。采用腎下腹主動(dòng)脈阻斷法,建立脊髓缺血再灌注模型。術(shù)后采用Reuters法對(duì)后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能評(píng)分，Jacobs 和Rivlin法對(duì)后肢運(yùn)動(dòng)功能分級(jí)。 結(jié)果 術(shù)后Reuter評(píng)分值總體變化趨勢(shì)為缺血60min組>缺血45min組>缺血30min組和缺血15min組。Jacobs和Rivlin評(píng)分值總體變化趨勢(shì)為缺血15min組和缺血30min組＞缺血45min組＞缺血60min組。 結(jié)論 本模型是一種較理想的脊髓缺血損傷模型。阻斷腹主動(dòng)脈血流30，45，60min可以模擬出輕、中、重不同程度局部脊髓缺血再灌注損傷。脊髓缺血時(shí)間越長(zhǎng)，后肢運(yùn)動(dòng)功能損害越明顯，脊髓缺血再灌注損傷的時(shí)間窗為30-45min。

【關(guān)鍵詞】 脊髓 缺血/再灌注損傷 時(shí)間窗 行為醫(yī)學(xué)

Evaluation of the functions of hindlimb in rabbit graded spinal cord ischemia/reperfusion injury by ethology

Liu Chong1,Shi Jin-shan1,Zhang jian-ping1,Feng ya-ping1,Zhang fang-xiang1,FANG Hua1,2*,Wang Quan-yun2.(1.Department of Anesthesiology Guizhou Provincial People,s Hospital, Guiyang 550002,China;2.Department of Anesthesiology,West China Hospital,Sichuan University,Chengdu 610041,China)

【Abstract】 Objective To make a ischemia/reperfusion injury model of spinal cord and investigate the relationship between time window of spinal cord ischemia/reperfusion injury and extent of function changes of behavior in rabbits. Methods 40 rabbits were equally randomized into the sham-operation group、ischemia for 15 min、30min、45min and 60min group. The spinal cord ischemia-reperfusion model was made by clamping the infrarenal aortic in rabbits. The sensory、motor and reflex functions of spinal cord were evaluated after reperfusion by the Reuters method and neurological functions of hind extremities were scored after reperfusion through the Jacobs and Rivlin method. Results The Reuter’s score during reperfusion from the highest to the lowest in the order was generally ischemia for 60 min group、ischemia for 45 min group、ischemia for 30 min group( andischemia for 15 min group ). The Jacobs and Rivlin score during reperfusion from the highest to the lowest in the order was generally ischemia for ischemia for 30 min group( andischemia for 15 min group ) 、ischemia for 45 min group、60 min group. Conclusions It is a very good model of ischemia-reperfusion injury in spinal cord.Mild , moderate and severe ischemia-reperfusion injury of regional spinal cord ischemia can be simulated by the occlusion of the infrarenal aortic for 30 minutes , 60 minutes and 90 minutes respectively.The motor funtion of rabbit hind limbs was significantly worsened due to prolonging the ischemic time. The time window of spinal cord ischemia-reperfusion injury is limited from 30 to 45 min.

【Key words】 Spinal cord；Ischemia-reperfusion injury；Time window；Behavior

在脊髓損傷動(dòng)物模型的研究中，建立臨床相似性好、可重復(fù)、可操作、更客觀的動(dòng)物模型后，對(duì)機(jī)體的運(yùn)動(dòng)、感覺、反射功能的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)能夠直接反映脊髓的損傷程度及外周行為功能的改善情況［1］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立不同脊髓損傷程度的新西蘭大耳白兔脊髓缺血再灌注損傷模型，觀察后肢運(yùn)動(dòng)及感覺情況并進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，旨在進(jìn)一步探討脊髓缺血再灌注損傷后脊髓功能恢復(fù)的水平及其與神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分之間的關(guān)系。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及動(dòng)物模型的建立：4-6月齡健康純種新西蘭大耳白兔40只(四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重2.0-2.5kg，雌雄不拘，隨機(jī)分為五組,假手術(shù)組（C0）、缺血15min組（C15）、缺血30min組（C30）、缺血45min組（C45）和缺血60min組（C60），每組8只。采用左腎動(dòng)脈下方腹主動(dòng)脈阻斷法建立脊髓缺血再灌注損傷模型［2］。證實(shí)鉗夾點(diǎn)以下腹主動(dòng)脈搏動(dòng)完全消失后,各缺血組分別阻斷15min、30min、45min和60min后松夾，恢復(fù)灌注，逐層關(guān)腹，再灌注均為48小時(shí)。術(shù)中用溫鹽水紗布敷蓋腹腔臟器，肛溫維持在36-37℃，麻醉維持根據(jù)手術(shù)過(guò)程中動(dòng)物的反應(yīng)，追加初始劑量的1/3-l/2。動(dòng)物麻醉后即耳中動(dòng)脈穿刺持續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓（MAP）、心電圖（ECG）、經(jīng)皮脈搏氧飽和度（SpO2）及溫度。i-STAT血?dú)夥治鰞x（美國(guó)）測(cè)定動(dòng)脈血?dú)?。C0只進(jìn)行手術(shù)操作，不阻斷腹主動(dòng)脈，后期手術(shù)操作同缺血組。動(dòng)物清醒后歸籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)室保持室溫在24℃-26℃。

2. 觀察指標(biāo)：后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分參照J(rèn)acobs分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［1］，采用5分制法測(cè)定再灌注6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)功能。以0～3級(jí)為截癱標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算出各組動(dòng)物的截癱率。 后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能評(píng)價(jià)根據(jù)Reuter等評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［2］，綜合評(píng)價(jià)再灌注6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)動(dòng)物后肢感覺、運(yùn)動(dòng)反射功能。參考文獻(xiàn)［3］略加改進(jìn)，測(cè)定再灌注6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)斜面臨界角度均值及再灌注48h斜板障礙率。斜板由兩塊100cm×40cm矩形的合金板通過(guò)鉸鏈于一端相連而成，一塊作底板，另一塊為移動(dòng)板，表面鋪約6 mm厚的橡膠墊。板從水平位置(00) 起繞軸旋轉(zhuǎn)，斜板基底部放置一測(cè)量角度的量角器，斜面角度可以測(cè)出。兔俯臥于移動(dòng)板上，身體縱軸與斜板橫軸垂直放置，頭側(cè)逐漸抬高以增大移動(dòng)板與底板間的角度，直至出現(xiàn)動(dòng)物向下滑行時(shí)，記錄臨界角，每例均測(cè)試3次，取其平均值。以評(píng)價(jià)動(dòng)物后肢的負(fù)重能力。為了排除麻醉及手術(shù)等影響，采用斜板功能障礙率來(lái)評(píng)價(jià)，計(jì)算公式參照文獻(xiàn)如下［4］:斜板障礙率（%）=（麻醉前度數(shù)-脊髓損傷后度數(shù)）／麻醉前度數(shù)×100%。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分采用非參數(shù)檢驗(yàn)（Kruskal-wallis）進(jìn)行分析，使用 Mann-whitney u檢驗(yàn)比較。斜板障礙率的比較采用卡方檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS13.0。

結(jié) 果

1. 動(dòng)物模型生理參數(shù)：手術(shù)過(guò)程中各組肛溫、MAP、心率、SpO2、呼吸頻率、血糖和血?dú)夥治鲋笜?biāo)均在正常范圍內(nèi)。

2. 術(shù)后動(dòng)物一般情況觀察：動(dòng)物手術(shù)后2h內(nèi)完全清醒。觀察時(shí)間內(nèi)，所有動(dòng)物手術(shù)切口均愈合良好，無(wú)感染，均無(wú)意外死亡。根據(jù)Jacobs分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［1］，假手術(shù)組動(dòng)物后肢均未發(fā)生癱瘓。缺血15min組和缺血30min組動(dòng)物術(shù)后自主排便排尿功能逐漸恢復(fù)，再灌注48h時(shí)后肢均無(wú)明顯癱瘓，截癱率均為0（0/8）；缺血45min組和缺血60min組動(dòng)物術(shù)后活動(dòng)減弱, 飲食量減少，伴有腹部脹氣、大小便功能障礙及雙后肢肌張力明顯降低等表現(xiàn)，再灌注48h時(shí)兩組動(dòng)物后肢出現(xiàn)為不同程度、不同類型的截癱，可分為伸肌癱瘓、屈肌癱瘓和混合性癱瘓三種類型，截癱率分別為87.5%（7/8）和100%（8/8）。

3. 后肢運(yùn)動(dòng)功能的評(píng)估 ：Jacobs分值越高動(dòng)物后肢功能越接近正常。除假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)后肢功能正常外，隨著脊髓缺血程度的不同，各缺血組同時(shí)間點(diǎn)Jacobs分值顯示出不同的差別；缺血15min組與缺血30min組各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)和組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；缺血45min組與缺血60min組同時(shí)間點(diǎn)Jacobs分值逐漸下降，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

表1 各時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物Jacobs評(píng)分均值（x±s，n=8）

