細(xì)胞研究精選(九篇)

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第1篇：細(xì)胞研究范文

NKT細(xì)胞(CD1ddependent natural killerlike T cells)作為一類新型的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞， 其主要特征為T細(xì)胞受體(TCR)基因表達(dá)的恒定性、 CD1d的限制性以及細(xì)胞因子產(chǎn)生的迅速、 高水平性。NKT細(xì)胞既能增強(qiáng)免疫反應(yīng)又能抑制免疫反應(yīng)， 從而在抗腫瘤、 抗感染、 抑制自身免疫性疾病及移植耐受中發(fā)揮重要的作用?，F(xiàn)就近年來(lái)有關(guān)NKT細(xì)胞的研究進(jìn)展綜述如下。

1 NKT細(xì)胞的命名

于1987年在小鼠中首次發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞之后， NKT細(xì)胞定義為既表達(dá)TCR又表達(dá)NK1.1（NKRP1c或CD161c）的一類淋巴細(xì)胞， 而命名為NK1.1+T細(xì)胞(natural killer T cells)。隨著研究的逐漸深入， 發(fā)現(xiàn)此命名并不準(zhǔn)確， 因?yàn)樵谌祟惒⒉皇撬斜磉_(dá)CD161的T細(xì)胞都是NKT細(xì)胞， 也并不是NKT細(xì)胞均表達(dá)CD161。在小鼠中除C57BL/6小鼠外其他小鼠并不表達(dá)NK1.1， 一些其他的T細(xì)胞（包括傳統(tǒng)的病毒特異性的CD8+T細(xì)胞）能誘導(dǎo)表達(dá)NK1.1。而且NKT細(xì)胞雖然能表達(dá)穿孔素、 FasL及其他受體（例如NKG 2D）， 但自然殺傷的細(xì)胞毒活性并不是NKT細(xì)胞的主要效應(yīng)機(jī)制， 因此更為準(zhǔn)確的命名為CD1d依賴的自然殺傷樣的T細(xì)胞(CD1ddependent natural killerlike T cells)[1]。

2 NKT細(xì)胞的發(fā)生及發(fā)育

NKT細(xì)胞產(chǎn)生于圍產(chǎn)期的胸腺， 由CD4+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞偏離于主流的T細(xì)胞分化途徑而分化產(chǎn)生[2]。 NKT細(xì)胞在胸腺經(jīng)歷了復(fù)制周期， 因此這部分?jǐn)?shù)目非常少的經(jīng)歷隨機(jī)TCR重排形成恒定的TCRα鏈的細(xì)胞在出生3周后增殖至有意義的水平。其陽(yáng)性選擇是由表達(dá)CD1d的骨髓衍生的細(xì)胞而不是胸腺皮質(zhì)上皮細(xì)胞介導(dǎo)， 這是NKT細(xì)胞的特殊性。在骨髓衍生的表達(dá)CD1d的細(xì)胞中胸腺細(xì)胞已基本被認(rèn)定為陽(yáng)性選擇至關(guān)重要的細(xì)胞。在成熟晚期階段NKT細(xì)胞表達(dá)幾種分子， 包括IL7R、 CD24、 DX5、 NK1.1和Ly49家族NKR。NK1.1表達(dá)的誘導(dǎo)可以發(fā)生在胸腺， 但大部分從胸腺移出的細(xì)胞NK1.1為陰性， 表明NKT細(xì)胞的最終成熟階段也可發(fā)生在外周血。

3 NKT細(xì)胞的分型

目前所指的NKT細(xì)胞均為CD1d限制性， 根據(jù)TCR (小鼠Vα14Jα18， 人類Vα24Jα18) 的表達(dá)與否， 而將NKT細(xì)胞分為Vα14Jα18+Ⅰ型NKT細(xì)胞和Vα14Jα18ⅡNKT細(xì)胞， 通常所說的NKT細(xì)胞即為Ⅰ型NKT細(xì)胞[1]。

根據(jù)NK1.1的表達(dá)與否將NKT細(xì)胞分為如下2型: (1)NK1.1+ NKT細(xì)胞: 根據(jù)CD4、 CD8的表達(dá)與否， 小鼠的此類NKT細(xì)胞分為CD4+和(CD4-CD8-) DN 2個(gè)亞群。人類的NKT細(xì)胞分為CD4+、 CD8+和(CD4-CD8-) DN 3個(gè)亞群。(2)NK1.1-NKT細(xì)胞: 此類細(xì)胞大多表達(dá)CD4。目前研究認(rèn)為: 在胸腺NK1.1-NKT細(xì)胞是NK1.1+NKT細(xì)胞的前體， 有可能在外周血繼續(xù)成熟[2]。然而在體外實(shí)驗(yàn)中觀察到NK1.1+NKT細(xì)胞在αGalCer刺激后出現(xiàn)NK1.1的表達(dá)下調(diào)， 而表現(xiàn)為NK1.1-， 所以NK1.1-NKT細(xì)胞又可能為體內(nèi)接受刺激后的細(xì)胞?；谏鲜鲅芯?， 目前認(rèn)為NK1.1的表達(dá)與否與下列因素有關(guān): 遺傳背景、 NKT細(xì)胞是否成熟、 是否被刺激及其組織定位。

各不同物種、 不同器官中NKT細(xì)胞亞群的比例、 功能及所分泌的細(xì)胞因子均不同[3]。Hammond等的研究表明: 小鼠的CD4+和(CD4-CD8-) DN NKT細(xì)胞各以不同的比例存在于不同的組織中， 并且有著不同的效應(yīng)功能。在體外實(shí)驗(yàn)中antiCD3刺激下CD4+NKT細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL4。Baev等[4]的研究表明， 在人類CD4+NKT細(xì)胞產(chǎn)生Th0樣的細(xì)胞因子IL4和IL13以及IFNγ， 而CD4-CD8-NKT和CD8+NKT細(xì)胞產(chǎn)生Th1樣的細(xì)胞因子IFNγ。并且各亞群細(xì)胞在趨化因子受體(如CCR5或CCR6)、 NK細(xì)胞受體(如CD94或NKG2D)， 介導(dǎo)細(xì)胞毒分子(如FasL、 TNF、 穿孔素)的表達(dá)模式方面也有所不同， 并影響了各自的功能。Rossignol等對(duì)CD4+NKT和CD4-CD8-NKT細(xì)胞在促Th2活性方面（通過其促自身的B細(xì)胞分泌免疫球蛋白的能力）進(jìn)行了比較， 結(jié)果顯示， CD4+NKT細(xì)胞促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgG和IgE（不包括IgM）， 即發(fā)揮了促Th2樣活性， 而CD4-CD8-NKT細(xì)胞卻不能。CD4+NKT細(xì)胞主要表達(dá)CD127 (IL7受體)， 而CD4-NKT細(xì)胞主要表達(dá)CD122 (IL2/IL15受體共用β鏈)， 因此CD4+NKT細(xì)胞主要對(duì)IL7起反應(yīng)， 而CD4-NKT細(xì)胞主要對(duì)IL15起反應(yīng)。同一亞群的NKT細(xì)胞由于所在的器官不同行使不同的功能， 如肝臟中的(CD4-CD8-) DN NKT細(xì)胞主要表現(xiàn)為抗腫瘤的活性; 而胸腺中的(CD4-CD8-) DN NKT細(xì)胞主要表現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)的活性。

4 NKT細(xì)胞的分布

在傳統(tǒng)T細(xì)胞所分布的各組織中都有NKT細(xì)胞的分布， 但其主要分布于肝、 骨髓、 胸腺、 脾及外周血中， 此外臍血中也含有一定數(shù)量的NKT細(xì)胞。各器官所含有的NKT細(xì)胞的比例、 分型及激活后的表型亦不同。其中肝臟中NKT細(xì)胞占總T細(xì)胞的30%～50%， 骨髓中可占總T細(xì)胞的20%～30%， 在成熟胸腺細(xì)胞中則占到10%～20%， 在脾細(xì)胞中占到0.5%～1%， 而在外周血中僅占0.1%～0.5%。CD4+NKT細(xì)胞在胸腺及臍血NKT細(xì)胞中所占的比例為90%， 而外周血中只占40%。

5 NKT細(xì)胞的免疫活化

NKT細(xì)胞的抗原識(shí)別與傳統(tǒng)的T細(xì)胞不同， 不能識(shí)別由經(jīng)典的MHCⅠ、 Ⅱ類分子提呈的抗原肽， 而只識(shí)別由細(xì)胞表面CD1d分子提呈的脂類、 蛋白質(zhì)抗原[5]， 在這些抗原的刺激下NKT細(xì)胞被激活， 并迅速的產(chǎn)生IL4、 IFNγ、 IL10、 IL13等細(xì)胞因子， 從而在抗腫瘤、 抗感染、 抑制自身免疫性疾病及移植免疫中發(fā)揮重要的作用。

5.1 NKT細(xì)胞的自身配體及合成的配體 最早， 人們從海綿提取物中發(fā)現(xiàn)αGalCer（α半乳糖神經(jīng)酰胺）， 其能特異性的激活NKT細(xì)胞。之后于1993年由日本的Kirin Brewery公司首次合成并命名為AGLs， 并相繼出現(xiàn)其類似物AGL582， 命名為KRN 7000， 以及其衍生物βGalCer、 OCH、 αCGalCer、 C20∶2。此期間發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞的蛋白質(zhì)抗原SEB（金黃色葡萄球菌腸毒素B）及天然抗原[5]， 如寄生蟲的糖基磷脂酰肌醇、 分枝桿菌胞壁的磷脂酰肌醇甘露糖等。于2004年Zhou等發(fā)iGb3(isoglobotrihexosylceramide)為NKT細(xì)胞的天然配體， 在NKT細(xì)胞從主流T細(xì)胞前體池的成熟過程中的陽(yáng)性選擇中起到重要的作用[6]。于2007年P(guān)orubsky等對(duì)iGb3進(jìn)一步研究， 結(jié)果表明， 其作為天然配體在NKT細(xì)胞的陽(yáng)性選擇中確實(shí)起到作用， 但在其缺失時(shí)可被其他的抗原代替， 而不影響NKT細(xì)胞的陽(yáng)性選擇[7]。

5.2 NKT細(xì)胞的免疫活化 NKT細(xì)胞的表面表達(dá)近期激活或記憶T細(xì)胞的特征標(biāo)志CD44hi CD62LCD69+， 在αGalCer等抗原的刺激下， 其與CD1d、 TCR形成三聯(lián)體激活NKT細(xì)胞， NKT細(xì)胞數(shù)目增加， 并同時(shí)迅速的產(chǎn)生大量的IL4、 IFNγ、 IL10、 IL13等細(xì)胞因子， 并或者通過細(xì)胞間直接接觸的作用方式， 而作用于NK細(xì)胞、 B細(xì)胞、 DC細(xì)胞和T細(xì)胞， 從而影響了整個(gè)免疫網(wǎng)絡(luò)。

NKT細(xì)胞在接受刺激后所分泌的細(xì)胞因子受下列因素影響: (1)不同的NKT細(xì)胞亞群所分泌的細(xì)胞因子不同。CD4+NKT細(xì)胞在絲裂原的刺激下同時(shí)分泌Th1和Th2細(xì)胞因子， 而CD4-CD8-和CD8+NKT細(xì)胞主要產(chǎn)生Th1樣的細(xì)胞因子， 例如IFNγ和TNFα。在小鼠NKT細(xì)胞中CD4的表達(dá)與否與Th2細(xì)胞因子的表達(dá)增加與否相關(guān)。但細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色實(shí)驗(yàn)顯示， 大部分NKT細(xì)胞均組成性的同時(shí)表達(dá)IL4及IFNγ mRNA， 因此NKT細(xì)胞對(duì)Th1和Th2細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)部分可能發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后時(shí)相[8]， 然而NKT細(xì)胞這種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的模式尚不清楚。同時(shí)CD4+和CD4-NKT細(xì)胞亞群所表達(dá)的趨化因子受體也明顯不同， 表明它們各自的轉(zhuǎn)移和歸巢的特性亦不同[9， 10]。(2)NKT細(xì)胞接受的刺激的不同， CD1d/配體與TCR結(jié)合的親和力的不同均可導(dǎo)致分泌的細(xì)胞因子的不同。如KRN7000促使NKT細(xì)胞同時(shí)分泌Th1和Th2細(xì)胞因子， 而OCH偏向分泌Th2細(xì)胞因子; 自身CD1d/配體與TCR的親和力較低， 刺激NKT細(xì)胞后使其持續(xù)的偏向分泌Th2細(xì)胞因子而在內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定的情況下維持對(duì)自身的耐受。(3)NKT細(xì)胞接受刺激時(shí)所處的微環(huán)境對(duì)其受刺激后所分泌的細(xì)胞因子有著重要的影響， 其中微環(huán)境中的細(xì)胞因子及抗原提呈細(xì)胞（APC）的性質(zhì)是2個(gè)重要因素。如IL12、 IL15促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子的分泌， IL7促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子的分泌; 非專職APC(如胃腸道上皮細(xì)胞、 皮膚角質(zhì)細(xì)胞、 肝細(xì)胞)促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子的分泌[11]。

激活的NKT細(xì)胞幾乎對(duì)所有的血細(xì)胞， 包括NK細(xì)胞、 DC細(xì)胞、 B細(xì)胞及T細(xì)胞均有所作用。在αGalCer合成抗原的刺激下， NKT細(xì)胞促使DC細(xì)胞的成熟， 在應(yīng)用αGalCer 24 h后DC細(xì)胞的成熟標(biāo)志MHCII類分子、 CD40、 CD80和CD86表達(dá)上調(diào)， 但多次注射αGalCer后上述DC細(xì)胞的表面標(biāo)志下調(diào)至未刺激時(shí)水平[12]。通過CD40LCD40的相互作用， 刺激DC細(xì)胞釋放IL12; 促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖， 并增加NK細(xì)胞的IFNγ的分泌及其細(xì)胞毒活性; 同時(shí)能促進(jìn)B細(xì)胞的增殖及產(chǎn)生免疫球蛋白， 在MHCⅡ-/-的小鼠模型中顯示NKT細(xì)胞能代替?zhèn)鹘y(tǒng)的CD4+T細(xì)胞輔助B細(xì)胞分泌免疫球蛋白， 并且可見到在缺乏NKT細(xì)胞的老鼠中循環(huán)抗體的衰退要加。NKT細(xì)胞分泌的IL4上調(diào)外周血B細(xì)胞的激活標(biāo)志CD69， 并能影響CD4+T細(xì)胞的細(xì)胞因子的分泌， 擴(kuò)大CD8+T細(xì)胞對(duì)蛋白抗原的反應(yīng)。NKT細(xì)胞還可以以細(xì)胞間直接接觸的方式促進(jìn)調(diào)節(jié)性細(xì)胞(Treg cells)的增殖[13]。

6 NKT細(xì)胞與疾病

NKT細(xì)胞既有增強(qiáng)免疫反應(yīng)又有抑制免疫反應(yīng)的雙向免疫調(diào)節(jié)功能， 因此與多種疾病如腫瘤、 自身免疫性疾病及移植耐受等密切相關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞在某些腫瘤患者（如前列腺癌、 多發(fā)性骨髓瘤等）及自身免疫性疾病患者（如糖尿病、 多發(fā)性硬化、 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 特發(fā)性血小板減少性紫癜、 再生障礙性貧血等）中數(shù)目減少， 并且在腫瘤患者中NKT細(xì)胞分泌IFNγ的能力降低[14]。在小鼠腫瘤模型中NKT細(xì)胞的抗腫瘤作用已非常明確。David等在腫瘤患者體內(nèi)擴(kuò)增NKT細(xì)胞的研究， 以及Ishikawa等在晚期肺癌患者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)表明患者體內(nèi)應(yīng)用αGalCer后NKT細(xì)胞數(shù)目明顯增加， 從而起到抗腫瘤的作用[15， 16]。現(xiàn)認(rèn)為NKT細(xì)胞抗腫瘤作用的主要機(jī)制為: NKT細(xì)胞在自身配體及合成配體的刺激下， 其表面的IL12R活化， 刺激DC細(xì)胞分泌大量的IL12， 并促使未成熟DC細(xì)胞的分化及成熟， 而其本身迅速、 大量的分泌IFNγ， 同時(shí)IFNγ作用于NK細(xì)胞促使NK細(xì)胞亦分泌大量的IFNγ， DC細(xì)胞分泌的IL12作用于初始CD4+T細(xì)胞， 使其向Th1極化， 上述因素共同作用而介導(dǎo)了抗腫瘤作用[17]。在小鼠的自身免疫性疾病模型（如Ⅰ型糖尿病、 實(shí)驗(yàn)性自身腦脊髓膜炎等）中已表明NKT細(xì)胞在疾病的發(fā)生及治療中起到了重要的作用， 通過應(yīng)用αGalCer刺激NKT細(xì)胞， 使其數(shù)目增加的同時(shí)， 極化分泌IL4、 IL10等Th2細(xì)胞因子而起到治療自身免疫性疾病的作用。NKT細(xì)胞在移植耐受中的作用亦不容忽視。在小鼠的肝移植、 心臟移植、 胰島移植及ACAID（前房相關(guān)免疫偏離）模型中均證實(shí)了NKT細(xì)胞在移植耐受中的重要作用[18]。同時(shí)在小鼠GVHD模型研究中表明: 來(lái)源于供鼠骨髓中的NKT細(xì)胞能抑制外周血干細(xì)胞移植后所發(fā)生的GVHD[19]， 將供鼠的NKT細(xì)胞體外擴(kuò)增后輸注給受體鼠， 進(jìn)一步減輕了GVHD并維持了長(zhǎng)期的混合嵌合體[20]， 另外應(yīng)用αGalCer刺激受體鼠的NKT細(xì)胞， 使其數(shù)目增加的同時(shí)， 誘導(dǎo)IL4、 IL10的產(chǎn)生， 從而通過細(xì)胞因子介導(dǎo)或細(xì)胞間直接接觸的方式而抑制GVHD。

7 結(jié)語(yǔ)

NKT細(xì)胞以雙刃劍的方式調(diào)節(jié)著免疫系統(tǒng)，越來(lái)越引起人們的關(guān)注， 對(duì)NKT細(xì)胞的免疫活化及與疾病的關(guān)聯(lián)的進(jìn)一步研究將為人們?cè)诳鼓[瘤、 抗自身免疫性疾病及移植耐受中提供一新的有效的治療手段， 具有廣泛的應(yīng)用前景。

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第2篇：細(xì)胞研究范文

1 DPSCs的發(fā)現(xiàn)和生物學(xué)特性

牙髓是結(jié)締組織,位于牙齒髓室和根管內(nèi)，有一定修復(fù)再生的能力。由于成牙本質(zhì)細(xì)胞是一種終末細(xì)胞,一旦分化后就不再分裂，因此普遍認(rèn)為在成牙本質(zhì)細(xì)胞遭受損傷后，牙髓內(nèi)存在的未分化前體細(xì)胞可分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞，并分泌細(xì)胞基質(zhì)。但直到2000年，Gronthos等[1]才首次正式提出DPSCs的概念,把具有克隆形成能力的高增殖率的牙髓細(xì)胞命名為DPSCs，在試驗(yàn)中應(yīng)用酶消化法對(duì)成人第三磨牙牙髓細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞( bone marrow stromal cells, BMSCs)進(jìn)行比較,結(jié)果表明,這兩種細(xì)胞具有相似的免疫表型，但DPSCs具有更高的克隆形成率和增生率,經(jīng)體外誘導(dǎo)后能形成分散而高密度的鈣化小結(jié)，當(dāng)將DPSCs與HA /TCP支架共同培養(yǎng)后回植到小鼠背側(cè)皮下，能觀察到類似牙本-牙髓復(fù)合體樣的結(jié)構(gòu)。Miura等[2]發(fā)現(xiàn)人脫落乳牙(stem cells from human exfoliated deciduous teeth, SHED)的牙髓中含有多能干細(xì)胞,具有高度增殖和克隆形成的特性，當(dāng)將體外擴(kuò)增的DPSCs 和SHED 與羥磷灰石/磷酸三鈣(hydroxyapatite/tricalcium phosphate, HA/TCP)聯(lián)合植入免疫缺陷小鼠的皮下時(shí)可形成牙本質(zhì)- 牙髓樣結(jié)構(gòu)。Young等[3]分離豬第三磨牙牙胚，制備單細(xì)胞懸液，并接種到可降解的聚合物支架上，植入大鼠腸系膜內(nèi)生長(zhǎng)20～30周，可成功地構(gòu)建出牙齒結(jié)構(gòu)，包括含成熟牙釉質(zhì)的釉器官、牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細(xì)胞、髓室、上皮根鞘和成牙骨質(zhì)細(xì)胞，證實(shí)了在豬第三磨牙有上皮和間充質(zhì)干細(xì)胞的存在。

DPSCs 在形態(tài)上類似人骨髓成纖維細(xì)胞集落形成單位（colony forming unit fibroblast,CFU-F）[1]，大多數(shù)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，體積較小。透射電鏡下，DPSCs 的核呈卵圓形，約占胞體體積的80%～90%，核仁大而明顯，常染色質(zhì)居中，異染色質(zhì)少，分布于核周。胞漿很少，核漿比例大。細(xì)胞器較少，核糖體豐富,這些形態(tài)特征也體現(xiàn)了DPSCs的未分化或低分化狀態(tài)。自我更新是干細(xì)胞的重要特性， Gronthos等[4]從3個(gè)月的原代DPSCs移植物中分離出基質(zhì)樣細(xì)胞,在體外培養(yǎng)擴(kuò)增后植于小鼠皮下,結(jié)果形成牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體樣結(jié)構(gòu)。對(duì)形成的牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)進(jìn)行免疫組化檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)其牙本質(zhì)涎蛋白(dentin sialo protein,DSP)表達(dá)陽(yáng)性,證實(shí)DPSCs具有自我更新能力。多向分化能力也是干細(xì)胞的特征之一，在不同的微環(huán)境下，DPSCs 可分化為多種細(xì)胞，礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，DPSCs能夠形成與前期牙本質(zhì)相似的球狀礦化基質(zhì)并表達(dá)成牙本質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志牙本質(zhì)涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）[5]；在脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，DPSCs培養(yǎng)物中出現(xiàn)油紅“O”陽(yáng)性的脂滴，并伴隨脂肪細(xì)胞特異性的pparγ2 和lpl基因表達(dá)上調(diào)；此外，DPSCs 還在mRNA 和蛋白水平表達(dá)神經(jīng)前體細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志：神經(jīng)巢蛋白（ nestin）和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（ glial fibrillary acid protein，GFAP），這說明體外培養(yǎng)的DPSCs有向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的潛能[5]。其他學(xué)者也成功地誘導(dǎo)了DPSCs 向成牙本質(zhì)細(xì)胞、肌管樣細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞的分化[6-7]。

2 DPSCs的定位、分離和鑒定

Gronthos等[1]推測(cè)DPSCs可能來(lái)源于血管周圍的微環(huán)境(perivascular niche)。Shi等[8]研究發(fā)現(xiàn)，DPSCs和BMSCs存在于它們起源組織的微血管周圍。Tecles等[6]選取拔除的根尖孔未形成的第三磨牙分為三組：一組制備累及牙本質(zhì)的淺洞，一組制備暴露牙髓的深洞，一組不做處理，分別觀察牙髓內(nèi)干細(xì)胞的活化和遷移，結(jié)果表明血管周圍存在干細(xì)胞。干細(xì)胞表面的分子標(biāo)記是鑒定和研究干細(xì)胞功能的重要手段，目前發(fā)現(xiàn)明確的干細(xì)胞標(biāo)記不多，對(duì)DPSCs的標(biāo)記物研究也不夠深入。Gronthos等[1]應(yīng)用免疫組化技術(shù)研究DPSCs的表面分子標(biāo)記，并與BMSCs比較。結(jié)果表明，均表達(dá)與內(nèi)皮細(xì)胞(血管細(xì)胞粘附分子1、CD146)、平滑肌細(xì)胞(α2平滑肌肌動(dòng)蛋白)、骨細(xì)胞(堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原、骨連接素、骨橋素、骨鈣素)和成纖維細(xì)胞(Ⅲ型膠原、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2)有關(guān)的分子標(biāo)記。DPSCs不表達(dá)骨基質(zhì)蛋白、骨涎蛋白，而在BMSCs為低水平表達(dá)。用Northern blotting方法研究發(fā)現(xiàn)DPSCs不表達(dá)成牙本質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物牙本質(zhì)涎磷蛋白( dentin sialophosphop rotein, DSPP)，說明DPSCs處于未分化狀態(tài),尚未分化為成熟的成牙本質(zhì)細(xì)胞。為進(jìn)一步比較DPSCs和BMSCs的性質(zhì)，Shi等[7]應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究DPSCs和BMSCs的基因表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)兩者在人類將近4 400個(gè)基因表達(dá)水平上是一致的，包括表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)成分、細(xì)胞粘附分子、生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等的基因。但同時(shí)發(fā)現(xiàn)，DPSCs較高表達(dá)ⅩⅤⅢα1型膠原、胰島素樣生長(zhǎng)因子2、盤狀結(jié)構(gòu)域酪氨酸激酶、NAD ( P) H2維生素K3氧化還原酶、周期素依賴性蛋白激酶6等；BMSCs較高表達(dá)胰島素樣生長(zhǎng)因子連接蛋白27和Ⅰα2型膠原。Liu等[9]研究發(fā)現(xiàn),DPSCs分化時(shí)，初始Runx2、TGFβ相關(guān)基因、膠原代謝相關(guān)基因上調(diào)、堿性磷酸酶活性上升，后均下降；而細(xì)胞外基質(zhì)磷糖蛋白(matrix extracellular phosphoglyco protein, MEPE)是DPSCs分化過程中唯一下降的標(biāo)記物，作者認(rèn)為MEPE是礦化的抑制劑,在DPSCs分化時(shí)下調(diào)，可作為DPSCs分化時(shí)的檢測(cè)指標(biāo)。最近Mokry 等[10]研究表明，牙髓干細(xì)胞表達(dá)STRO-1、vimentin、CD29、CD44、CD73、CD90、CD166等間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)志物，同時(shí)表達(dá)Sox2, nestin及 nucleostemin干細(xì)胞標(biāo)志物。