組 別 再 灌 注 時(shí) 間（h）

6 12 24 48

C0 5.00±0.00 5.00±0.00 5.00±0.00 5.00±0.00

C15 4.82±0.57 4.22±0.69 4.19±1.05 4.50±0.53

C30 4.57±0.66 4.26±0.95 4.13±0.61 4.15±0.83

C45 2.51±0.82 2.35±0.65 2.16±0.84 2.68±0.81

C60 0.58±0.63■ 0.67±0.79■ 0.59±0.85■ 0.55±0.51■

注：與同期缺血15min組比較，#P＜0.05，P＜0.01; 與同期缺血30min組比較，

P＜0.05，P＜0.01;與同期缺血45min組比較， P＜0.05，■P＜0.01

4. 后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能評(píng)價(jià)：參照Reuter評(píng)分法［2］，正常家兔后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能評(píng)分值為0分，全癱時(shí)為11分，分值越高，說(shuō)明后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能障礙越嚴(yán)重。假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)后肢Reuter分值均為0分；再灌注各時(shí)間點(diǎn)，各缺血組動(dòng)物后肢Reuter分值表現(xiàn)為不同程度的改變；缺血15min組與缺血30min組各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)和組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；脊髓缺血時(shí)間超過(guò)30min，各時(shí)間點(diǎn)Reuter分值逐漸增加，缺血45min組與缺血60min組間比較差異有顯著性（P

表2 脊髓缺血再灌注損傷后肢感覺和運(yùn)動(dòng)反射功能評(píng)分值（x±s，n=8）

組別 再 灌 注 時(shí) 間（h）

6 12 24 48

C0 0 0 0 0

C15 2.42±0.57 2.29±0.43 1.90±0.34 2.32±0.38

C30 3.38±0.61 2.84±0.36 3.12±0.58 2.42±0.76

C45 8.76±0.65 8.51±0.79 7.85±0.51 8.26±0.62

C60 10.84±0.77■ 10.63±0.45■ 10.23±0.67■ 9.63±0.62■

注：與同期缺血15min組比較，#P＜0.05，P＜0.01; 與同期缺血30min組比較，P＜0.05，P＜0.01;與同期缺血45min組比較， P＜0.05，■P＜0.01

5 斜面臨界角測(cè)定：假手術(shù)組平均斜面臨界角度為67.82±7.650。再灌注各時(shí)間點(diǎn)，各缺血組動(dòng)物斜面臨界角度表現(xiàn)為不同程度的改變；缺血15min組與缺血30min組各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)和組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；脊髓缺血時(shí)間超過(guò)30min，各時(shí)間點(diǎn)斜面臨界角度逐漸下降，缺血45min組與缺血60min組間比較差異有顯著性（P

6 再灌注48h斜板障礙率：假手術(shù)組48h斜板障礙率為0。各缺血組隨著脊髓缺血時(shí)間的不同，再灌注48h時(shí)動(dòng)物斜板障礙率逐漸增加。缺血15min組、缺血30min組、缺血45min組和缺血60min組斜板障礙率分別為（5.73±1.47）%、（5.95±1.36）%、（41.56±5.78）%及（59.72±5.47）%。見表3。

表3 各時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物斜面臨界角度均值（0，x±s，n=8）及再灌注48h斜板障礙率(%)

組 別 再 灌 注 時(shí) 間（h） 再 灌 注48h斜板障礙率

6 12 24 48

C0 67.47±7.28 69.26±9.51 65.84±7.25 64.38±8.93 0

C15 65.73±8.03 67.23±6.62 66.47±6.82 66.48±7.35 5.73±1.47

C30 62.72±6.25 69.85±7.15 64.37±8.43 63.63±6.39 7.95±1.86

C45 42.51±6.37 43.26±7.37 44.57±7.44 41.32±8.56 41.56±5.78

C60 36.54±4.53■ 35.63±5.63■ 33.28±6.05■ 34.81±5.33■ 59.72±5.47■

注：與同期缺血15min組比較，#P＜0.05，P＜0.01; 與同期缺血30min組比較，P＜0.05，P＜0.01;與同期缺血45min組比較， P＜0.05，■P＜0.01

討 論

神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估是判斷缺血再灌注損傷脊髓功能變化的重要指標(biāo)。由于動(dòng)物對(duì)神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)手段的應(yīng)答具有一定的局限性，故既往脊髓損傷后的神經(jīng)功能評(píng)估側(cè)重于運(yùn)動(dòng)功能的研究方法可能影響其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及可比性。經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外學(xué)者多年的努力，提出了多種不同的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)和方法，主要包括Jacobs評(píng)分［1］、Reuter評(píng)分［2］、Rivlin斜板試驗(yàn)［3,4］、改良Tarlov評(píng)分［5］、BBB (Basso、Beaffic、Bresnahan）評(píng)分［6］、Baffourur評(píng)分［7］、Gale聯(lián)合評(píng)分［8］等。這些評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)從不同的方面對(duì)脊髓損傷程度提出了相對(duì)客觀的標(biāo)準(zhǔn)。本研究結(jié)合實(shí)際情況，聯(lián)合采用Rivlin斜板試驗(yàn)、Jacobs和Reuter評(píng)分法綜合判斷包括后肢運(yùn)動(dòng)、感覺、反射以及負(fù)重能力等幾方面的變化。

本研究發(fā)現(xiàn)，雖然Jacobs分級(jí)法能夠比較準(zhǔn)確地評(píng)定脊髓缺血再灌注損傷平面以下的軀體自主動(dòng)物功能，但過(guò)于籠統(tǒng)，不夠精細(xì)，對(duì)于鼠、兔等較低級(jí)的哺乳動(dòng)物，有些指標(biāo)難以觀察；實(shí)驗(yàn)一結(jié)果顯示，脊髓缺血再灌注模型對(duì)脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和后角感覺神經(jīng)元的影響存在差異。因此，Reuter評(píng)分法雖然采分點(diǎn)多，能夠綜合反映后肢細(xì)微的神經(jīng)功能變化，但不能靈敏辨別后肢癱瘓的程度，且易于主觀判斷，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差；Rivlin法也有其自身的局限性，它主要從動(dòng)物雙下肢靜態(tài)力量的角度為研究出發(fā)點(diǎn)，對(duì)于后肢的動(dòng)態(tài)活動(dòng)能力未加以考慮。因此，本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合運(yùn)用Rivlin斜板試驗(yàn)、Jacobs和Reuter評(píng)分法，將多種觀察指標(biāo)和方法綜合起來(lái)，從靜態(tài)及動(dòng)態(tài)角度采用雙盲、雙人獨(dú)立觀察記錄，最后取均值進(jìn)行脊髓功能綜合評(píng)分［9］。此外，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)自身重力對(duì)抗原理，自制適用于新西蘭大耳白兔的合金斜板，利用自身重力將斜板試驗(yàn)用于兔脊髓缺血再灌注后后肢負(fù)重能力變化的研究。本研究表明，將這三種實(shí)驗(yàn)方法相結(jié)合，克服了使用某一評(píng)分方法的跨度較大、跳躍分布以及連續(xù)性較差的缺點(diǎn)，不僅彌補(bǔ)各自的不足，還可以提高實(shí)驗(yàn)評(píng)分方法的靈敏度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為準(zhǔn)確地、可靠地、相對(duì)客觀地綜合評(píng)定動(dòng)物運(yùn)動(dòng)、感覺等多方面功能。

本實(shí)驗(yàn)顯示，假手術(shù)組后肢Jacobs和Ruter評(píng)分術(shù)后均完全正常，且48h斜板障礙率為0。在各缺血組中，缺血15min組和缺血30min組動(dòng)物術(shù)后自主排便排尿功能逐漸恢復(fù)，觀察時(shí)間內(nèi)斜面臨界角度、Jacobs及Ruter分值均無(wú)顯著改變，且再灌注48h時(shí)也無(wú)明顯排便排尿功能障礙以及后肢均無(wú)明顯癱瘓，截癱率均為0（0/8），說(shuō)明脊髓本身具有一定的修復(fù)功能，動(dòng)物后肢功能在再灌注6h時(shí)能夠恢復(fù)正常, 至再灌注48h時(shí)也未見明顯的行為功能障礙，提示脊髓的自修復(fù)功能可能與脊髓缺血再灌注損傷程度有一定的關(guān)系，脊髓缺血短于30min雖然可能引起輕度脊髓缺血再灌注損傷，但隨著脊髓血供恢復(fù)，后肢感覺和運(yùn)動(dòng)功能可以完全恢復(fù)到損傷前的水平。缺血45min和缺血60min組同時(shí)間點(diǎn) Jacobs和Ruter分值分別表現(xiàn)為明顯降低和升高，而斜面臨界角逐漸下降，再灌注48h時(shí)斜板障礙率逐漸增加，表現(xiàn)為不同類型的截癱、大小便功能障礙及雙后肢肌張力明顯降低，兩組動(dòng)物截癱率分別為87.5%（7/8）和100%（8/8），與此同時(shí)，術(shù)后動(dòng)物活動(dòng)減弱, 飲食量減少，且伴有腹部脹氣等表現(xiàn)，說(shuō)明左腎動(dòng)脈下腹主動(dòng)脈阻斷45min和60min不僅能夠直接造成脊髓中、重度的脊髓缺血再灌注損傷，還可能間接引起腹腔和/或盆腔臟器不同程度的缺血損傷，提示脊髓缺血45min和60min后即使血流恢復(fù)，后肢感覺和運(yùn)動(dòng)功能也不能恢復(fù)至損傷前的水平。