3DPSCs的多向分化能力與相關(guān)因素的調(diào)控

牙髓干細(xì)胞是來(lái)源于神經(jīng)嵴和間充質(zhì)的多潛能干細(xì)胞[11]，研究發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞群主要是來(lái)源于神經(jīng)嵴細(xì)胞群，細(xì)胞標(biāo)志物為low affinity nerve growth factor receptor (LANGFR)和間葉細(xì)胞群，標(biāo)志物為1-integrin receptor subunit。這兩個(gè)細(xì)胞群都具有多向分化的功能。牙髓干細(xì)胞的多項(xiàng)分化能力即可塑性(plasticity)在國(guó)內(nèi)外的很多實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證。Yu等[12]認(rèn)為牙髓干細(xì)胞的分化方向取決于局部的微環(huán)境，他們?cè)谠囼?yàn)中發(fā)現(xiàn)利用豬牙胚細(xì)胞條件培養(yǎng)基能誘導(dǎo)牙髓干細(xì)胞形成更加合理組織學(xué)結(jié)構(gòu)的牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體。Iohara等[13]研究發(fā)現(xiàn)，BMP2能夠刺激牙髓細(xì)胞分化為表達(dá)牙本質(zhì)涎磷蛋白DSPP的成牙本質(zhì)細(xì)胞。Saito等[14]也發(fā)現(xiàn),BMP2能促進(jìn)牛和人單層培養(yǎng)和三維膠丸培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞。Keklikoglu等[15]認(rèn)為轉(zhuǎn)化因子AP21家族的成員FosB在成牙本質(zhì)細(xì)胞和牙髓未分化間充質(zhì)細(xì)胞的分化和增生方面有重要作用。Moioli等[16]的研究,TGF2β能誘導(dǎo)DPSCs向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化。Liu等[17]研究表明牙本質(zhì)素是MEPE的一個(gè)肽片段,它能下調(diào)P16，促進(jìn)DPSCs的增生，在牙髓修復(fù)中扮演重要角色。Gronthos等[1]發(fā)現(xiàn)DPSCs在含有L2抗壞血酸22磷酸、地塞米松、無(wú)機(jī)磷酸鹽的礦化誘導(dǎo)液培養(yǎng)基中培養(yǎng)5～6周后,經(jīng)染色表明有鈣結(jié)節(jié)形成。Yamada 等[18]的研究表明，人DPSCs高表達(dá)DMP1，而DMP1在未分化間充質(zhì)細(xì)胞分化和牙本質(zhì)礦化中起重要作用。Arthur 等[19]體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，分別加入了各種生長(zhǎng)因子如EGF及FGF等，均發(fā)現(xiàn)牙髓干細(xì)胞可以分化為具有功能活性的神經(jīng)元。Francesca Paino等[20]認(rèn)為黑素細(xì)胞和牙髓細(xì)胞均源于神經(jīng)嵴細(xì)胞群，在試驗(yàn)中DPSCs在沒有外加定向誘導(dǎo)因素下，表達(dá)TRP-2、TRP-1、gp100/Pmel and MART-1抗原，且能自主分化為完全成熟的黑素細(xì)胞。Demarco 等[21]最近研究把三維多聚乳酸支架置于拔除的第三磨牙髓室內(nèi)，用晶體鹽或膠體做成孔劑輔料，把牙髓干細(xì)胞接種于其內(nèi)，發(fā)現(xiàn)與牙本質(zhì)相關(guān)的形態(tài)發(fā)生因子在誘導(dǎo)牙髓干細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化中起著重要的作用，且DPSCs的微環(huán)境對(duì)細(xì)胞的行為和分化也有重要的影響。Jing WANG等[22]用納米纖維多聚乳酸支架進(jìn)行DPSCs體內(nèi)體外定向分化研究，發(fā)現(xiàn)BMP-7 和 DXM復(fù)合因子及納米纖維多聚乳酸支架可大大提高DPSCs向牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的定向分化能力。Gronthos等[23]實(shí)驗(yàn)成功對(duì)DPSCs進(jìn)行了脂肪誘導(dǎo)，而Norsat等[24]證明DPSCs具有神經(jīng)分化分化能力。

4DPSCs向 iPSCs 的重組轉(zhuǎn)化

誘導(dǎo)多潛能性干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）是通過在分化的體細(xì)胞中表達(dá)特定的轉(zhuǎn)錄因子，以誘導(dǎo)體細(xì)胞的重編程而獲得的可不斷自我更新且具有多向分化潛能的細(xì)胞。由于iPSCs既避免免疫排斥，又不涉及倫理道德問題，因此具有廣泛且重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。在2006年日本學(xué)者Takahashi和Yamanaka[25]研究小組采用體外基因轉(zhuǎn)染技術(shù), 從24個(gè)因子中篩選出Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4等4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子, 通過逆轉(zhuǎn)錄病毒將上述4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入胚胎小鼠成纖維細(xì)胞或成年小鼠尾部皮膚成纖維細(xì)胞, 在小鼠ES細(xì)胞的培養(yǎng)條件下獲得了Fbx15+的多潛能干細(xì)胞系, 該細(xì)胞系在細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志物、形成畸胎瘤等方面與小鼠ES細(xì)胞非常相似, 而在基因表達(dá)譜、DNA甲基化方式及形成嵌合體動(dòng)物方面卻不同于小鼠ES細(xì)胞, 故將其命名為iPSCs，從那開始全世界眾多實(shí)驗(yàn)室開始了iPSCs研究[26-28]，相繼從狗、豬、猴和人等哺乳動(dòng)物的皮膚細(xì)胞、肝細(xì)胞、羊水細(xì)胞、CD34血細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞及牙齒干細(xì)胞等成體細(xì)胞成功獲得了iPSCs。其中牙髓組織在臨床上易于獲得，不牽涉?zhèn)惱韱栴}而得到廣泛關(guān)注。Tamaoki[29]和Xing YAN等[30]研究小組利用病毒載體把c-Myc、Klf4、 Oct4、 Sox2 和Lin28、Nanog、Oct 4、 Sox2因子導(dǎo)入牙髓干細(xì)胞中，成功獲得了iPSCs。

迄今為止，關(guān)于DPSCs的研究，國(guó)內(nèi)外學(xué)者做了大量的工作，取得了很大的進(jìn)展。但是DPSCs的研究仍面臨許多問題,如DPSCs有無(wú)特異性細(xì)胞標(biāo)志物? DPSCs的鑒定標(biāo)準(zhǔn)? DSPCs的潛在分化能力和如何定向誘導(dǎo)DPSCs的分化? Telomere在DPSCs體外培養(yǎng)和體內(nèi)增殖過程中的作用機(jī)制？DPSCs向 iPSCs的成功轉(zhuǎn)化載體和重組因子的優(yōu)化？這些問題說明DPSCs應(yīng)用于臨床還有很長(zhǎng)的路要走,需要相關(guān)學(xué)者更多的基礎(chǔ)和臨床研究。

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第3篇：細(xì)胞研究范文

重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校解剖教研室　重慶市　404120

【摘　要】神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞主要由神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞組成。傳統(tǒng)認(rèn)為星型膠質(zhì)細(xì)胞沒有動(dòng)作電位，在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要對(duì)神經(jīng)元起到結(jié)構(gòu)和功能上的支持作用，但隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)，Ast 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及病理生理過程中都起到重要作用。本文就星型膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)特性、體外培養(yǎng)、與腦缺血的關(guān)系方面做一簡(jiǎn)要概述。

關(guān)鍵詞 星形膠質(zhì)細(xì)胞； 腦缺血

神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞主要由神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞組成。膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的數(shù)量約占90% ，星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，Ast) 在膠質(zhì)細(xì)胞中體積最大，與少突膠質(zhì)細(xì)胞合稱為大膠質(zhì)細(xì)胞。傳統(tǒng)認(rèn)為星型膠質(zhì)細(xì)胞沒有動(dòng)作電位，在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要對(duì)神經(jīng)元起到結(jié)構(gòu)和功能上的支持作用，是構(gòu)成血腦屏障的重要結(jié)構(gòu)。但隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)，Ast 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及病理生理過程中都起到重要作用，具有攝取、滅活和供給神經(jīng)遞質(zhì)，抗氧化、營(yíng)養(yǎng)、修復(fù)以及抑制神經(jīng)元過度興奮和幫助學(xué)習(xí)記憶等多種功能[1]。目前，越來(lái)越到的研究者在研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病時(shí)，把目光投向了星形膠質(zhì)細(xì)胞。

1 星形膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)特性

人腦中神經(jīng)元的總數(shù)為1010～1012 個(gè)，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量是神經(jīng)元的10 ～ 50 倍。星形膠質(zhì)細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞內(nèi)膠質(zhì)絲的含量以及胞突的形狀分為兩種：纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞，多分布在腦脊髓的皮質(zhì)，突起細(xì)長(zhǎng)，分支較少，胞質(zhì)中含大量膠質(zhì)絲；原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞，多分布在灰質(zhì)，細(xì)胞突起粗短，分支多。除此之外，在小腦、視網(wǎng)膜、腦垂體等還有一些特殊類型的星形膠質(zhì)細(xì)胞。上世紀(jì)70 年代研究表明：Ast 擁有和神經(jīng)元相同的神經(jīng)遞質(zhì)受體，如乙酰膽堿受體、多巴胺受體、腎上腺素受體、5- 羥色胺受體及一些神經(jīng)肽受體。

神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的信號(hào)傳遞大多以電脈沖的方式，而Ast 不發(fā)生動(dòng)作電位，所以長(zhǎng)期被研究者忽視。但近年來(lái)，研究者發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞之間有一些信號(hào)的傳導(dǎo)，并且對(duì)神經(jīng)元的功能產(chǎn)生影響。上世紀(jì)90 年代，研究者發(fā)現(xiàn)了鈣波，這種新的細(xì)胞信息交流的方式指的是在膠質(zhì)細(xì)胞之間，以及在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞之間，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高會(huì)從一個(gè)細(xì)胞傳播到另一個(gè)細(xì)胞。段樹明[2] 認(rèn)為，星型膠質(zhì)細(xì)胞的鈣波傳播和突觸功能的反饋調(diào)節(jié)都需要其釋放ATP才得以完成。在受到刺激，星形膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)以胞吐的形式釋放含有大量ATP 溶酶體，如果選擇性地裂解星型膠質(zhì)細(xì)胞溶酶體，發(fā)現(xiàn)ATP 釋放和鈣波傳播都消失了。

2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)

星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)含量較大，使體外培養(yǎng)高濃度的Ast 細(xì)胞培養(yǎng)物顯得不是很難，也為研究Ast 生物學(xué)作用提供了方便。體外分離純化CNS 的不同細(xì)胞，一般基于各種細(xì)胞之間的細(xì)胞粘附特性、營(yíng)養(yǎng)需求、發(fā)育時(shí)程及生長(zhǎng)方式等差異。從CNS 的灰質(zhì)細(xì)胞純化Ast 主要依據(jù)以下幾方面特征：（1）Ast 的增殖速度遠(yuǎn)大于少突膠質(zhì)細(xì)胞和其它神經(jīng)細(xì)胞。（2）Ast與其它神經(jīng)細(xì)胞分層生長(zhǎng)，Ast 在底層，其它細(xì)胞生長(zhǎng)在上層。（3）分層生長(zhǎng)的細(xì)胞經(jīng)一定力度搖動(dòng)處理，可使在上層生長(zhǎng)的細(xì)胞脫壁。目前，大多數(shù)研究者都是采用經(jīng)典的方法進(jìn)行培養(yǎng)[3]。將出生1-2 天的大鼠大腦的灰質(zhì)組織制成混合細(xì)胞懸液，在培養(yǎng)瓶皿內(nèi)連續(xù)培養(yǎng)，直至傳代。使Ast充分增殖，神經(jīng)元盡量死亡，從而使Ast與少突膠質(zhì)細(xì)胞和其它細(xì)胞的比例增大，進(jìn)行傳代純化，筆者在研究生時(shí)采用這種方法獲得了純度較高的細(xì)胞培養(yǎng)物。但是，這種方法比較耗時(shí)、麻煩。所以，有研究者采用了較為簡(jiǎn)便的方法也培養(yǎng)出了較純的細(xì)胞培養(yǎng)物。

黃柏勝[4] 等使用改進(jìn)的培養(yǎng)方法取得了比較好的效果，有以下特點(diǎn)：（1）原代培養(yǎng)時(shí)無(wú)須胰酶消化，減少胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷；（2）篩網(wǎng)過濾，將細(xì)胞團(tuán)分散成單個(gè)細(xì)胞；（3）傳代培養(yǎng)時(shí)無(wú)需搖床震蕩，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。筆者認(rèn)為，經(jīng)典的培養(yǎng)方法雖然耗時(shí)、麻煩，但是，培養(yǎng)的細(xì)胞比較穩(wěn)定。

3 星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦缺血

腦缺血等腦損傷是臨床的常見病，嚴(yán)重地威脅著人類的生命與健康。該類疾病發(fā)生后，最顯著的病理改變是病灶區(qū)由于缺血缺氧引起大量的神經(jīng)細(xì)胞死亡和凋亡，而神經(jīng)細(xì)胞缺失是導(dǎo)致病人死亡和殘疾的重要原因。

膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元之間的細(xì)胞液構(gòu)成神經(jīng)元生存的直接微環(huán)境，其成分的改變對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生直接而顯著的影響。在腦缺血再灌注損傷時(shí)，Ast 形態(tài)和功能也會(huì)發(fā)生明顯的改變 。應(yīng)用外源性的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子或其他細(xì)胞因子可明顯減輕神經(jīng)元的損傷。經(jīng)大腦皮質(zhì)注入的膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）可保護(hù)大腦免于自由基、鈣超載等缺血損傷，并且完全阻止缺血后NO 產(chǎn)生和再灌注損傷。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子具有促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)、改善神經(jīng)電活動(dòng)、誘導(dǎo)軸突再生等作用。

Ast 是體內(nèi)產(chǎn)生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的主要細(xì)胞。目前，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了包括GDNF、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 。所以，研究者認(rèn)為Ast 對(duì)神經(jīng)元可以起到一定的保護(hù)作用。研究表明，在腦缺血/ 再灌注損傷后，Ast 功能異?；钴S，缺血周邊區(qū)GDNF 表達(dá)顯著增加，GDNF 可以阻止部分神經(jīng)元凋亡 。

參考文獻(xiàn)

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[2] 段樹民. 膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞間通訊[J].生命科學(xué)，2008，20（5）：680-683.

第4篇：細(xì)胞研究范文

摘要：細(xì)胞融合，是生物體在發(fā)展和達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡過程中產(chǎn)生的。而腫瘤的發(fā)展是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，從腫瘤的發(fā)生及生長(zhǎng)，到腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，這些過程都與細(xì)胞融合關(guān)系密切。目前對(duì)細(xì)胞融合與腫瘤之間關(guān)系的研究較多，主要集中于幾個(gè)方面：細(xì)胞融合研究機(jī)制；不同細(xì)胞之間的融合；細(xì)胞融合與其它學(xué)說如上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）、染色體非整倍性、腫瘤異質(zhì)性等之間的關(guān)系；細(xì)胞融合與血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移的研究等等。本文主要從以上幾個(gè)方面入手，初步探究細(xì)胞融合與腫瘤之間的關(guān)系，從而為腫瘤治療提供新的目標(biāo)和方向。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞融合；機(jī)制；血管生成；腫瘤轉(zhuǎn)移；上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化；染色體非整倍性；腫瘤異質(zhì)性

細(xì)胞融合，是指兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞通過漿膜融合而形成的過程，也被稱為細(xì)胞雜交。它被認(rèn)為是發(fā)生概率很低并且高度規(guī)律的現(xiàn)象。而目前對(duì)腫瘤的研究很多，Hanahan等認(rèn)為，人類腫瘤的形成是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，這些過程由基因的突變導(dǎo)致，從而使正常人類細(xì)胞轉(zhuǎn)向高度惡性的腫瘤細(xì)胞。而腫瘤轉(zhuǎn)移則是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，其步驟一般為：原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)與血管生成；腫瘤侵入周圍組織和基底膜；侵入血管、淋巴管或腹膜空隙并在其中生存；最后實(shí)現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移；目前數(shù)據(jù)顯示，90％以上的癌癥病人死于腫瘤的轉(zhuǎn)移。

1細(xì)胞融合與腫瘤轉(zhuǎn)移的早期研究

最早關(guān)于細(xì)胞融合與腫瘤關(guān)系的報(bào)道要追溯到1911年，Aichel提出假設(shè)，他認(rèn)為惡性腫瘤的產(chǎn)生很可能是因?yàn)轶w細(xì)胞與白細(xì)胞發(fā)生融合而導(dǎo)致。接著，Mekler將Aichel的理論進(jìn)行了擴(kuò)展，認(rèn)為白細(xì)胞與原發(fā)性腫瘤細(xì)胞的融合可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移；Warner認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞之間的融合可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，并且可能導(dǎo)致腫瘤表型的多樣性。目前關(guān)于細(xì)胞融合與腫瘤關(guān)系的報(bào)道已經(jīng)有很多，有學(xué)者認(rèn)為腫瘤發(fā)展的過程類似達(dá)爾文的進(jìn)化論，由于基因型的改變，新的基因型更能適應(yīng)環(huán)境，導(dǎo)致正常人體細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)換為腫瘤細(xì)胞。而巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等與腫瘤細(xì)胞的融合在不同程度上參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移過程，因此直接或者間接地促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的器官或組織。腫瘤的轉(zhuǎn)移過程復(fù)雜，并且有一些病人的原發(fā)腫瘤在數(shù)年或者數(shù)十年之后才發(fā)生轉(zhuǎn)移。這使得腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制研究較困難。關(guān)于腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究，目前有很多模型假設(shè)，最為普遍接受的模型是Nowell提出的腫瘤進(jìn)展模型，Nowell認(rèn)為一系列的基因變異導(dǎo)致了一小部分腫瘤細(xì)胞獲得了轉(zhuǎn)移潛能。而細(xì)胞融合模型，目前獲得了普遍的關(guān)注。模型認(rèn)為：腫瘤細(xì)胞要形成轉(zhuǎn)移，必須獲得很多相應(yīng)的能力。例如：無(wú)限制增殖的能力；使細(xì)胞間連接如緊密連接、黏附連接等能力下降甚至喪失的能力；促血管生成的能力；侵入血管或者淋巴管并生存的能力；從血管或淋巴管中滲出的能力；以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移的能力等等。那么，腫瘤細(xì)胞如何獲取這么多的能力則值得深究。細(xì)胞融合模型能夠解釋這個(gè)問題。

在過去的幾十年間，細(xì)胞融合不斷取得進(jìn)展，從自發(fā)融合到誘發(fā)融合，從腫瘤細(xì)胞與正常體細(xì)胞融合到腫瘤細(xì)胞之間的融合，人們對(duì)細(xì)胞融合逐漸開始了解。Mortensen等［研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞位于血管與淋巴管內(nèi)層，腫瘤細(xì)胞要到達(dá)循環(huán)系統(tǒng)必須穿過這層內(nèi)皮細(xì)胞。因此，他們利用乳腺癌細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行聯(lián)合培養(yǎng)，體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)均證明，乳腺癌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行融合，使得腫瘤細(xì)胞能夠穿過內(nèi)皮細(xì)胞屏障入侵血液，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)移。Powell等實(shí)驗(yàn)研究表明，血液循環(huán)系統(tǒng)來(lái)源的細(xì)胞與腫瘤上皮細(xì)胞融合可發(fā)生于腫瘤形成階段，通過將免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞等）與腫瘤細(xì)胞的融合，可導(dǎo)致遷移性巨噬細(xì)胞的形成，而這可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的防御反應(yīng)。Pawelek則提出假設(shè)，腫瘤細(xì)胞與骨髓來(lái)源細(xì)胞融合才導(dǎo)致腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。他提出證據(jù)認(rèn)為，第一，兩者融合細(xì)胞的基因型可以被檢測(cè)到；第二，腫瘤細(xì)胞與骨髓來(lái)源細(xì)胞兩者在很多方面的分子表達(dá)和信號(hào)通路一致，如血管生成過程中的VEGF和其他因子，免疫信號(hào)通路中的核因子κB，腎腫瘤抗原1，Toll樣受體等，以及巨噬細(xì)胞免疫標(biāo)記物、細(xì)胞－機(jī)制降解和沉積物、細(xì)胞動(dòng)度等方面。第三，融合細(xì)胞與當(dāng)前關(guān)于腫瘤轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象及觀點(diǎn)相符合；第四，融合細(xì)胞與上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）理論相符合，且能夠解釋EMT理論。

2細(xì)胞融合與其它相關(guān)學(xué)說

2．1細(xì)胞融合與EMT的相互促進(jìn)

EMT是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，包括細(xì)胞間、細(xì)胞與胞外基質(zhì)間接觸改變，上皮細(xì)胞從周圍組織分離；細(xì)胞骨架重建；誘導(dǎo)新的轉(zhuǎn)錄過程以維持間質(zhì)形態(tài)等等。常見于胚胎發(fā)育過程，也與腫瘤細(xì)胞的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有著密切的聯(lián)系。EMT主要變化有三個(gè)，即形態(tài)學(xué)改變，標(biāo)記物改變以及功能改變。細(xì)胞融合理論與EMT理論在很多方面存在相互促進(jìn)協(xié)調(diào)的作用，因此，有理由認(rèn)為兩者之間存在相互聯(lián)系。①在胚胎發(fā)育過程中，通過EMT實(shí)現(xiàn)三胚層的形成，并且EMT與器官的發(fā)育關(guān)系密切；而Al－Nasiry等研究發(fā)現(xiàn)，間質(zhì)滋養(yǎng)層細(xì)胞在侵入胎盤床的時(shí)候會(huì)與多核巨細(xì)胞融合，從而實(shí)現(xiàn)胚胎的發(fā)育；②EMT的發(fā)生與多種蛋白分子，生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄因子等有關(guān)，同時(shí)涉及的信號(hào)通路和分子機(jī)制也較復(fù)雜，例如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF），表皮生長(zhǎng)因子（EGF），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF－β），血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等等生長(zhǎng)因子均通過不同的信號(hào)通路參與EMT，同時(shí)這些生長(zhǎng)因子也是細(xì)胞融合過程中的重要參與分子；E－鈣黏蛋白均為兩者的重要參與蛋白；③惡性腫瘤的特點(diǎn)是從原來(lái)不具有侵襲能力的組織中分離出具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞并進(jìn)行播散。EMT通過實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)換，使得上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化成間質(zhì)細(xì)胞，獲得了間質(zhì)細(xì)胞的游走能力；而腫瘤細(xì)胞通過與間質(zhì)細(xì)胞如巨噬細(xì)胞等的融合，使得腫瘤細(xì)胞具有了巨噬細(xì)胞的侵襲、游走以及吞噬等能力；這兩者的改變具有異曲同工之處；④Kallu－ri等認(rèn)為，EMT可分為三種類型，Ⅰ型與胚胎發(fā)育和器官形成有關(guān)；Ⅱ型與傷口愈合、組織再生和器官纖維化有關(guān)；Ⅲ型則與腫瘤形成相關(guān)；腫瘤細(xì)胞可通過EMT，從而使細(xì)胞保持三種形態(tài)，即上皮細(xì)胞形態(tài)、間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)以及兩者兼有的形態(tài)；而Lluis等研究證明，當(dāng)組織受到損傷時(shí)，自發(fā)性細(xì)胞融合活動(dòng)將增多，從而促進(jìn)傷口愈合與組織再生；腫瘤細(xì)胞與骨髓源性細(xì)胞、多能間充質(zhì)干細(xì)胞等的融合，將使得細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變；由此可見，細(xì)胞融合理論與上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化理論之間存在密切的聯(lián)系。

2．2細(xì)胞融合導(dǎo)致染色體非整倍性的產(chǎn)生

非整倍體作為染色體數(shù)目變異的一種類型，是指細(xì)胞中的染色體數(shù)目不是以染色體為單位成倍地增減，而是個(gè)別的染色體增加或減少一條或幾條而致其數(shù)目不是整倍數(shù)，所以叫非整倍體，是細(xì)胞分裂時(shí)染色體丟失、染色體分離及易位異常的產(chǎn)物，也是腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞明顯的區(qū)別之一。從1890年，vonHansemann觀察到腫瘤細(xì)胞中有絲分裂異常，到2008年，Boveri提出，異常的有絲分裂導(dǎo)致染色體異常分離，可能導(dǎo)致非整倍性的產(chǎn)生，從而促進(jìn)腫瘤的產(chǎn)生和發(fā)展。越來(lái)越多的學(xué)者開始探究?jī)烧咧g的關(guān)系。Storchova等認(rèn)為，人腫瘤細(xì)胞中的染色體數(shù)目可變性很大，從亞二倍體（小于46條）到高倍體（高達(dá)200條），即染色體不穩(wěn)定性；目前比較統(tǒng)一的觀點(diǎn)認(rèn)為，細(xì)胞異常分裂，導(dǎo)致四倍體的產(chǎn)生，然后導(dǎo)致非整倍性。不同學(xué)者對(duì)非整倍性的機(jī)制進(jìn)行了不同的研究，但是學(xué)者普遍認(rèn)為細(xì)胞融合是導(dǎo)致四倍體產(chǎn)生的重要原因之一。細(xì)胞融合導(dǎo)致非整倍性的機(jī)制尚不明了，目前可能的機(jī)制有很多，主要有：①細(xì)胞融合導(dǎo)致細(xì)胞原癌基因與抑癌基因平衡發(fā)生改變；②細(xì)胞融合后有絲分裂的調(diào)節(jié)因子異常；主要包括端粒功能失調(diào)，紡錘體檢查點(diǎn)缺陷，紡錘體組裝缺陷，染色體重排、斷裂和融合異常，胞質(zhì)分裂失敗等等。③細(xì)胞融合導(dǎo)致DNA復(fù)制與修復(fù)功能發(fā)生改變。

2．3細(xì)胞融合與血管生成的相互促進(jìn)

Busund等將巨噬細(xì)胞與肉瘤細(xì)胞進(jìn)行自發(fā)融合，結(jié)果發(fā)現(xiàn)融合細(xì)胞微血管密度（MVD）、血管成熟度（VMI）等均高于親代腫瘤細(xì)胞，且VEGF、TGF－β的分泌也比親代腫瘤細(xì)胞高，這表明，兩者融合產(chǎn)生的細(xì)胞血管生成增強(qiáng)；Pawelek提出，惡性腫瘤細(xì)胞的某些特征與骨髓細(xì)胞類似，例如血管生成增加，細(xì)胞動(dòng)度增加等，因此，他認(rèn)為，骨髓細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的融合可導(dǎo)致腫瘤的惡變；同時(shí)認(rèn)為，應(yīng)該把所有的癌細(xì)胞當(dāng)作是融合細(xì)胞。這種觀點(diǎn)為腫瘤的治療提供了新的思路。圖1為細(xì)胞融合相關(guān)學(xué)說的研究示意圖。

3展望

第5篇：細(xì)胞研究范文

l實(shí)驗(yàn)材料

生雞蛋3枚，透明玻璃杯或者一次性塑料杯若干個(gè)，食用白醋3袋，食用鹽、蔗糖(食用蔗糖)各1袋、縫紉用皮尺(或其他軟尺)1根。

2假設(shè)原理

若“軟殼蛋”可以作為細(xì)胞模型進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)，假設(shè)如下.