術(shù)后神經(jīng)行為學(xué)變化與脊髓缺血再灌注損傷程度密切相關(guān)。脊髓再灌注損傷程度與缺血時(shí)間有關(guān), 即缺血時(shí)間超過(guò)一定限度后再灌注就會(huì)引起脊髓組織不可逆性損傷,在此時(shí)限內(nèi)恢復(fù)血供則有治療意義, 此時(shí)限即被稱為再灌注損傷治療時(shí)間窗。本研究顯示，各缺血組同時(shí)間點(diǎn)后肢神經(jīng)肌肉功能強(qiáng)弱總體變化趨勢(shì)為缺血15min組和缺血30min組＞缺血45min組＞缺血60min組，說(shuō)明阻斷腰段脊髓血流15min、30min、45min和60min可以建立不同損傷程度的脊髓缺血再灌注模型，模擬輕度、中度、重度和/或完全性脊髓運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)功能障礙，輕度和中度脊髓缺血再灌注損傷可能造成不完全性脊髓運(yùn)動(dòng)和感覺傳導(dǎo)功能障礙，而重度以上的脊髓缺血再灌注損傷可能引起完全性脊髓運(yùn)動(dòng)和感覺傳導(dǎo)功能損害，造成后肢感覺和運(yùn)動(dòng)功能障礙，提示, 脊髓組織如在一定時(shí)限內(nèi)迅速恢復(fù)供血, 神經(jīng)元可能恢復(fù)功能; 如超過(guò)一定的時(shí)限(再灌注損傷時(shí)間窗),則會(huì)發(fā)生不可逆損傷，失去治療意義。“時(shí)間窗”這一概念于20世紀(jì)90年代提出，與脊髓缺血再灌注損傷的預(yù)后密切相關(guān)。脊髓缺血時(shí)間及程度、脊髓血運(yùn)重建與否以及多因素介導(dǎo)的脊髓再灌注損傷是術(shù)后發(fā)生神經(jīng)功能障礙的主要原因。本實(shí)驗(yàn)中, 兔脊髓缺血30min內(nèi)后肢神經(jīng)行為學(xué)變化不明顯, 而脊髓缺血時(shí)間45min以上將造成后肢神經(jīng)功能嚴(yán)重障礙，提示脊髓缺血再灌注損傷時(shí)間窗可能局限在30-45min之間，精確的時(shí)間點(diǎn)尚需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

參考文獻(xiàn)

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第6篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

摘 要：目的：觀察化瘀通絡(luò)方治療大鼠局灶性腦缺血－再灌注損傷對(duì)腦組織自由基及一氧化氮合成酶（NOS）和iNOS變化的影響。方法：制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，給予化瘀通絡(luò)方治療后觀察丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及一氧化氮合成酶（NOS）和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）的變化。結(jié)果：化瘀通絡(luò)方可顯著降低MDA含量以及iNOS和NOS活性，SOD含量升高。結(jié)論：在腦缺血再灌注損傷后, 化瘀通絡(luò)方能抑制腦缺血再灌注后脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，促進(jìn)自由基清除，對(duì)抗自由基損傷，提高腦組織自身抗氧化能力，降低NOS和iNOS介導(dǎo)腦缺血－再灌注時(shí)的神經(jīng)損傷，保護(hù)腦細(xì)胞。

關(guān)鍵詞：化瘀通絡(luò)方；腦缺血-再灌注損傷模型；SOD；MDA；NOS；iNOS

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-7717（2011）03-0509-03

Effect of Huayu Tongluo Fang on the Expression of ROS and NOS in Brain

Tissue During the Reperfusion After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats

QIU Zhao-juan1，ZHU Xuan-xuan1，DA Qing-guo1，WU Xu-tong1-ZHU Wu-yuan2

（1.Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjiang 210029,Jiangsu,China;

2.Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210029,Jiangsu,China）

Abstract:Objective:To observe the effect of huayutongluofang on expression of ROS,NOS and iNOS during the reperfusion after middle cerebral artery occlusion in rats. Methods:The cerebral IR rats model were established by middle cerebral artery occlusion.Treated the cerebral IR rats with huayutongluofang,then observing the changes of MDA,SOD,NOS and iNOS in brain tissue. Results:Huayutongluofang could reduce the expression of MDA,iNOS and NOS in brain tissue.While, after huayutongluofang treatment,the SOD level in brain tissue was increased.Conclusions:During the reperfusion after middle cerebral artery occlusion,huayutongluofang can restrain the Lipid Peroxidation,promote removal of oxygen free radicals, compete oxygen-free radical injury. While,runhoukaiyinkeli could reduce the possibility of nerve damage,protect neural cells from injured.省略。

缺血性腦卒中（Ischemic Cerebral Stroke, ICS），中醫(yī)又稱缺血性腦中風(fēng)，是一種突然起病的腦部血液循環(huán)障礙性疾病。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將其列為“風(fēng)、癆、臌、膈”四大疑難病之首。根據(jù)WHO公布的有關(guān)數(shù)據(jù)顯示，世界范圍內(nèi)ICS的發(fā)病率為150～200人／10萬(wàn)人口。而在我國(guó)，60歲以上老年人ICS發(fā)病率高達(dá)30%～45%，幸存者中約50%留有不同程度的后遺癥，且復(fù)發(fā)率高達(dá)40%～60%。ICS在臨床表現(xiàn)以猝然昏撲導(dǎo)致口眼歪斜、半身不遂、智力障礙為主要特征，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，已成為前3位的疾病死因之一，其病因和治療藥物一直是研究熱點(diǎn)。近年來(lái),中藥在缺血性疾病治療中的作用逐漸得到重視。化瘀通絡(luò)法是我院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)多年臨床實(shí)踐研制并應(yīng)用于臨床腦梗塞病人，前期臨床研究發(fā)現(xiàn)化瘀通絡(luò)方能明顯改善神經(jīng)功能缺損，用其治療急性腦出血60例，治療組基本痊愈12例（20.0%），顯效24例（40.0%），有效16例（26.7%），無(wú)效8例（13.3%），總有效率86.7%。顯示出滿意的臨床療效。本研究通過(guò)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型,探討化瘀通絡(luò)方對(duì)腦缺血再灌注損傷后腦組織自由基及一氧化氮合成酶（NOS）變化的影響。為化瘀通絡(luò)方的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品

化瘀通絡(luò)方由葛根、當(dāng)歸、補(bǔ)骨脂、制大黃、水蛭等組成，由江陰天江藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：0910119腦血康膠囊，山東昊福制藥有限公司，批號(hào)：20100202，青霉素，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：B091107，戊巴比妥鈉，中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：F20091216 SOD、MDA、NOS試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20100406。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)用飼料

SD大鼠，雄性，280～320g，由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（浙）2008-0033，實(shí)驗(yàn)用飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)20100325

1.3 實(shí)驗(yàn)用儀器

電子分析天平FA10047南京市計(jì)量測(cè)試所，80-2臺(tái)式低速離心機(jī)，上海醫(yī)療器械有限公司手術(shù)器械廠，恒溫水浴箱 HH-2，國(guó)華電器有限公司 ，756PC紫外分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

實(shí)驗(yàn)大鼠均分籠飼養(yǎng)，飼喂全價(jià)顆粒飼料，自由飲水，室溫（22±2）℃，55%～65%，光照適度，通風(fēng)潔凈。

1.5 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理用±s表示,采用t檢驗(yàn),用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和MCAO模型的建立

選用健康雄性SD大鼠，體重280～320g，飼喂全價(jià)顆粒飼料，自由飲水，大鼠按簡(jiǎn)化分層隨機(jī)法，隨機(jī)分為6組：（1）假手術(shù)組: 給予等量生理鹽水10mL/kg；（2）腦缺血再灌注模型組：給予等量生理鹽水10mL/kg；（3）腦血康膠囊組：0.9g/kg，10mL/kg；（4）化瘀通絡(luò)方大劑量組：16g/kg，10mL/kg；（5）化瘀通絡(luò)方中劑量組：8g/kg，10mL/kg；（6）化瘀通絡(luò)方小劑量組：4g/kg，10mL/kg。