(l)其浸泡在不同的溶液當(dāng)中會(huì)有選擇透過性，也就是說，“軟殼蛋”會(huì)表現(xiàn)出選擇透過性，而是否有選擇透過性可以通過軟殼蛋的變大變小情況來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。

(2)其浸泡在蔗糖等大分子溶液中時(shí)，其卵殼膜會(huì)阻擋蔗糖分子進(jìn)人蛋內(nèi)，并且蛋內(nèi)水分子、及其他小分子會(huì)從“軟殼蛋”內(nèi)擴(kuò)散出來(lái)，這時(shí)細(xì)胞模型從理論上講會(huì)變小。

(3)其浸泡在水或者飽和食鹽水等小分子溶液中時(shí)，卵殼膜會(huì)允許水和小分子物質(zhì)進(jìn)人蛋內(nèi)，并且最終與蛋內(nèi)物質(zhì)達(dá)到一個(gè)內(nèi)外濃度平衡，這時(shí)細(xì)胞模型從理論上講會(huì)變大。

3實(shí)驗(yàn)過程

3.1細(xì)胞模型“軟殼蛋”的制取

測(cè)量雞蛋的周長(zhǎng)后，把3枚雞蛋分別放人盛滿食用白醋的杯子里面浸泡，以后每天觀察蛋殼溶解情況，并且每天測(cè)量各杯中蛋的周長(zhǎng)、并記錄所測(cè)數(shù)據(jù)以及所觀察到的其他現(xiàn)象?？梢杂^察到蛋殼逐漸被食用白醋溶解。2一7d后，雞蛋的外層硬殼全部溶解，整個(gè)雞蛋變成一枚軟殼盜，這意味著一個(gè)細(xì)胞模型制取成功(圖1)。

3.2用不同的溶液浸泡“軟殼蛋”

將制好的軟殼蛋沖洗干凈，分別放到盛有自來(lái)水的杯子中浸泡，溶液的多少以沒過雞蛋為準(zhǔn)。以后每天測(cè)量各杯中軟殼蛋的周長(zhǎng)、并記錄所測(cè)數(shù)據(jù)以及所觀察到的其他現(xiàn)象。觀測(cè)到雞蛋周長(zhǎng)有顯著變化后，將浸泡軟殼蛋的溶液換成飽和蔗糖溶液或者飽和食鹽水溶液，實(shí)驗(yàn)記錄見表1。

4結(jié)果分析

(l)從表1、圖2、圖3、圖4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和軟殼蛋周長(zhǎng)變化曲線可以看出:軟殼蛋在不同的溶液當(dāng)中有周長(zhǎng)變大，也有周長(zhǎng)變小的情況出現(xiàn)，這說明“軟殼蛋”浸泡在不同溶液當(dāng)中，不僅會(huì)出現(xiàn)蛋內(nèi)物質(zhì)減少的情況，也會(huì)出現(xiàn)蛋內(nèi)物質(zhì)增加的情況，這也說明軟殼蛋的卵殼膜在不同溶液當(dāng)中表現(xiàn)出了一定的選擇透過性。

(2)從圖2和圖4中曲線下降的部分和表1中相關(guān)數(shù)據(jù)記錄結(jié)果可以看出:軟殼蛋浸泡在蔗糖這樣的大分子溶液中時(shí)，軟殼蛋(細(xì)胞模型)明顯變小了，而圖3所展示的2號(hào)蛋自始至終沒有在蔗糖溶液當(dāng)中浸泡過，同時(shí)也沒有表現(xiàn)出周長(zhǎng)變小的情況，進(jìn)一步說明了軟殼蛋的選擇透過性決定了大分子物質(zhì)不可以進(jìn)人細(xì)胞膜內(nèi)。在蛋內(nèi)外須要達(dá)到濃度平衡的情況下，只能是蛋內(nèi)的水分子、及其他小分子從蛋內(nèi)擴(kuò)散出來(lái)，從而導(dǎo)致軟殼蛋周長(zhǎng)變小。

(3)從圖2、圖3、圖4中曲線上升的部分以及表l中記錄的詳細(xì)數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出:軟殼蛋浸泡在飽和食鹽水和自來(lái)水這樣的小分子溶液中時(shí)，軟殼蛋(細(xì)胞模型)明顯變大了，這說明在杯內(nèi)溶液與蛋內(nèi)物質(zhì)要達(dá)到一個(gè)內(nèi)外濃度平衡的情況下，卵殼膜會(huì)允許水和小分子物質(zhì)進(jìn)人蛋內(nèi)。

(4)從表1、圖2、圖3、圖4中顯示的日期統(tǒng)計(jì)情況可以看出:“軟殼蛋”無(wú)論浸泡在什么溶液當(dāng)中，一般都需要2一3d的時(shí)間才能夠看到其發(fā)生明顯變化。具體來(lái)說，以白醋作為溶液，隨著蛋殼被白醋溶解，醋酸根離子及白醋當(dāng)中的水分會(huì)進(jìn)人到軟殼蛋內(nèi)部，使得浸泡其中的軟殼蛋周長(zhǎng)變大，周長(zhǎng)增加量一般在Icm左右;浸泡在飽和蔗糖溶液中，周長(zhǎng)通常減少在1。m左右;浸泡在飽和食鹽水中，周長(zhǎng)的增加量通常在1Cm左右;浸泡在自來(lái)水中，周長(zhǎng)增加量一般在1.5cm左右。

5進(jìn)一步探究的問題

(1)在“軟殼蛋”沒有孿質(zhì)的情況下，可以反復(fù)更換浸泡軟殼蛋的溶液，并記錄雞蛋周長(zhǎng)變化情況，這些溶液可以由學(xué)生根據(jù)自己的興趣任意選擇。至于“軟殼蛋”浸泡在其他的液體中又會(huì)有怎樣的變化，可以請(qǐng)學(xué)生提前根據(jù)已有知識(shí)進(jìn)行預(yù)測(cè)并說明理由。

(2)“軟殼蛋”的卵殼膜還具有生物活性嗎?

(3)生活中咸鴨蛋很常見，但是很少聽說過糖鴨蛋，你能試著解釋其中的原因嗎?設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明自己的猜想是否合理。

(4)用糖水和鹽水分別腌制一組雞蛋，看看糖水腌的雞蛋是否會(huì)變甜?

(5)雞蛋在溶液當(dāng)中有時(shí)會(huì)沉底，有時(shí)又會(huì)上浮，跟哪些因素相關(guān)?(6)腌蘿卜干時(shí)，蘿卜會(huì)變咸，但蘿卜體積會(huì)變小，你覺得這與“軟殼蛋”在鹽水當(dāng)中會(huì)變大的現(xiàn)象相沖突嗎?理由是什么?

第6篇：細(xì)胞研究范文

[關(guān)鍵詞] T-SAg；Th1/Th2；CD28；SAg抗體；樹突狀細(xì)胞；SAgT細(xì)胞表位

[中圖分類號(hào)] R392 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）32-0027-03

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)T-SAg研究領(lǐng)域呈活躍的趨勢(shì)，過去人們對(duì)T-SAg認(rèn)識(shí)比較零散與淺顯，有時(shí)即便對(duì)其某一方面有所研究，但也是孤立的，意義不大。故此，現(xiàn)在人們對(duì)T-SAg實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)、生物效應(yīng)及致病機(jī)制還是不夠全面深刻的理解?；谏鲜銮闆r，本文更新、更深刻及更全面地對(duì)T-SAg進(jìn)行綜合性分析與研究。使人們對(duì)T-SAg有更好以及更深刻的認(rèn)識(shí)，同時(shí)也為進(jìn)一步研究與探討T-SAg提供了一定的理論依據(jù)。現(xiàn)將綜述擴(kuò)展如下。

1 超抗原（SAg）概念

1989年，Marrack等人首次提出超抗原的概念；1996年，Sutkowski等在EB病毒中發(fā)現(xiàn)可以表達(dá)的超抗原成分[1]。隨著醫(yī)學(xué)發(fā)展以后超抗原（SAg）才被醫(yī)學(xué)界認(rèn)識(shí)。所謂超抗原（SAg）就是某些細(xì)菌或病毒產(chǎn)物具有強(qiáng)大的刺激（多克?。㏕/B細(xì)胞活化的能力，故被稱為超抗原（SAg）?，F(xiàn)在我們談的是T細(xì)胞超抗原，它的激活不需要提呈細(xì)胞的加工處理，其一端不與抗原肽結(jié)合槽結(jié)合而直接與APC膜上的MHCⅡ分子的非多態(tài)區(qū)外側(cè)結(jié)合，另一端直接與TCR、BCR抗原結(jié)合凹槽外的部位（TCR的Vβ片段）結(jié)合，非特異性刺激T細(xì)胞克隆增殖。SAg也被認(rèn)為是一類多克隆激劑。

2 分類

T細(xì)胞SAg分為TCRαβ 型和TCRγδ 型SAg。其中TCRαβ 型SAg又可分為外源性和內(nèi)源性（醫(yī)學(xué)免疫學(xué) 第二版 龔非力主編）。①TCRαβ 型SAg的外源性超抗源：主要是某些細(xì)菌毒素，包括金黃色葡萄球菌蛋白A（SPA）、腸毒素（SE）、A族鏈球菌M蛋白和致熱外毒素M-C、關(guān)節(jié)炎支原體絲裂原（MAM）、小腸結(jié)腸類耶氏菌膜蛋白等。產(chǎn)生SAg已經(jīng)擴(kuò)大到革蘭陰性細(xì)菌、支原體、病毒（內(nèi)源性SAg）[2]。② TCRαβ 型SAg的內(nèi)源性超抗源：病毒（主要是逆轉(zhuǎn)錄病毒）感染機(jī)體后，病毒DNA整合到宿主細(xì)胞DNA中可產(chǎn)生內(nèi)源性SAg。如研究發(fā)現(xiàn)的小鼠乳腺病毒（MMTV）、EB病毒都發(fā)現(xiàn)了超抗原成分。

3 T-SAg的特性

T-SAg無(wú)須提呈細(xì)胞處理刺激大量T細(xì)胞激活，產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，并使巨噬細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞激活，同時(shí)也可誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受，這些觀點(diǎn)已知。以下所述是T-SAg一些新的特點(diǎn)。①T-SAg激活大量T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，主要是Th1T輔助細(xì)胞產(chǎn)生的如IL-2、TNF-α、IFN-γ[3]等。但也有些超抗原（如TESS）則誘導(dǎo)Th2細(xì)胞分化。②絕大多數(shù)超抗原有一個(gè)共同的架構(gòu)，也被稱為超抗原樣蛋白（SSL）[4]③CD28是超抗原發(fā)揮生物效應(yīng)必須受體[5]。④T-SAg有各自的方式結(jié)合到MHC和TCR，其約束力顯著的多樣性。如金黃色葡萄球菌腸毒素B（SEB）和C（SEC）的交聯(lián)MHCⅡ類α鏈和T細(xì)胞受體β鏈，金黃色葡萄球菌腸毒素A（SEA）的兩個(gè)α和β-MHCⅡ類結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，以交叉鏈接TCRβ鏈，葡萄球菌腸毒素H（SEH）唯一結(jié)合到TCRα鏈。因此他們以各自的方式結(jié)合到MHC和TCR，導(dǎo)致其約束力各異[6]。其實(shí)，就是人們常說的驟降，驟降更強(qiáng)烈激活T細(xì)胞，企圖破壞免疫系統(tǒng)，保護(hù)超抗原。⑤選擇性識(shí)別TCR鏈V區(qū)。對(duì)通?？乖?MHC分子復(fù)合物，T細(xì)胞特異性識(shí)別涉及TCR的Vα、Jα、Vβ、Jβ片段，而T-SAg僅選擇與TCRβ鏈V片段結(jié)合，且一種T-SAg，常可與數(shù)種Vβ片段結(jié)合。⑥不同T細(xì)胞亞群對(duì)T-SAg 反應(yīng)有差異，再次刺激反應(yīng)不相同。如中毒性休克綜合征毒素（TSST）激活表達(dá)Vβ2的T淋細(xì)胞，葡萄球菌外毒素B（SEB）激活表達(dá)Vβ3、Vβ12、Vβ14、Vβ15、Vβ17、Vβ20 的T淋巴細(xì)胞[1]，而人類T淋巴細(xì)胞總共表達(dá)大約24種主要Vβ成分。又如（SEA）單次刺激，則發(fā)現(xiàn)Vβ3+CD4+和Vβ3+CD8+T細(xì)胞亞群反應(yīng)性相似，若再次刺激，則發(fā)現(xiàn)Vβ3+CD8+T細(xì)胞呈顯著低反應(yīng)[7]。⑦T-SAg與APC表MHCⅡ類分子結(jié)合，但不受MH CⅡ類型別限制。即不論APC與應(yīng)答T細(xì)胞所表達(dá)的MHC是否同型，T細(xì)胞均能接受刺激而增殖。所以內(nèi)源性SAg通過MHC對(duì)抗原交叉提呈實(shí)現(xiàn)生物效應(yīng)。（即內(nèi)源性抗原也能通過MHCⅡ類分子提呈；外源性抗原也能通過MHCI類分子提呈）。⑧新近發(fā)現(xiàn)MHCⅡ類分子并非超抗原體外激活T細(xì)胞所必要。在PMA和某些細(xì)胞因子輔助下， SAg無(wú)須MHCⅡ類分子參與即可以TCRVβ特異性方式激活T細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)為人工合成多肽探尋SAgT細(xì)胞表位提供了理論依據(jù)[8]。⑨嵌合SAg抗體可瓦解SAg誘導(dǎo)T細(xì)胞活化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生[9]。

4 T-SAg引發(fā)機(jī)體免疫效應(yīng)

T-SAg除引發(fā)免疫反應(yīng)（激活體內(nèi)自身反應(yīng)性T細(xì)胞，還可引起自身抗體免疫反應(yīng)）、免疫損傷、自穩(wěn)、耐受及抵制外，還有以下的新的效應(yīng)特點(diǎn)：① 參與修飾樹突狀細(xì)胞增強(qiáng)抗腫瘤作用。T-SAg除刺激T細(xì)胞大量增殖、產(chǎn)生細(xì)胞因子（如TMF-α）殺腫瘤外，還參與腫瘤抗原一起修飾樹突狀細(xì)胞增強(qiáng)殺腫瘤作用[10]。②暴露自身隱蔽抗原。由于T-SAg引起機(jī)體免疫損傷，使自身隱蔽抗原暴露引起“抗原抗體類型”自身免疫性反應(yīng)（非激活體內(nèi)自身反應(yīng)性T細(xì)胞誘發(fā)的自身免疫反應(yīng)）。③能增強(qiáng)一般的免疫反應(yīng)。即能增強(qiáng)外源性抗原與自身抗原有交叉反應(yīng)的一般免疫反應(yīng)，能增強(qiáng)外源抗原引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗原抗體免疫復(fù)合物類免疫反應(yīng)（如急性腎炎）。④可協(xié)同B細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)。T-SAg可在T細(xì)胞TCR-Vβ與B細(xì)胞表面MHCⅡ類分子間發(fā)揮橋聯(lián)作用，從而可激活多克隆B細(xì)胞，產(chǎn)生抗體或自身抗體[8]。⑤超抗原免疫逃避。T-SAg所誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答，并非針對(duì)超抗原自身，而是通過分泌大量細(xì)胞因子參與某些病理過程的發(fā)生和發(fā)展[11]。T-SAg快速激活T細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并分泌大量細(xì)胞因子雖不是對(duì)超抗原本身（甚至破壞免疫系統(tǒng)、企圖保存超抗原），但對(duì)一般抗原（病原體）還是有殺滅作用，因特異性T細(xì)胞激活是通過CD28/B7分子啟動(dòng)第二信號(hào)增強(qiáng)細(xì)胞因子基因表達(dá)、促進(jìn)IL-2合成來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而T-SAg生物效應(yīng)本來(lái)就增加了IL-2。⑥ 導(dǎo)致Th1/Th2失衡引起自身免疫性疾病。T細(xì)胞SAg刺激大量表達(dá)TCR-Vβ序列的T細(xì)胞增殖。得到響應(yīng)是主要炎癥，重點(diǎn)是Th1占優(yōu)勢(shì)（打破Th1/Th2平衡）產(chǎn)生IL-（1.2.6）、TNF-α、IFN-γ和單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP1）等，這些過度不協(xié)調(diào)和釋放因子引起免疫損傷[3]。

5 T-SAg引發(fā)臨床疾病

5.1 川畸病

川畸病常見于5歲以下兒童的多臟器血管炎，是目前兒童后天性心血管疾病的原因。超抗原[2]如中毒性休克綜合征毒素TSST、表皮剝脫性毒素ET、鏈球菌致熱外毒素SPE、熱休克蛋白65、細(xì)菌HSP65、支原體等 可刺激大量表達(dá)TCR-Vβ序列的T細(xì)胞增殖，（而αβ T細(xì)胞主要為CD4+或CD8+。輔助T細(xì)胞為CD4+細(xì)胞。其可分為Th1和Th2細(xì)胞），川畸病急性期外周血T細(xì)胞亞群失衡。CD4增高、CD8降低、CD4/CD8增高[12]。C D4+ T（Th2增高）分泌淋巴因子（IL-1、4、5、6、13）增多，促進(jìn)B細(xì)胞多克隆活化產(chǎn)生IgM、IgA、IgG、IgE升高及自身抗體。CD4+ T（Th1）也分泌IL-2、IFN-γ、LT、TNF等。這些淋巴因子、活介素均可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)和產(chǎn)生新抗原，故引起多臟器血管炎，又IL-1、IL-6、TNF增高尚可誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成急性反應(yīng)性蛋白質(zhì)，如C反應(yīng)蛋白，抗胰蛋白酶等，引起本病發(fā)起反應(yīng)。最近研究顯示川畸病外周血T細(xì)胞凋亡延緩（Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)）。

5.2 毒性彌慢性甲狀腺腫（GD）

近年來(lái)提出GD是感染因子作為超抗原分子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞對(duì)甲狀組織發(fā)生反應(yīng)[13]。SAg刺激大量T細(xì)胞激活，產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，產(chǎn)生針對(duì)甲狀腺抗原抗體。具體CD4+ T細(xì)胞功能明顯增強(qiáng)，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量抗甲狀腺抗體；同時(shí)Th1細(xì)胞功能亢進(jìn)，受到更多CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞參與，再之T-SAg非特異性激活巨噬細(xì)胞分泌的IL-1β誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞表達(dá)FasL增高，與Fas結(jié)合，促使其凋亡。故本病有細(xì)胞免疫與體液免疫兩方面受累。

5.3 幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎（JIA）

JIA發(fā)病是各種感染性微生物的特殊成分作為外來(lái)抗原，作用于遺傳背景的人群，引起免疫應(yīng)答出現(xiàn)自身組織的損害和變性。尤其是某些細(xì)菌、病毒的特殊成分（如HSP）可作為超抗原，一方面直接與TCRVβ結(jié)合而激活T細(xì)胞，激發(fā)免疫損傷[14]，另一方面B細(xì)胞SAg介導(dǎo)的應(yīng)答可擴(kuò)大自身的抗體產(chǎn)生（T-SAg在T細(xì)胞TCR-Vβ與B細(xì)胞表面MHCⅡ類分子間橋聯(lián)，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體；Th1細(xì)胞幫助B細(xì)胞使免疫蛋白轉(zhuǎn)為IgG）。當(dāng)然自身組織變性成分（內(nèi)源性抗原）如變性IgG或變性的膠原蛋白，也引起自身免疫反應(yīng)，進(jìn)一步加重免疫損傷。

5.4 中毒性休克綜合征（TSS）

就是葡萄菌腸毒素類的中毒性休克綜合征毒素（TSST）作為超抗原，大量刺激T細(xì)胞克隆增殖，出現(xiàn)免疫損傷，包括高熱、嘔吐、低血壓、皮膚瘀斑以及多器官功能衰竭等。

5.5 其他自身免疫性疾病

近期研究表明，在條件合適的情況下，超抗原確定可以打破自身反應(yīng)T淋巴細(xì)胞的免疫耐受或抑制狀態(tài)，如上述已提到幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎（略）。還有銀屑病也是一種表皮炎性疾病，主要特征為表皮角質(zhì)過度增生以及炎性滲漏。A族鏈球菌產(chǎn)生的多種超抗原刺激而大量增生的T淋巴細(xì)胞在銀屑病的皮膚損傷中起重要的作用[15]，如SPEA、SPE2C刺激的Vβ+2 T淋巴細(xì)胞及SPE2C刺激的Vβ15 T淋巴細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)表明，超抗原可能引起或惡化銀屑病。胰島素依賴性糖尿?。↖DDM）是由于胰腺β細(xì)胞被自身免疫系統(tǒng)攻擊而導(dǎo)致的。研究發(fā)現(xiàn)自身反應(yīng)性Vβ+7T淋巴細(xì)胞參與了該過程，這一發(fā)現(xiàn)表明超抗原可能是這種疾病的病因之一。最近從胰島素依賴性糖尿病患者中分離到一種內(nèi)源性人類逆轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒可以剌激Vβ+7T淋巴細(xì)胞增殖，因而推測(cè)這種病毒性來(lái)源的超抗原是IDD致病因素之一[1]。

6 治療

6.1 針對(duì)SAg及其生物效應(yīng)治療

①抗SAg抗體可避免SAg生物效應(yīng)引起強(qiáng)烈免疫損傷。國(guó)外究研證實(shí)，嵌合抗金黃色葡萄球腸毒素B和洛伐他汀協(xié)同作用，提供對(duì)SEB致死劑量的體內(nèi)保護(hù)[9]。②阻止將與超抗原結(jié)合的CD28分子是阻止致命性休克的新措施[5]。另金黃色葡萄球菌超抗原誘導(dǎo)的炎癥和中毒性休克的治療下調(diào)制[16]，近來(lái)也引起人們重視。③消除產(chǎn)生SAg的微生物，即用抗生素[2]。④自然產(chǎn)生抗體，有些超抗原刺激B細(xì)胞產(chǎn)生這些抗體可增加這種效果[17]。⑤免疫球蛋白化解特異抗體和防止T細(xì)胞激活[18]。⑥免疫抑制劑防止T細(xì)胞的激活和細(xì)胞因子的釋放，也可運(yùn)用糖皮質(zhì)激素減少炎癥反應(yīng)。

6.2 研究SAg生物效應(yīng)機(jī)制，治療相關(guān)疾病

①根據(jù)超抗原強(qiáng)大的作用機(jī)制，研制超抗原疫苗，將對(duì)由于超抗原引起的疾病的防治提供一種新思路。而研究治療性疫苗的重點(diǎn)方向，即構(gòu)建成分相似而具有不同分子結(jié)構(gòu)的疫苗，或改變抗原的遞呈途徑，從而有可能終止耐受，重建對(duì)抗原的特異性免疫應(yīng)答。由協(xié)合集團(tuán)與國(guó)際專家聯(lián)合研制的“用金黃色葡萄球菌的代謝產(chǎn)物（STAPHY-LOCOCCAL VENTEROTOXIN）治療腫瘤的生產(chǎn)方法”1993年獲得國(guó)家發(fā)明專利，1999年正式被批準(zhǔn)為國(guó)家一類新藥，是世界第一個(gè)用于臨床的超抗原抗癌生物制劑，超級(jí)抗原BM口服液的問世給癌癥患者帶了新的希望。近來(lái)國(guó)外學(xué)者研究雙特異性抗體增加殺腫瘤效果（即一種雙特異性T細(xì)胞連接抗體，是以B細(xì)胞表面抗原CD19和T細(xì)胞受體復(fù)合物CD3的雙重靶向特異的單鏈抗體為基礎(chǔ)，在CD19陽(yáng)性靶細(xì)胞存在的情況下，將細(xì)胞毒性T細(xì)胞定富集到腫瘤處，殺之[19，20]。）所謂雙特異性抗體，其實(shí)很可能是與B細(xì)胞有一定聯(lián)系的抗體-超抗原偶聯(lián)物或其蛋白質(zhì)，也可能為與T-SAg相聯(lián)的雙功能抗體，有待進(jìn)一步探討。② 研究超抗原免疫耐受機(jī)制，終止耐受。就是尋找阻止或逆轉(zhuǎn)免疫耐受的方法，將為臨床治療感染性疾病、自身免疫性疾病和腫瘤提供新的干預(yù)靶點(diǎn)。抗原輔以佐劑易誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，去除負(fù)性調(diào)控細(xì)胞因子，改變抗原提呈。這些均可逆轉(zhuǎn)免疫耐受。③ 國(guó)內(nèi)學(xué)者胡偉綱等報(bào)道抗CD28抗體、佛波酯（PMA）和IL-2具有輔助超抗原活化T細(xì)胞及殺腫瘤作用，且臨床研究有一定效果。

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第7篇：細(xì)胞研究范文

[關(guān)鍵詞]軟骨細(xì)胞；細(xì)胞骨架；細(xì)胞形態(tài)

關(guān)節(jié)軟骨處在一個(gè)具有壓應(yīng)力、張應(yīng)力、流體剪切力等機(jī)械應(yīng)力作用的復(fù)雜力學(xué)環(huán)境中，而機(jī)械應(yīng)力在調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞生物學(xué)行為中具有十分重要的作用，能夠?qū)浌羌?xì)胞新陳代謝進(jìn)行調(diào)控，是保證軟骨基質(zhì)正常狀態(tài)的必要條件。可調(diào)控軟骨細(xì)胞的新陳代謝，是維持正常軟骨基質(zhì)必不可少的條件。關(guān)節(jié)軟骨組織缺乏血液供應(yīng)、細(xì)胞代謝緩慢、自我修復(fù)能力較差，即使較小的軟骨損傷也會(huì)引起嚴(yán)重的后果。我們的前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，中等強(qiáng)度的炮臺(tái)運(yùn)動(dòng)能促進(jìn)大鼠軟骨缺損的修復(fù)重塑，但其作用機(jī)制尚不清楚。