以上除假手術(shù)組和腦缺血再灌注模型組給予等量生理鹽水，其余各組大鼠灌胃給藥，灌胃容量10ml/kg，每日一次，連續(xù)給藥7天，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)時(shí)以水合氯醛（30mg/kg）腹腔注射，待動(dòng)物完全麻醉后，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部脫毛并消毒，于正中切開2cm，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA），頸外動(dòng)脈（ECA），頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），結(jié)扎ECA和CCA近心端，于ECA和ICA分叉處在ECA上穿線打一活結(jié)。在ECA上剪一小口，插入直徑0.235mm的尼龍漁線，緩慢向分叉處插入，直到到達(dá)分叉處有阻力不能再插入為止。將ECA上活結(jié)系緊，固定漁線。剪斷ECA，輕輕提起ECA殘端使其與ECA成一直線，再緩慢將漁線向ICA插入，栓線插入深度約為（18.0±1.0）mm，在分叉處結(jié)扎，松開動(dòng)脈夾，縫合皮膚，體外留少許栓線，缺血2h后將栓線抽離頸總動(dòng)脈分叉處造成再灌注模型。模型成功標(biāo)志：動(dòng)物麻醉清醒后出現(xiàn)缺血側(cè)Hornor征及對(duì)側(cè)以前肢為主的偏癱。如動(dòng)物無(wú)此體征或于2h后仍不清醒者剔除。假手術(shù)組只切開皮膚，分離CCA、ECA、ICA后縫合。手術(shù)后給予抗生素青霉素抗炎。繼續(xù)給藥3天。

2.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)

2.2.1 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 MCAO大鼠麻醉清醒后，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考Longa等5分制法（0分：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；1分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前肢；2分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分：向?qū)?cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。）分值越高，說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。觀察造模后3h，24h，48h，72h神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分，見表1

表1 化瘀通絡(luò)方對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響

（±s）

注：與假手術(shù)組比較，P

實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示：局灶性腦缺血再灌注模型大鼠在3h、24h、48h、72h神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分高于各給藥組，具有顯著性差異；以3h神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分為重，24h～72h后神經(jīng)行為有恢復(fù)，評(píng)分降低，化瘀通絡(luò)方大劑量組在24h、48h和72h的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分與模型組比較具有顯著性差異；化瘀通絡(luò)方中劑量組在24h和48h的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分與模型組比較具有顯著性差異；化瘀通絡(luò)方小劑量組24h有顯著性降低神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分作用，提示：化瘀通絡(luò)方對(duì)局灶性腦缺血大鼠再灌注后的神經(jīng)元具有一定的保護(hù)作用，并具有減輕神經(jīng)功能損傷的作用。

2.2.2 腦組織標(biāo)本的制備 各組大鼠再灌注72h后,脫頸處死,斷頭后迅速取腦,將腦組織以冰生理鹽水洗凈血跡后，稱取0.1g，置2mL冰磷酸鹽緩沖液中于勻漿器中進(jìn)行勻漿，將制備好5%腦組織勻漿用離心機(jī)3000r/min，4℃離心15min，取上清液測(cè)定SOD、MDA、NOS和蛋白含量。

2.2.3 化瘀通絡(luò)方對(duì)腦缺血大鼠腦組織中SOD、MDA、NOS的影響 見表2～3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示：局灶性腦缺血再灌注模型大鼠腦組織中MDA含量顯著高于假手術(shù)組，SOD顯著性低于假手術(shù)組，化瘀通絡(luò)方各給藥組均可不同程度降低局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織中MDA含量，升高SOD活力，與模型組比較具有顯著性差異。提示：化瘀通絡(luò)方對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織的保護(hù)作用與降低MDA含量和升高SOD

表2 化瘀通絡(luò)方對(duì)腦缺血大鼠腦組織中MDA含量

和SOD活力的影響（±s）

注：與假手術(shù)組比較，P

表3 化瘀通絡(luò)方對(duì)腦缺血大鼠腦組織中TNOS

和iNOS的影響（±s）

注：與假手術(shù)組比較，P

活力有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織中TNOS和iNOS含量明顯增高，與假手術(shù)組比較具有顯著性差異，（P

3 討 論

關(guān)于缺血再灌注引起腦神經(jīng)組織損傷的機(jī)制尚不十分清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)自由基及其脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)在腦組織缺血再灌注的病理生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，是腦缺血－再灌注損傷的重要機(jī)制之一，因此，抗自由基的毒害作用成為防治缺血再灌注損傷的重要措施。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化物的終末產(chǎn)物，測(cè)定其含量可反映脂質(zhì)過(guò)氧化程度和自由基對(duì)腦組織損傷的程度。SOD能催化超氧化物轉(zhuǎn)變成活性較低的物質(zhì)，是細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用的酶性保護(hù)系統(tǒng)。故認(rèn)為測(cè)定以上指標(biāo)可綜合反映缺血再灌注后腦組織損傷與抗損傷的水平。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腦缺血－再灌注可導(dǎo)致腦組織發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使MDA生成增加、SOD活性明顯下降，顯示出自由基的毒害攻擊作用，符合當(dāng)今腦缺血缺氧損傷的“自由基學(xué)說(shuō)”；應(yīng)用化瘀通絡(luò)方治療后，大劑量組和中劑量組均可明顯提高SOD活力，使 MDA生成減少。提示，化瘀通絡(luò)方能抑制腦缺血再灌注后脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，對(duì)抗自由基損傷，促進(jìn)自由基清除，提高腦組織自身抗氧化能力，保護(hù)腦細(xì)胞。

研究表明腦缺血/再灌流早期NO增多,對(duì)腦起保護(hù)作用;但腦缺血/再灌流的損害則與再灌流期NOS大量增多有關(guān)。缺血再灌注會(huì)引起誘導(dǎo)型NOS（iNOS）高表達(dá)。NOS是一組同功酶，廣泛存在于各類組織、細(xì)胞中。研究表明NOS有3種亞型：①神經(jīng)元型（nNOS）。活性依賴于Ca2+升高，最早在神經(jīng)元中發(fā)現(xiàn)，生理狀態(tài)下有表達(dá)，病理狀態(tài)下可被誘導(dǎo)，在腦缺血神經(jīng)元損傷的早期階段起重要作用，腦缺血后10min活性上升，3h達(dá)高峰，介導(dǎo)腦缺血時(shí)早期神經(jīng)元損傷。②內(nèi)皮型（eNOS）?；钚砸蕾囉贑a2升高，最早在內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，生理狀態(tài)下有表達(dá)，病理狀態(tài)下可被誘導(dǎo)，通過(guò)維持腦血流，在腦缺血后起保護(hù)作用，腦缺血后 1h活性上升，24h達(dá)高峰。③誘導(dǎo)型（iNOS）?；钚圆灰蕾囉贑a2，最早在巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，在腦缺血神經(jīng)元損傷的晚期階段起重要作用，腦缺血后 12h活性上升，48h達(dá)高峰，介導(dǎo)遲發(fā)性神經(jīng)原損傷。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腦缺血2h再灌注 72h后，腦組織NOS活性和iNOS活性持續(xù)增高?；鐾ńj(luò)方可通過(guò)降低NOS和iNOS活性而介導(dǎo)腦缺血－再灌注時(shí)的神經(jīng)保護(hù)作用。

腦缺血再灌注損傷的發(fā)生與多種因素有關(guān)，研究表明化瘀通絡(luò)方治療腦缺血再灌注損傷機(jī)制可能與其清除氧自由基，抑制一氧化氮合成酶的產(chǎn)生，抗細(xì)胞凋亡，從而保護(hù)腦組織有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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第7篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

【關(guān)鍵詞】 益智寧神口服液/藥理學(xué);抽動(dòng)—穢語(yǔ)綜合征/中藥療法;神經(jīng)遞質(zhì);疾病模型，動(dòng)物;大鼠;色譜法，高壓液相

抽動(dòng)—穢語(yǔ)綜合征(tourette syndrome，ts)，又稱多發(fā)性抽動(dòng)癥，是一種兒童期發(fā)病的慢性神經(jīng)精神障礙性疾病。wWW.133229.cOM臨床表現(xiàn)主要為突然、快速、反復(fù)、非節(jié)律性、不自主和刻板的運(yùn)動(dòng)性抽動(dòng)和發(fā)聲性抽動(dòng)，還可能伴有各種行為紊亂、強(qiáng)迫觀念與行為、認(rèn)知障礙等，可不同程度地干擾和損害兒童的認(rèn)知功能，影響社會(huì)適應(yīng)能力。本病病因尚未明確，具有明顯的遺傳傾向，多見于4～12歲的兒童，患病率約為005%～3%，近年來(lái)發(fā)病呈明顯上升趨勢(shì)，男孩多于女孩[1]。廣東省中醫(yī)院兒科在臨床實(shí)踐中運(yùn)用自擬方益智寧神口服液治療該病，取得了較好的療效[2]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用亞氨基二丙腈腹腔注射建立抽動(dòng)—穢語(yǔ)綜合征模型大鼠，觀察該藥對(duì)模型大鼠行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物spf級(jí)sd大鼠60只，28～30d齡，體質(zhì)量(250±10)g，雌雄各半。由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào):粵監(jiān)證字2008d006，批號(hào)：0037766)。

12實(shí)驗(yàn)藥品亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile，idpn)購(gòu)自alfa aesar公司(批號(hào)：c7323a)，中藥益智寧神口服液(由廣東省中醫(yī)院提供，批號(hào)：080201)，對(duì)照藥物為氟哌啶醇(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，批號(hào)：08031121)。

13儀器及試劑lc26a 型高效液相色譜儀、spd26av 熒光檢測(cè)器、c2r4a 數(shù)據(jù)處理機(jī)均為日本島津公司產(chǎn)品，脫水機(jī)、包埋機(jī)、切片機(jī)和生物顯微鏡等設(shè)備為德國(guó)leica公司產(chǎn)品，微量組織勻漿器為millipore公司產(chǎn)品，zh藍(lán)星c/s型腦立體定位儀，高氯酸、乙二胺四乙酸二鈉(edtana2)均為分析純，甲醇為色譜純，對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品所提供。

14模型復(fù)制參考wakata[3]的方法，將亞氨基二丙腈溶解于生理鹽水，稀釋成濃度100mg/ml，給藥途徑為腹腔注射，劑量為150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。

15分組及給藥選用sd大鼠隨機(jī)分為4組：空白組和模型組各10只，中藥組和西藥組各20只，每組均雌雄各半。治療組在造模后第2天開始給藥，中藥組按20kg的兒童每天口服20ml益智寧神口服液的比例計(jì)算，每只大鼠灌胃約2ml/d;西藥組按20kg的兒童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例計(jì)算，每只大鼠灌胃約015mg/d，連續(xù)14d。

16大鼠行為觀察[4]采用觀察評(píng)分，每次至少觀察1h，主要誘發(fā)癥狀為運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)。(1)運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分：0分：安靜或正?；顒?dòng);1分：能過(guò)度興奮;2分：探究行為增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板運(yùn)動(dòng)(或定型運(yùn)動(dòng))評(píng)分：0分：無(wú)刻板運(yùn)動(dòng);1分：旋轉(zhuǎn)行為;2分：頭和頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多;3分：頭、頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多加旋轉(zhuǎn)行為;4分：頭向側(cè)擺合并頭和頸部的上下運(yùn)動(dòng)過(guò)多。

17神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)[5]第14天將所有實(shí)驗(yàn)大鼠迅速斷頭處死，借助腦立體定位儀，取右腦海馬組織及邊緣系統(tǒng)(包括紋狀體、隔核、層殼核、基底節(jié)、齒狀回)，精確稱質(zhì)量，置入1ml處理液(含01mol/l高氯酸和05g/ledtana2)中，微量組織勻漿器冰溶下勻漿，4℃冰凍離心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色譜法測(cè)定多巴胺(da)和去甲腎上腺素(ne)濃度。測(cè)樣時(shí)，室溫下解凍，進(jìn)樣20μl，以峰面積外標(biāo)法定量。

18統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用spss130和sas913版本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析，各組神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行方差齊性和正態(tài)分布檢驗(yàn)，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=005。

2結(jié)果

21各組行為學(xué)觀察和評(píng)分各組治療前后運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)積分見表1。模型組行為學(xué)評(píng)分與空白組比較，差異有顯著性意義(p<001)，表明造模是成功的。

治療14d后，中、西藥組運(yùn)動(dòng)行為積分和刻板運(yùn)動(dòng)積分降低，與模型組比較差異有顯著性意義(p<005或p<001)，表明中藥組和西藥組對(duì)動(dòng)物行為均有明顯改善作用，中藥組效果與西藥組相仿。

22各組治療前后腦組織da、ne含量變化比較表2結(jié)果顯示：模型組腦組織da水平降低，ne水平升高，與空白組比較差異均有顯著性意義(p<001);治療14d后，中、西藥組均可顯著升高da水平，降低ne水平，與模型組比較差異均有顯著性意義(p<005或p<001)，中藥組作用與西藥組相仿。表1各組治療前后運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)積分比較(x±s)　表2各組治療前后神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

3討論

idpn是一種中樞神經(jīng)毒素，50年代以后就用于神經(jīng)病理學(xué)的研究，本研究參考wakata[3]的方法復(fù)制模型，從神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)兩方面觀察藥物治療對(duì)ts模型動(dòng)物臨床行為學(xué)典型特征的影響。idpn誘發(fā)ts模型大鼠出現(xiàn)明顯刻板運(yùn)動(dòng)和運(yùn)動(dòng)行為異常，如過(guò)度興奮、探究行為、異常跑跳、旋轉(zhuǎn)行為和頭頸部上下側(cè)擺等動(dòng)作均具有ts臨床行為學(xué)的典型特征，有時(shí)出現(xiàn)連續(xù)的嗤鼻、抬舉上肢等動(dòng)作，類似于人類ts患兒喉部發(fā)聲、聳肩等特征行為。本研究通過(guò)對(duì)藥物治療前后ts模型大鼠運(yùn)動(dòng)行為和刻板運(yùn)動(dòng)行為評(píng)分的比較，發(fā)現(xiàn)中藥組在改善動(dòng)物ts典型特征行為方面效果明顯，如頭部、頸部的抽動(dòng)減輕，旋轉(zhuǎn)行為明顯緩解，每次異常行為發(fā)作持續(xù)時(shí)間縮短，異常抽動(dòng)次數(shù)消失，異常跑動(dòng)及不規(guī)律的彈跳運(yùn)動(dòng)明顯減少。

雖然目前對(duì)ts的神經(jīng)生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)還未完全闡明，但基本認(rèn)為中樞神經(jīng)遞質(zhì)，特別是da、ne、5-羥色胺(5ht)等與ts之間關(guān)系密切[5]，因此，探討大腦多巴胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平是證明藥物神經(jīng)生物學(xué)療效的主要依據(jù)。本研究對(duì)大腦海馬區(qū)da和ne水平進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：治療后中藥組da水平明顯升高，而ne水平有所下降，均趨向于正常水平。與ts有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)包括乙酰膽堿、腎上腺素、5ht、多巴胺等，主要分布于紋狀體、隔區(qū)、藍(lán)斑、黑質(zhì)等海馬、基底前腦及邊緣系統(tǒng)，構(gòu)成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[6-8]。有關(guān)藥物治療對(duì)大腦組織不同部位和核團(tuán)神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響文獻(xiàn)報(bào)道并不一致，而且與檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)有很大關(guān)系[8]。本研究結(jié)果初步表明，中藥治療14d后，對(duì)大腦組織da和ne兩種神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化產(chǎn)生顯著影響，對(duì)于治療過(guò)程中以及停藥后神經(jīng)遞質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化仍需進(jìn)一步觀察。

益智寧神口服液的主要組成為：熟地黃、黃芪、白芍、龍骨、遠(yuǎn)志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微溫，入心、肝、腎經(jīng)，本品味厚氣薄，為補(bǔ)血生精、滋陰補(bǔ)腎之要藥，《珍珠囊》曰：“主補(bǔ)血?dú)?，滋腎水，益真陰”。黃芪，味甘，性微溫，入脾、肺經(jīng)，質(zhì)輕升浮，為升陽(yáng)補(bǔ)氣之圣藥?？裳a(bǔ)中氣、益元?dú)狻厝?、壯脾?yáng)，選以補(bǔ)脾益氣。白芍味苦、酸，性微寒，入肝經(jīng)，既能養(yǎng)血斂陰，又能平抑肝陽(yáng)，還能柔肝止痙;而龍骨味甘、澀，性微寒，入心、肝經(jīng)，專攻平肝潛陽(yáng)、鎮(zhèn)靜安神之用，兩者搭配，養(yǎng)陰寧心，平肝潛陽(yáng)。五味子性溫，五味具備，酸能收斂，苦能清熱，咸能滋腎，溫而不燥，既能益氣生津，補(bǔ)腎養(yǎng)心，用其養(yǎng)心滋腎安神;遠(yuǎn)志、石菖蒲有安神益智、化痰開竅之功效。諸藥配伍，具有健脾滋腎、平肝熄風(fēng)、寧神益智、化痰開竅之功效。氟哌啶醇是目前治療ts的最有效藥物之一[9]，療效確切，但因副作用明顯使其臨床應(yīng)用受到限制，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)合臨床用藥發(fā)現(xiàn)，益智寧神口服液的療效與氟哌啶醇無(wú)明顯差異，且療效更加穩(wěn)定，易為患兒及家屬接受。

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第8篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

關(guān)鍵詞：安宮牛黃丸；缺血性中風(fēng)；大腦中動(dòng)脈梗死大鼠模型；細(xì)胞因子

中圖分類號(hào)：R743 R289.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-1349（2011）06-0710-03The Protective Effect of Angong Niuhuang Pill on Experimental Cerebral Ischemia

Liu Zongtao,Sha Dike,Liu Yuanxin,et al

The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University （Urumqi 830000）