本研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨加載周期性壓應(yīng)力，觀察應(yīng)力下的軟骨細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞骨架的變化，為軟骨細(xì)胞內(nèi)力一生物信號(hào)轉(zhuǎn)化研究提供基礎(chǔ)，為適度應(yīng)力促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)重塑的機(jī)制研究提供依據(jù)。

1.資料與方法

1.1一般資料

主要包括大鼠來(lái)源及所用試劑的來(lái)源。本研究中所用大鼠為7d齡，且身體健康，均由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。主要試劑：鼠抗人Tubulin B單克隆抗體（北京中杉金橋生物進(jìn)口分裝）；Dulbecco改良DMEM/Ham F12混合培養(yǎng)基（HyClone公司）；0.01mol/L磷酸緩沖液PBS（博士德公司）；碘化丙啶（Salarbio公司）；鏈菌蛋白酶（Gibco公司）；胎牛血清（FBS，杭州四季青公司）；番紅（Salarbio公司）；胰蛋白酶（Gibco公司）；雙乙酸熒光素（Salarbio公司）；甲苯胺藍(lán)（Salarbio公司）；4%多聚甲醛（Salarbio公司）；II型膠原酶（Gibco公司）；山羊抗小鼠IgG/FITC思牽ū本猩冀鵯派物進(jìn)口分裝）；I型膠原蛋白裱襯的6孔培養(yǎng)板（Flexercell公司）。

1.2儀器設(shè)備

主要包括四點(diǎn)彎曲加力裝置（四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院研制）；流式細(xì)胞儀（Coulter，美國(guó)）；CO2培養(yǎng)箱（ShelLab，美國(guó)）；倒置熒光顯微鏡（Olympus，日本）；數(shù)碼相機(jī)（Olympus，日本）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

主要包括細(xì)胞培養(yǎng)、染色以及檢測(cè)。

1.3.1軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)及應(yīng)力加載 體外分離大鼠四肢的關(guān)節(jié)軟骨并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)傳至第3代，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）和周期性機(jī)械應(yīng)力組（B組）。A組：在正常條件下培養(yǎng)軟骨細(xì)胞；B組：軟骨細(xì)胞置于周期性機(jī)械應(yīng)力體系中（4000u strain）培養(yǎng)30min，連續(xù)3d。加載應(yīng)力組細(xì)胞卸載后與對(duì)照組細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行以下檢測(cè)。

1.3.2番紅及甲苯胺藍(lán)染色 軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)于柔性的硅膠膜上，選擇PBS進(jìn)行沖洗，并加入0.25%番紅以及1%甲苯胺藍(lán)染液，在室溫條件下，進(jìn)行孵育2h。隨后利用顯微鏡進(jìn)行觀察拍照。番紅染色可以明確氨基葡聚糖合成情況；甲苯胺藍(lán)染色可以明確蛋白多糖合成情況。

1.3.3免疫熒光檢測(cè) 當(dāng)細(xì)胞的80%貼合于蓋玻片后，在超凈的工作臺(tái)上放置一24孔的培養(yǎng)板，并取出貼有細(xì)胞的蓋玻片，使用PBS液進(jìn)行2次清洗，后加入2%的甲醛溶液，進(jìn)行固定。固定后，使用0.5%的Triton液清洗細(xì)胞3次，每次10min。加一抗（sigma公司），在37℃條件下，靜置1h。將蓋玻片置于24孔板上，使用0.5%Triton液進(jìn)行3次清洗，每次10min。后加如異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的二抗（sigma公司），37℃條件下，靜置1h。將蓋玻片置于24孔板，0.5%Triton液進(jìn)行3次清洗，每次10min。將所有蓋玻片放置于24孔板中，使用0.5%Triton液進(jìn)行3次清洗，每次10min，后將清洗液棄去，加入4’，6-二脒基2-苯基吲哚（4’，6diamidino2-phenylindole，DAPI）進(jìn)行染核，在室溫條件下，進(jìn)行5min。后在長(zhǎng)方形的載玻片上低落封片劑，蓋上蓋玻片，并在室溫條件下5min封片。用LCSM（LeicaSPS Germany）觀察并記錄圖像。

1.3.4 RT-PCR檢測(cè)cofilin基因表達(dá) 以TrizolRNA試劑盒提取細(xì)胞總RNA，依據(jù)GenBank上登陸cofilin基因序列，以B-actin作為內(nèi)參照，設(shè)計(jì)引物序列。cofilin正義引物：TGTGGCTGTCTCTGATGGAG，反義引物：3TGTCTGGCAGGATC 3TGAC：B-acfin正義引物：CAC GTA CGT TGC TAT CCAGGC，反義引物：CTC CqT AAT GTC ACG CAC GAT。PCR條件95℃變性4min：95℃變性45s：53℃復(fù)性45s：72℃延伸90s：72℃溫育10min：4℃保存24h。擴(kuò)增結(jié)束后取最終產(chǎn)物10 u L，進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳（含EBO.5ug/mL）。15mA、90V穩(wěn)壓45min，采用kodak電泳凝膠觀察系統(tǒng)EDASl20掃描，分析結(jié)果。

1.3.5Western印跡檢測(cè)cofilin蛋白表達(dá) 選擇實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中貼壁生長(zhǎng)的軟骨細(xì)胞懸浮液，并進(jìn)行蛋白樣品提取，以pierce公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒說明為標(biāo)準(zhǔn)稀釋樣品，進(jìn)行蛋白濃度的檢測(cè)，并選擇5mg/mL的BSA液體將蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解，置于-20℃的環(huán)境下保存。選擇取標(biāo)準(zhǔn)品用PBS 10mL，并將其稀釋為100uL，保證液體的最終濃度為0.5mol/mL。進(jìn)行SDS-PAGE電泳，再完成轉(zhuǎn)膜的過程中加入一抗與二抗，并進(jìn)行ECL發(fā)光。通過掃描儀進(jìn)行掃描，將圖像輸入到Image J軟件中進(jìn)行圖像的定量分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)用（x±s）表示，行配對(duì)t檢驗(yàn)，P

2.結(jié)果

2.1軟骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

體外分離的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24h后開始貼壁，72h后能夠完全貼壁。并且大部分細(xì)胞表現(xiàn)為多邊形，而細(xì)胞核表現(xiàn)為橢圓形或者圓形，能夠清晰的觀察到1～2個(gè)核仁。進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色后，形態(tài)學(xué)觀察可見：大部分聚集于細(xì)胞內(nèi)的呈深藍(lán)色的蛋白多糖。而細(xì)胞核則被染色為深藍(lán)色或者藍(lán)紫色。進(jìn)行番紅染色后，形態(tài)學(xué)觀察可見：大部分呈深紅色的氨基葡聚糖陽(yáng)性物質(zhì)聚集于細(xì)胞內(nèi)。加載組和對(duì)照組無(wú)顯著差別，而應(yīng)力組的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變，并且其取向逐漸趨于相同。見圖1A～D。

2.2微絲的形態(tài)學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞微絲為與細(xì)胞長(zhǎng)軸平行的線狀均勻纖維，排列整齊，呈線狀拉伸，核深染。對(duì)照組軟骨細(xì)胞微絲形態(tài)及分布較散亂，纖維顯稀疏，與對(duì)照組比較核淡然。見圖2A～B。

2.3微管的形態(tài)學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞邊緣平整、銳利，細(xì)胞微管呈網(wǎng)絡(luò)狀分布于各個(gè)細(xì)胞內(nèi)以維持細(xì)胞形態(tài)，在核周可見明顯的斑點(diǎn)狀微管聚集區(qū)。對(duì)照組軟骨細(xì)胞微管熒光強(qiáng)度明顯較弱，邊緣模糊，未見明顯核周聚集區(qū)。見圖2C～D。

2.4中間纖維的形態(tài)學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞中間纖維圍繞細(xì)胞核且從細(xì)胞核到細(xì)胞膜呈遞增的貫穿分布，呈平滑的細(xì)絲狀，成束成網(wǎng)，在細(xì)胞膜周圍分布密集，形成亮帶，中間纖維擴(kuò)展的細(xì)胞外基質(zhì)的部分呈現(xiàn)為亮帶外周的微弱綠色熒光。對(duì)照組軟骨細(xì)胞中間纖維排列紊亂，熒光強(qiáng)度普遍較弱，呈波浪狀圍繞細(xì)胞核分布，個(gè)別細(xì)胞中存在中間纖維的斑塊狀聚集，膜周亮帶較弱或無(wú)，亮帶以外微弱綠色熒光較寬。見圖2E～F。

2.5RT-PCR檢測(cè)cofihn基因表達(dá)

RT-PCR檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞cofilin基因表達(dá)為（1 52±0.12），對(duì)照組為（0.99±0.01），兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=31.123，P=0.000）。見圖3。

2.6Western蛋白印跡檢測(cè)cofifin蛋白表達(dá)

實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞中cofilin蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組軟骨細(xì)胞cofilin蛋白的表達(dá)。見圖4。

3.討論

軟骨在動(dòng)物全身關(guān)節(jié)活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用，其含有特殊的軟骨基質(zhì)，因而能夠承受一定的機(jī)械力而不會(huì)發(fā)生永久變形。同樣，在軟骨的生長(zhǎng)發(fā)育過程中，其形態(tài)和功能的維持及損傷后的修復(fù)也離不開力學(xué)刺激，缺乏力學(xué)刺激會(huì)導(dǎo)致軟骨退行性變。

軟骨細(xì)胞在機(jī)械力的傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)化方面起著舉足輕重的作用。細(xì)胞形態(tài)是細(xì)胞功能的體現(xiàn)形式，是細(xì)增殖分化與凋亡等諸多胞內(nèi)事件的參與者，同時(shí)，細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞所處的力學(xué)環(huán)境密不可分，是細(xì)胞內(nèi)部力平衡的最直觀外在表現(xiàn)，因此，對(duì)軟骨細(xì)胞的形態(tài)研究，是研究機(jī)械應(yīng)力影響軟骨修復(fù)機(jī)制的基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)中在周期性機(jī)械應(yīng)力刺激下，大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞附壁生長(zhǎng)良好，能夠合成有軟骨細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)的粘多糖和氨基葡聚糖，并促進(jìn)軟骨細(xì)胞的規(guī)則排列，說明在軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)過程中，周期性的機(jī)械應(yīng)力具有較為積極的刺激作用。臨床研究證實(shí)，外力施加載荷的頻率、時(shí)間與大小等均是影響軟骨細(xì)胞新陳代謝和生長(zhǎng)的刺激因素。本實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞特殊染色技術(shù)只能定性分析粘多糖及氨基葡聚糖的含量，而無(wú)法從蛋白表達(dá)的基因水平辨別蛋白合成過程中的微小差別。仍然需要更加深刻的定量分析研究，對(duì)基因和蛋白層面進(jìn)行探討，進(jìn)一步闡述周期性機(jī)械應(yīng)力對(duì)軟骨細(xì)胞的刺激作用。

細(xì)胞骨架是維持細(xì)胞形態(tài)的重要部分，同時(shí)在維系軟骨細(xì)胞功能方面也具有十分顯著的作用。細(xì)胞骨架包括微絲、中間z與微管是胞骨架的組成部分，聯(lián)合各種具有不同作用的調(diào)控蛋白共同構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)部蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)體系。細(xì)胞骨架明顯的為力學(xué)信號(hào)發(fā)生轉(zhuǎn)導(dǎo)提供了十分理想化和有效化的途徑。在細(xì)胞受到外界力學(xué)的刺激后，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞骨架發(fā)生重新排列，導(dǎo)致使細(xì)胞內(nèi)應(yīng)力隨之發(fā)生相應(yīng)的重新分布。細(xì)胞骨架的改變不僅會(huì)造成細(xì)胞形態(tài)的變化，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞力學(xué)特征及生物學(xué)特征發(fā)生變化。

微絲是真核細(xì)胞中含量最豐富的一種蛋白復(fù)合體，是細(xì)胞骨架的主要成分之一，是由肌動(dòng)蛋白分子螺旋狀聚合成的纖絲，又稱肌動(dòng)蛋白絲，F(xiàn)-actin是細(xì)胞骨架微絲蛋白的主要成分，與細(xì)胞黏附、吞噬、運(yùn)動(dòng)、分裂等密切相關(guān)。細(xì)胞伸出的絲狀偽足參與細(xì)胞間的通訊并使細(xì)胞具有趨化性，產(chǎn)生細(xì)胞形態(tài)的變化，而成束的微絲對(duì)絲狀偽足起支持作用。壓應(yīng)力作用于軟骨細(xì)胞后，微絲會(huì)出現(xiàn)不同方向的變化，增加細(xì)胞頂-底縱向的微絲張力，但橫向微絲張力未發(fā)生變化。外界刺激到達(dá)閾值后，會(huì)破壞Actin微絲和Vimentin中間纖維聚集以及解聚的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致微絲發(fā)生生物學(xué)降解。應(yīng)力信號(hào)通過細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)傳遞至細(xì)胞內(nèi)激活相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，反饋調(diào)控，使其與組蛋白、DNA相互作用來(lái)調(diào)節(jié)復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程，細(xì)胞骨架發(fā)生重組，使細(xì)胞維持一定的機(jī)械強(qiáng)度適應(yīng)機(jī)械力。