Abstract：Objective To investigate the protective effect of Angong Niuhuang pill on experimental cerebral ischemia and its mechanism.Methods Rats were randomly divided into five groups：Sham group,model group,Angong Niuhuang pill group,western medicine group,Chinese traditional medicine with western medicine group.The models with focal cerebral ischemia of rat were established by the suture occluded method.Neurology evaluation was studied at 6 h,24 h,48 h and 72 h after middle cerebral artery occlusion（MCAO）and cerebral ischemia.The coefficient of brain and water content in whole brain were examined.The level of serum interleukin 10 （IL-10） in abdominal aorta was detected by enzyme linked in ununosorbent assay.Results Within four days of MCAO,different degrees of motion disturbances were observed in all rats except sham group.The coefficient of brain,the water content of whole brain and the level of serum IL-10 were obviously increased （P

Key words：Angong Niuhuang pillischemic apoplexymiddle cerebral artery occlusioncytokine缺血性中風(fēng)，西醫(yī)屬于缺血性腦血管病范疇，是由于血管阻塞引起腦缺血損傷而致局灶或全腦的功能障礙。具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高和復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，是威脅人類健康的重大疾病之一。中醫(yī)認(rèn)為，中風(fēng)其本在肝腎虧虛，其標(biāo)在風(fēng)、火、痰、瘀、虛；它們?cè)诎l(fā)病過(guò)程中相互影響，相互作用，臨床出現(xiàn)煩躁神昏譫語(yǔ)，此乃為腦血管意外急性期的關(guān)鍵所在【sup】［1］【/sup】。Framingham流行病學(xué)研究結(jié)果,65%的中風(fēng)為大腦中動(dòng)脈供血區(qū)的血管堵塞所致,與之相應(yīng),大腦中動(dòng)脈區(qū)局部缺血模型是實(shí)驗(yàn)性腦梗死研究中最常用的一種模型,其中大腦中動(dòng)脈（MCA）線栓模型應(yīng)用最為廣泛【sup】［2］【/sup】 。因此本實(shí)驗(yàn)采用MCA線栓法造成局灶性腦缺血大鼠模型，探討中藥制劑安宮牛黃丸灌胃配合西藥甘露醇與呋塞米針靜脈給藥對(duì)缺血性中風(fēng)急性期大鼠腦水腫變化規(guī)律、血清細(xì)胞因子及神經(jīng)行為學(xué)改變的影響，為中西醫(yī)結(jié)合并治,多途徑給藥治療缺血性中風(fēng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康雄性SD大鼠60只,3月齡，體重250 g～300 g,由新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK［新］2003-0003號(hào)環(huán)境溫度控制在25℃～30℃飼養(yǎng)，空氣濕度維持在（50±5）%，用燈照使動(dòng)物體溫維持在（37.5±0.5） ℃。

1.2 藥物與試劑 安宮牛黃丸由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠提供（國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020076，批號(hào)9013181），實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配制成所需濃度；20%甘露醇、胞磷膽堿鈉注射液，由上海旭東海普藥業(yè)有限公司提供。呋塞米（速尿）由上海美優(yōu)制藥有限公司提供。白細(xì)胞介素（IL）-10定量ELISA試劑盒，購(gòu)于上海瑞齊生物科技有限公司（批號(hào)20101221）。

1.3 儀器 顯微手術(shù)器械（上海醫(yī)療手術(shù)器械廠）；電子分析天平（MC,京制0000249號(hào),北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TGL-16C臺(tái)式高速離心機(jī)（金壇市醫(yī)療儀器廠制造）；酶標(biāo)分析儀（美國(guó)伯樂公司制造，X Mark）；參照文獻(xiàn)【sup】［3］【/sup】，選用4-0尼龍線,栓線直徑為0.25 mm～0.28 mm。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組與給藥 將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、安宮牛黃丸組（中藥組）、西藥組、中西藥組；假手術(shù)組、模型組均給予等容量生理鹽水3 mL灌胃；安宮牛黃丸組給予3 mL安宮牛黃丸溶解液灌胃治療；西藥組給予20%甘露醇2.625 mL、速尿0.42 mg尾部靜脈注射；中西藥組在西藥組治療的基礎(chǔ)上加用安宮牛黃丸（將1.134 g安宮牛黃丸加入54 mL水中溶解稀釋）；每只3 mL溶解液灌胃。動(dòng)物造模后連續(xù)灌胃給藥4 d，于末次給藥后分別處死。

1.4.2 大鼠局灶性腦缺血模型的建立 參照文獻(xiàn)采用線栓法制備大腦中動(dòng)脈（MCA）局灶性腦缺血模型【sup】［4］【/sup】:大鼠腹腔注射麻醉（即阿托品、氯胺酮、安定各2 mL、4 mL、4 mL，稀釋至20 mL，0.75 mL/100 g）后,仰臥固定,頸部正中切口,鈍性分離甲狀腺，將其上翻并用無(wú)菌紗布保護(hù)，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈（common carotid artery，CCA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（internal carotid artery，ICA）、頸外動(dòng)脈（externa1 carotid artery，ECA）,并在ECA、ICA分叉處結(jié)扎ECA,右側(cè)CCA剪口約0.2 mm的側(cè)“V”字形切口，插入頭端燒成圓鈍形直徑為0.28 mm的尼龍線,使線栓經(jīng)過(guò)CCA分叉處進(jìn)入ICA，到達(dá)MCA起始處，進(jìn)線長(zhǎng)度約（18.5±0.5） mm,感覺有阻力時(shí)即停止插入，并向外稍拉出一點(diǎn)即可實(shí)現(xiàn)MCA起始端堵塞MCA所有的血液來(lái)源,然后將CCA連同尼龍魚線一起結(jié)扎，扎緊備線，甲狀腺?gòu)?fù)位，關(guān)閉并縫合皮膚切口。假手術(shù)組大鼠接受相似手術(shù)處理，但是不插入線栓?？p合皮膚,實(shí)現(xiàn)MCAO造模完成。動(dòng)物入選標(biāo)準(zhǔn)（按Longa五級(jí)評(píng)分法【sup】［5］【/sup】取神經(jīng)功能行為評(píng)分為1分、2分、3分、4分的動(dòng)物）：選擇蘇醒后左上肢屈曲、行走時(shí)向左側(cè)旋轉(zhuǎn)或左側(cè)肢體癱瘓的大鼠為栓堵成功者進(jìn)行實(shí)驗(yàn),否則視為栓堵失敗,棄之不用。模型成功后，分別于MCAO后6 h、24 h、48 h、72 h進(jìn)行神經(jīng)功能行為評(píng)分；大鼠在斷頭處死前取血清檢測(cè)IL-10含量:各組大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血法分別取全血約5 mL，室溫下放置20 min，然后以2 500 r/min離心10 min，小心吸取上清液即為血清標(biāo)本（溶血標(biāo)本不用），常溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

1.5.1 神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分測(cè)定 動(dòng)物蘇醒后，按Longa法【sup】［5］【/sup】對(duì)其神經(jīng)功能行為進(jìn)行5分制評(píng)分：0分，無(wú)明顯神經(jīng)病學(xué)癥狀；1分，不能完全伸展左側(cè)前爪；2分，向左側(cè)旋轉(zhuǎn)；3分，行走時(shí)向左側(cè)傾倒；4分，不能自行行走。

1.5.2 腦系數(shù) 動(dòng)物稱重,造模給藥4 d后斷頭取腦,沿腦橋上界水平切斷,取全腦稱重,腦系數(shù)全腦重÷體重×100%。

1.5.3 腦組織含水量的測(cè)定 造模給藥4 d后斷頭取腦，去除小腦、嗅球、低位腦干等，用濾紙吸干表面水分，稱量腦濕重，105 ℃烘烤24 h至恒重，精確稱量干重，采用Elliot【sup】［6］【/sup】公式計(jì)算腦組織含水量。

1.5.4 血清IL-10含量測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)IL-10含量，具體操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS 17.0軟件做統(tǒng)計(jì)分析；組間比較用單因素方差分析及Student-Newman-Keuls test統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài) 假手術(shù)組大鼠麻醉蘇醒后精神好，反應(yīng)靈活，活動(dòng)度大，全部存活，未見明顯對(duì)側(cè)肢體活動(dòng)障礙。其余各組術(shù)后4 d精神均較造模前差，反應(yīng)遲鈍，飲食較前減少，自潔能力下降，扎堆蜷縮，均出現(xiàn)不同程度的肢體活動(dòng)障礙，而以模型組為甚；其中模型組、西藥組、中西藥組分別有2只大鼠造模后半小時(shí)左右死亡；中藥組有1只大鼠造模后昏迷不醒，于第2天死亡。

2.2 體重指數(shù) 大鼠造模前稱重（g）為基礎(chǔ)值，造模后第1天、第2天、第3天、第4天分別稱重，取各時(shí)間點(diǎn)體重與基礎(chǔ)值之比,即體重指數(shù)。與模型組比較，各組動(dòng)物術(shù)后均有體重漸回升的過(guò)程；而假手術(shù)組體重上升較明顯，與其他各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分 假手術(shù)組大鼠都沒有神經(jīng)功能行為學(xué)癥狀，而模型組、中藥組、西藥組、中西藥組大鼠則有不同程度的神經(jīng)功能行為學(xué)表現(xiàn)。與模型組大鼠比較，中藥組、西藥組、中西藥組均可降低大鼠的神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分（P

2.4 各組對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦水腫的影響（見表3） 與模型組比較，其他各組大鼠腦系數(shù)、腦組織含水量明顯降低（P

表3 各組對(duì)大鼠腦系數(shù)、腦組織含水量的影響（x±s）%

2.5 各組對(duì)局灶性腦缺血大鼠血清IL-10的影響（見表4） 與假手術(shù)組比較，各造模組IL-10均明顯升高（P

表4 各組對(duì)大鼠血清IL-10表達(dá)的影響（x±s）ng/L

3 討 論

安宮牛黃丸是我國(guó)傳統(tǒng)藥物中久負(fù)盛名的良方，是中醫(yī)治療中風(fēng)之要藥。安宮牛黃丸出自清代吳鞠通《溫病條辨》，素有“救急癥于即時(shí)，挽垂危于頃刻”的美譽(yù)，由牛黃、水牛角濃縮粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黃、黃連、黃芩、梔子、郁金、冰片等11味藥組成。具有清熱解毒、豁痰開竅的功效，主治熱病、邪入心包、高熱驚厥、神昏譫語(yǔ)。臨床研究表明，安宮牛黃丸制劑具有改善缺血性中風(fēng)急性期神經(jīng)功能缺損情況的作用【sup】［7］【/sup】。對(duì)于急性中風(fēng)患者，安宮牛黃丸配合常規(guī)西醫(yī)綜合搶救治療明顯優(yōu)于單純常規(guī)綜合搶救治療【sup】［8］【/sup】。

IL-10作為一種抗炎性細(xì)胞因子，在缺血性腦損傷中具有腦保護(hù)作用。其保護(hù)作用是通過(guò)縮小腦梗死灶范圍，減緩炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮的【sup】［9］【/sup】。本試驗(yàn)結(jié)果顯示模型組大鼠血清IL-10升高，推測(cè)可能是動(dòng)物在受到應(yīng)激性損傷之后機(jī)體的自身保護(hù)機(jī)制而引起的；安宮牛黃丸組大鼠血清IL-10升高顯著，與單純西藥甘露醇、呋塞米、胞磷膽堿靜脈用藥療效未見明顯差別，而中西藥合用大鼠血清IL-10水平升高更為顯著，從而最終保護(hù)腦細(xì)胞，改善神經(jīng)功能缺損癥狀，降低缺血性中風(fēng)大鼠的死亡率、致殘率；這提示改變抗炎性因子IL-10的分泌為安宮牛黃丸對(duì)局部腦缺血大鼠腦損傷保護(hù)作用的機(jī)制之一?？傊?，雖然傳統(tǒng)中藥安宮牛黃丸給藥途徑受限,但仍是具有特殊功效的良藥，其與西藥聯(lián)用也許會(huì)提高臨床療效。

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第9篇：動(dòng)物行為學(xué)研究方法范文

[關(guān)鍵詞] 腸易激綜合征；動(dòng)物模型；建模方法；觀測(cè)指標(biāo)

[中圖分類號(hào)] R574 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）09（c）-0047-04

[Abstract] Irritable bowel syndrome （IBS） is a kind of functional bowel disease， and its etiology and pathogenesis has not been fully elucidated. At present， the main treatment principle is still symptomatic therapy. There are a lot of researches on IBS animal model， in which rats and mice are the most commonly animals used. Model construction methods are so many， such as physical and chemical stimulation， psychological stress， drug induced diarrhea， pathogen infection， compound method and others. The observation indexes included general situation， intestinal sensitivity test， intestinal transit function， pathological examination， and the detection of related brain gut peptide. Animal model now proceed only from a certain aspect of pathophysiological mechanism， however the pathogenesis of IBS is complex， inducing factors individual and diversified. So current animal model has limitations to some extent， and need further study. This paper aims to review the research progress on animal model of IBS.

[Key words] Irritable bowel syndrome； Animal model； Model construction methods； Observation indexes

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種功能性腸病，它是以腹痛或腹部不適為特征，并伴有排便習(xí)慣或糞便性狀的異常。IBS的患病率在不同地區(qū)差異較大，全球范圍內(nèi)從1.1%至45.0%不等，中國(guó)的患病率為5.0%～6.0%[1]。到目前為止，關(guān)于IBS的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，臨床上的主要治療原則仍是對(duì)癥治療。IBS并不會(huì)危及生命，但對(duì)患者的生活質(zhì)量有很大影響，同時(shí)，因其無(wú)法完全治愈，也大大增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

作為科研先導(dǎo)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以彌補(bǔ)臨床研究的不足，尤其是在涉及倫理問(wèn)題和一些容易出現(xiàn)偏倚的臨床研究方面，有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。因此，研究客觀性、公認(rèn)性、重復(fù)性較好的IBS動(dòng)物模型對(duì)認(rèn)識(shí)發(fā)病機(jī)制、病理生理和藥物治療有積極的作用[2-3]。本文擬對(duì)IBS動(dòng)物模型研究進(jìn)展作一綜述。

1 研究對(duì)象

目前國(guó)內(nèi)外最常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是大鼠與小鼠。李熠萌等[4-5]對(duì)近10年中醫(yī)藥對(duì)IBS的實(shí)驗(yàn)研究方法進(jìn)行了綜述，結(jié)果表明63%的文獻(xiàn)均采用大鼠作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛷?fù)制的對(duì)象，其中Wistar大鼠占25%，新生SD大鼠占20%，成年SD大鼠占18%；另有37%的文獻(xiàn)選擇了其他動(dòng)物，如小鼠（20%）、豚鼠（8%）、兔（8%）等。劉清華[2]提出可以用與人類更相近的靈長(zhǎng)類等動(dòng)物作為研究對(duì)象，使動(dòng)物模型更接近人類。

2 建模方法

2.1便秘型腸易激綜合征模型進(jìn)展

彭麗華等[6]采用冰水灌胃法復(fù)制大鼠便秘模型，方法如下：每只給予冰水（0～4℃生理鹽水）2 mL，于上午8：00開始灌胃，每天1次，共14 d。停止灌胃后再觀察14 d。期間始終給予正常飼食、飲水。該模型是以IBS模型新概念，為IBS研究提供新的條件。近年來(lái)，許多學(xué)者都采用這種方法構(gòu)建便秘型腸易激綜合征動(dòng)物模型，如唐洪梅等[7]。

陸迅等[8]用結(jié)直腸球囊擴(kuò)張刺激+限水法構(gòu)建便秘型腸易激綜合征大鼠模型：SD大鼠，使用Braun 8F導(dǎo)尿管自制的球囊，蘸少許石蠟油，在清醒的狀態(tài)下，自輕柔插入，深度4～5 cm，大致達(dá)到大鼠的降結(jié)腸部位。每次刺激之前，檢查球囊的密閉性。向氣囊充氣，維持腸道壓力7.98 kPa（60 mmHg）（1 mmHg = 0.133 kPa），持續(xù)1 min，然后撤氣。給予擴(kuò)張刺激前，可預(yù)先刺激大鼠部，使其排盡大便，以減少糞團(tuán)對(duì)擴(kuò)張程度的影響。每天刺激1次，持續(xù)15 d。15 d后，大鼠禁水不禁食，連續(xù)3 d。該模型表現(xiàn)為便秘及內(nèi)臟高敏感性，能較好地模擬人類。

王金貴等[9]采用冰水灌胃與冰敷束縛相結(jié)合制備便秘型IBS白兔模型。

2.2腹瀉型腸易激綜合征模型進(jìn)展

腹瀉型模型構(gòu)建方法較多，有物理化學(xué)刺激、心理應(yīng)激、藥物致瀉、病原體感染、復(fù)合方法及其他方法等。

物理化學(xué)刺激： Yasuo等[10]采用冷應(yīng)激方法構(gòu)建模擬IBS腹痛的SART大鼠應(yīng)激模型：4周齡SD大鼠置于低溫（0℃）與室溫（24℃）交替變換的環(huán)境，每小時(shí)變換一次，9：30～16：30期間重復(fù)操作；之后從16：30～9：30，持續(xù)置于低溫環(huán)境（0℃）。上述操作重復(fù)四天，建立SART大鼠應(yīng)激模型。建模期間大鼠自由進(jìn)食水，應(yīng)激后置于24℃以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Salaga等[11]用蓖麻油灌胃小鼠致瀉構(gòu)建模型。陸敏等[12]采用AL-Chaer方法對(duì)幼齡大鼠進(jìn)行結(jié)腸刺激構(gòu)建模型，具體方法：SD孕鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，幼雄大鼠出生第8、10、12天，接受結(jié)腸氣囊擴(kuò)張刺激，每天一次，共三次。待出生60 d后開始實(shí)驗(yàn)。該方法建造的模型大鼠呈內(nèi)臟高敏感性，且能持續(xù)至成年期。

心理應(yīng)激：通過(guò)各種應(yīng)激刺激使動(dòng)物產(chǎn)生煩躁、恐懼等中樞興奮性增高的方法來(lái)構(gòu)建模型，應(yīng)激刺激有束縛、避水、夾尾、慢性應(yīng)激等，可單獨(dú)也可同時(shí)使用，復(fù)合應(yīng)用兩種刺激方法較為常見。Ning等[13]用束縛的方法構(gòu)建急性應(yīng)激模型。Jianhua等[14]運(yùn)用以下7種刺激構(gòu)建慢性應(yīng)激模型：12 h通宵照明；45℃熱環(huán)境5 min；禁水24 h；4℃寒冷環(huán)境3 min；夾尾1 min；水平振動(dòng)40 min；禁食24 h。石君杰等[15]用束縛+夾尾刺激造模，王艷杰等[16]用慢性應(yīng)激+束縛刺激造模。

藥物致瀉：劉春等[17]通過(guò)番瀉葉灌胃造模：除正常組外，其余各組大鼠均于上午8：00給予番瀉葉灌胃，按10 mL/kg劑量，每天1次，連續(xù)4周；并從番瀉葉灌胃第2周起用木夾夾尾以激怒大鼠，令其打架，每天30 min。第5周起停止造模。亦有很多其他人運(yùn)用藥物致瀉造模，但大多都是與其他刺激因素綜合運(yùn)用。

病原體感染：Cheng等[18]通過(guò)口服方法使小鼠感染體內(nèi)旋毛蟲，誘導(dǎo)感染后腸易激綜合征（post-infectio Irritable bowel syndrome，PI-IBS）。Huan等[19]亦用旋毛蟲感染誘導(dǎo)PI-IBS小鼠模型，這種模型小鼠幾乎沒有胃腸道炎性反應(yīng)，而腸道高敏感性卻持續(xù)存在。Walter等[20]用灌胃活空腸彎曲菌法構(gòu)建PI-IBS模型：大鼠連續(xù)2 d糞便中空腸彎曲菌陰性，證明體內(nèi)空腸彎曲菌已排盡，飼養(yǎng)1個(gè)月。之后再飼養(yǎng)3個(gè)月以達(dá)到明確的后感染狀態(tài)，這時(shí)大鼠大便性狀改變，與IBS患者癥狀相似。

復(fù)合方法：復(fù)合方法主要有藥物致瀉+心理應(yīng)激（束縛等）、化學(xué)刺激+心理應(yīng)激（束縛等）以及多種因素綜合刺激等。張濤等[21]和張道英等[22]都采用番瀉葉灌胃+束縛應(yīng)激刺激的方法造模。張聲生等[23]用乙酸灌腸加束縛應(yīng)激進(jìn)行造模。閆雪等[24]用母嬰分離、腸道化學(xué)刺激、束縛刺激三者結(jié)合為綜合因素刺激造模。

其他方法：Bo等[25]用稀釋的乙酸刺激新生幼鼠誘導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛模型。另外還有通過(guò)基因?qū)用孢M(jìn)行造模的，如Moechars等[26]用基因敲除的方法造模，但這方面的研究尚不太多，有待進(jìn)一步深入研究。

3 觀察和檢測(cè)指標(biāo)

3.1一般情況

各組大鼠每周稱重1次，造膜及治療期間觀察大鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)色澤、進(jìn)食、飲水、活動(dòng)及大小便情況[17]。

行為學(xué)觀測(cè)指標(biāo)的選擇：腹瀉型IBS應(yīng)該出現(xiàn)明顯的拱背（證明有腹痛）、腹瀉等主要的行為學(xué)特征，證明IBS的存在；肝郁應(yīng)出現(xiàn)對(duì)外界刺激基本較少興奮，淡漠，偶則抓耳亂竄、煩躁不寧、情緒不穩(wěn)定、易激怒、易受驚嚇等的行為學(xué)特征；脾虛出現(xiàn)食少納呆、體重減輕、活動(dòng)少、易疲勞（打斗時(shí)間梯減）、嗜睡、倦臥、扎堆、拱背、毛發(fā)枯而蓬亂不澤、污穢等的行為學(xué)特征。應(yīng)該詳細(xì)記錄大鼠出現(xiàn)以上癥狀的時(shí)間以及特點(diǎn)[27]。

3.2腸道敏感性測(cè)試

腹肌回縮實(shí)驗(yàn)（abdominal withdrawal reflex，AWR）和直腸擴(kuò)張（colorectal distension，CRD）反應(yīng)：將大鼠放入一固定裝置中，使其只能前后活動(dòng)，不能轉(zhuǎn)身，經(jīng)插入球囊，固定氣囊，向球囊內(nèi)注入空氣給予不同壓力刺激，在不同壓力下觀察大鼠對(duì)直腸球囊擴(kuò)張的腹肌回縮反射，每次持續(xù)擴(kuò)張20 s，同時(shí)觀察大鼠對(duì)不同壓力下所致直腸擴(kuò)張的反應(yīng)，根據(jù)其反應(yīng)記錄半定量行為學(xué)評(píng)分。評(píng)分判定標(biāo)準(zhǔn)：0分，大鼠對(duì)結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)無(wú)行為學(xué)的反應(yīng)；1分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)身體靜止不動(dòng)，頭部運(yùn)動(dòng)減少，為初始感覺閾；2分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹部肌肉收縮，但腹肌未抬離桌面，為不適閾值；3分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹肌收縮并抬離桌面，為疼痛閾值；4分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)骨盆抬起，身體呈弓形，為最大耐受閾值[28]。

3.3腸道轉(zhuǎn)運(yùn)功能

腸道推進(jìn)測(cè)試：胃腸道推進(jìn)是評(píng)價(jià)胃腸動(dòng)力和致瀉、止瀉作用的重要參數(shù)。模型大鼠禁食（不禁水）1 d后，用5 mL的注射灌胃注射器，給模型大鼠灌胃活性碳墨水3 mL，15 min后用腹腔注射 10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）的方法處死大鼠。處死后立即取出整個(gè)小腸，浸入5%福爾馬林液以終止蠕動(dòng)，水洗后，測(cè)量活性炭在小腸的移動(dòng)距離，用占小腸全長(zhǎng)（幽門到盲腸末）的百分率表示[24]。

3.4病理學(xué)檢查

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，取結(jié)直腸組織標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)固定、包埋、切片，作病理形態(tài)學(xué)檢查。HE染色后，光鏡下觀察結(jié)直腸組織標(biāo)本表面層是否完整，有無(wú)潰瘍[24]，杯狀細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量變化，水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況等；甲苯胺藍(lán)染色后，光鏡下進(jìn)行肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)[29]。

3.5相關(guān)腦腸肽的檢測(cè)

腦腸肽是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道神經(jīng)系統(tǒng)的小分子多肽，與IBS發(fā)病密切相關(guān)，包括有5-羥色胺（5-HT）、P物質(zhì)（SP）、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子、血管活性腸肽（VIP）、生長(zhǎng)抑素等[30]。檢測(cè)方法：眼眶取血，離心后取血清，于-20℃保存，按5-HT、SP、VIP等的試劑盒說(shuō)明步驟測(cè)定光密度（OD）值；處死動(dòng)物后，取結(jié)腸組織，研漿離心取上清液，按試劑盒操作說(shuō)明測(cè)OD值，并計(jì)算結(jié)腸組織相應(yīng)的含量[8]。

4 評(píng)價(jià)

由于IBS的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，臨床表現(xiàn)也不盡相同。因此，IBS患者的臨床癥狀很難通過(guò)一種動(dòng)物模型來(lái)確切地反映。當(dāng)前的IBS動(dòng)物模型，大多僅從IBS病理生理機(jī)制中的某一方面著手，來(lái)模擬IBS的某些特征，盡管都有其一定的合理性，具有一定的理論基礎(chǔ)，但因IBS發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性及其誘發(fā)因素的個(gè)體化與多樣性，因而目前的動(dòng)物模型均有不同程度的局限性[31]。

在過(guò)去的十幾年里，各種動(dòng)物模型已經(jīng)發(fā)展到了解內(nèi)臟超敏感性的基本機(jī)制及應(yīng)激對(duì)內(nèi)臟痛覺通路的影響。而在人類中，對(duì)內(nèi)臟敏感性的評(píng)價(jià)主要是基于對(duì)腸道擴(kuò)張的感知意識(shí)。這種對(duì)主觀反映的評(píng)估方法不能用于動(dòng)物研究[32]。

因此，應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步研究出更接近人體內(nèi)復(fù)雜機(jī)制的IBS動(dòng)物模型，并且找出對(duì)內(nèi)臟高敏感性更加準(zhǔn)確有效的評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)一步完善造模方法與途徑，來(lái)為臨床研究與治療提供更大的幫助。

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