本研究中免疫熒光染色顯示應(yīng)力組較對(duì)照組微絲致密且分布均勻，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，取向趨于一致。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞微管呈網(wǎng)絡(luò)狀分布于各個(gè)細(xì)胞內(nèi)以維持細(xì)胞形態(tài)，在核周可見明顯的斑點(diǎn)狀微管聚集區(qū)。而加載周期性機(jī)械應(yīng)力后的軟骨細(xì)胞中間纖維圍繞細(xì)胞核且從細(xì)胞核到細(xì)胞膜呈遞增的貫穿分布，呈平滑的細(xì)絲狀，成束成網(wǎng)，在細(xì)胞膜周圍分布密集，形成亮帶。這些現(xiàn)象均表明周期性應(yīng)力可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的骨架重排，提高其力學(xué)適應(yīng)性，而細(xì)胞骨架在軟骨細(xì)胞的力學(xué)一生物學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用。

第8篇：細(xì)胞研究范文

【摘要】HSS具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞增生和抑制其分裂增生、引起肝癌細(xì)胞凋亡的雙向作用。HSS可能與多種化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡有協(xié)同作用，并且明顯減輕化療藥物的毒副作用，對(duì)化療性肝損傷具有保護(hù)作用，有可能開創(chuàng)一種細(xì)胞因子與化療藥物相結(jié)合治療肝癌的極具潛力的新療法。

【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞刺激因子；肝癌；凋亡

【中圖分類號(hào)】R735.7【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)02-0016-02

肝臟是生物體內(nèi)一種具有很強(qiáng)再生能力的器官，從中分離純化出具有再生刺激功能的物質(zhì)一直是國(guó)內(nèi)外研究人員關(guān)注的重點(diǎn)。特異性的肝細(xì)胞生長(zhǎng)刺激因子，HGF（血源性）、HSS（肝源性）、ALR（胞源性）在功能機(jī)制方面有許多共同和相似之處，又具有各自獨(dú)特的功能。在臨床上，它們既能啟動(dòng)肝損傷后的再生與修復(fù)，又能抑制某些肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，在肝病治療藥物中占有極其重要的地位。由于HSS特異性地促肝細(xì)胞生長(zhǎng)的活性，參與肝細(xì)胞再生的調(diào)控等，一直是肝炎治療、肝細(xì)胞調(diào)控的研究熱點(diǎn)。而HSS對(duì)肝癌細(xì)胞株的作用各家報(bào)道不一，限制了HSS臨床應(yīng)用。本文就HSS誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展作一綜述。

1HSS研究概況

1975年LaBrecque從初斷乳大鼠和肝部分切除后的再生肝中提取出一種生物活性物質(zhì)，稱為肝細(xì)胞刺激因子(HSS)。它能刺激肝細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)肝細(xì)胞再生和肝細(xì)胞DNA的合成，加速肝臟修復(fù)，保護(hù)肝細(xì)胞的作用。其機(jī)制仍不清楚。國(guó)內(nèi)目前臨床用的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素即屬于HSS類。HSS至今尚未得到純化單一的活性物質(zhì)，其分子結(jié)構(gòu)和DNA序列仍不清楚，但有研究顯示是一類分子量約為12～18kD，帶強(qiáng)負(fù)電荷、微弱疏水的多肽類物質(zhì)的總和。HSS沒有種屬特異性，但有器官特異性：HSS在體內(nèi)對(duì)骨髓、脾臟、腎等器官均不作任何反應(yīng)；在體外，對(duì)8種正常的或惡變的非肝臟起源細(xì)胞株也沒有作用，然而無(wú)論體內(nèi)、外，正常或惡變的肝臟起源的細(xì)胞均能對(duì)HSS產(chǎn)生較強(qiáng)的反應(yīng)。HSS可由胎肝、再生肝中提取得到，但成年鼠肝臟提取物則無(wú)此物質(zhì)。體外翻譯實(shí)驗(yàn)表明，人胎肝細(xì)胞的多聚A-mRNA可以引導(dǎo)人HSS的生物合成，表明HSS是人胎肝組織的基因表達(dá)產(chǎn)物，而不是酶催化加工的結(jié)果。HSS存在乳肝組織或再生肝組織的肝細(xì)胞胞漿中，肝細(xì)胞膜上有相應(yīng)的受體，在非肝細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)HSS。HSS與其他肝再生調(diào)控因子的主要不同之處在于具有耐熱性并僅存在于生長(zhǎng)狀態(tài)的肝臟中。

2HSS誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展

HSS具有較強(qiáng)的抗損傷能力，可能減輕多種因素(病毒、細(xì)菌、化學(xué)毒物、缺血再灌注等)引起的肝細(xì)胞凋亡的發(fā)生[1]，它能刺激肝細(xì)胞DNA合成及肝細(xì)胞再生，并對(duì)肝細(xì)胞具有保護(hù)作用。HSS對(duì)肝癌細(xì)胞的作用各家報(bào)道不一。由于體外實(shí)驗(yàn)證明HSS對(duì)肝癌細(xì)胞株DNA合成也有促進(jìn)作用[2]，因而HSS能否致癌變及能否應(yīng)用于肝癌治療，一直是人們關(guān)心的問題。李茹冰等研究表明，HSS的某些組份在體外尚可抑制肝癌細(xì)胞的增殖活性。大多數(shù)研究認(rèn)為低濃度時(shí)，對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯刺激作用，較高濃度則有明顯抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用[3]。吳國(guó)慶等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[4]HSS對(duì)正常大鼠肝臟細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞呈促進(jìn)增生和抑制其分裂增生、引起自溶和死亡的雙向作用。研究表明[5]，HSS對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)起雙重調(diào)控作用，不但能促進(jìn)肝細(xì)胞DNA合成，同時(shí)還能抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)，預(yù)防黃曲霉素導(dǎo)致的大鼠肝癌前病變。在體外實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞水平證實(shí)[6]，HSS能抑制肝癌細(xì)胞活力，但無(wú)明顯形態(tài)學(xué)損害的表現(xiàn)。有學(xué)者通過瓊脂糖凝膠電泳及流式細(xì)胞檢測(cè)證實(shí)[7]，肝癌細(xì)胞活性的降低系HSS和ADR的作用下發(fā)生細(xì)胞凋亡所致。其他學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)亦得出 HSS對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，且對(duì)肝癌細(xì)胞的凋亡具有促進(jìn)作用[8]。但類似的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)尚需進(jìn)一步證實(shí)?？梢奌SS具有誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用是肯定的。當(dāng)然，肝的再生增殖、凋亡等的調(diào)控并不是由單一因素決定的，HSS作為一種促肝生長(zhǎng)物質(zhì)是不可能完全獨(dú)立發(fā)揮作用的。HSS單獨(dú)對(duì)肝癌細(xì)胞系的凋亡誘導(dǎo)作用很弱，很可能與多種化學(xué)藥物作為促進(jìn)劑共同發(fā)揮作用。

3HSS誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制

自發(fā)現(xiàn)HSS以來(lái)，雖然受到一些學(xué)者的關(guān)注，但HSS對(duì)相同起源的正常和惡性腫瘤細(xì)胞為何表現(xiàn)出相反的作用，其機(jī)制仍不清楚。首都醫(yī)科大學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道[9]，HSS刺激肝細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)理可能是誘導(dǎo)細(xì)胞EGF受體(EGFR)mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，上調(diào)EGFR的數(shù)量，提高EGFR的親和力和磷酸化程度，促使其內(nèi)向化。EGFR具有酪氨酸激酶活性，其活化后可誘導(dǎo)形成包括Ras在內(nèi)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路，最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖[10]。HSS促肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)亦可能通過調(diào)節(jié)EGFR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路所為。戴杰等[2]報(bào)道，HSS系通過調(diào)節(jié)EGFR介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路促肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)。HSS與肝細(xì)胞或肝癌細(xì)胞膜表面的EGFR結(jié)合，促使EGF與受體內(nèi)向化，繼而活化EGFR，后者則作用于膜內(nèi)面的p21ras，引發(fā)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的瀑布效應(yīng)。因此，在基因水平HSS刺激EGF受體表達(dá)，可能是HSS啟動(dòng)肝細(xì)胞再生的關(guān)鍵。

有學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HSS作用后的肝癌細(xì)胞突變型P53蛋白表達(dá)明顯降低，可能是HSS促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的原因之一[8]。HSS對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用與肝癌細(xì)胞EGFR/DNA表達(dá)密切相關(guān)[11]。HSS誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡亦可能是通過作用于細(xì)胞膜上的EGFR而發(fā)揮其生物效應(yīng)的。實(shí)際上EGF于不同細(xì)胞系可分別誘導(dǎo)凋亡及減輕凋亡。HSS與EGFR結(jié)合后引起EGFR構(gòu)象的改變[12]。HSS進(jìn)入細(xì)胞，產(chǎn)生一系列理化反應(yīng)，最終在核內(nèi)啟動(dòng)一些基因的表達(dá)，如p53基因的表達(dá)，進(jìn)一步表現(xiàn)出其效應(yīng)。也有學(xué)者認(rèn)為HSS在促進(jìn)肝細(xì)胞再生的同時(shí)，可能同時(shí)具有促進(jìn)細(xì)胞分化的作用，而肝癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生可能與這種尚未證實(shí)的促分化作用有關(guān)[7]。

4HSS抗化療性肝損傷的作用

HSS通過增強(qiáng)肝細(xì)胞抗氧化能力，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，在一定程度上拮抗CTX、CCl4的肝毒性[13]。HSS能夠阻止化學(xué)毒物或藥物導(dǎo)致的肝細(xì)胞膜流動(dòng)性的降低，能夠有效地維持急性肝損傷后線粒體的通透性[5]，線粒體膜通透性改變可能是細(xì)胞死亡的關(guān)鍵性機(jī)制，改善肝臟線粒體的呼吸功能，因而阻止細(xì)胞死亡。據(jù)報(bào)道，HSS能促進(jìn)肝細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，增強(qiáng)肝細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性，減輕肝細(xì)胞的損傷，提高化療效果，明顯縮小腫瘤病灶，延長(zhǎng)生存期，并能減輕化療引起的嘔吐等消化道反應(yīng)?？梢奌SS作為一種有效的天然的肝細(xì)胞特異性保護(hù)劑應(yīng)用于臨床，可望成為化療性肝損傷有效治療方法之一。

5小結(jié)

肝癌的化療敏感性較差，全身化療反應(yīng)率在20%左右，且肝癌的聯(lián)合化療方案并未顯示出比單一藥物化療更明顯的優(yōu)勢(shì)，相反，聯(lián)合化療不可避免的具有更高的毒性。研究結(jié)果證實(shí)多種化療藥物均有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡成為腫瘤治療的一個(gè)方向。HSS可能與多種化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡有協(xié)同作用，并且明顯減輕化療藥物的毒副作用，對(duì)化療性肝損傷具有保護(hù)作用，應(yīng)用于人體可能發(fā)揮顯著的抗肝癌作用，有可能開創(chuàng)一種細(xì)胞因子與化療藥物相結(jié)合治療肝癌的極具潛力的新療法。

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第9篇：細(xì)胞研究范文

目的探討新生兒細(xì)菌與病毒感染后患兒免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子的影響，以期為新生兒感染治療提供相關(guān)指標(biāo)依據(jù)。方法選取醫(yī)院2014年1月－2015年1月住院新生兒100例，將其隨病原菌不同分為細(xì)菌感染組65例和病毒感染組35例，兩組均給予對(duì)應(yīng)及對(duì)癥治療，并給予人免疫蛋白靜脈滴注，觀察治療前及治療7d兩組患兒免疫細(xì)胞CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋及細(xì)胞因子白介素－4（IL－4）、白介素－17（IL－17）、干擾素－γ（IFN－γ）、NK變化，并于治療3d后評(píng)定治療效果。結(jié)果治療前細(xì)菌感染組CD3＋高于病毒感染組同期，CD4＋低于病毒感染組同期，兩組治療后各項(xiàng)免疫細(xì)胞均高于同組治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），兩組治療后各項(xiàng)免疫細(xì)胞組間對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；細(xì)菌感染組IL－4、NK高于治療后及病毒感染組同期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），IL－17、IFN－γ與同組治療后及對(duì)照組同期對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)3d治療，細(xì)菌感染組總有效率100．0％，高于對(duì)照組71．4％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論新生兒細(xì)菌或病毒感染后，均可降低機(jī)體CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋水平，促進(jìn)IL－4、NK水平增高，適時(shí)給予人體免疫蛋白，有提高細(xì)胞免疫功能，提高治療效果，且有可能降低新生兒感染發(fā)生。

關(guān)鍵詞：

新生兒感染；病原體；免疫細(xì)胞；細(xì)胞因子

新生兒免疫功能尚不健全，防御機(jī)制不成熟，受環(huán)境、生殖道污染等影響，易引發(fā)感染性疾?。?］。相關(guān)文獻(xiàn)顯示［2］，新生兒感染已成為繼新生兒黃疸、新生兒窒息外，新生兒死亡重要原因。為降低新生兒感染發(fā)生率，特對(duì)醫(yī)院收治不同病原體感染患兒免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1．1臨床資料

收集醫(yī)院2014年1月－2015年1月住院新生兒100例，所有患兒均出生30d內(nèi)，經(jīng)臨床檢查確診為新生兒感染，符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。排除新生兒免疫缺陷疾病、食物不耐受、先天性疾病、混合感染及對(duì)本研究藥物過敏患兒。隨病原菌不同分為細(xì)菌感染組65例和病毒感染組35例，兩組患兒性別、出生日齡、出生孕齡等對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性，見表1。

1．2研究方法

1．2．1治療方法

新生兒感染后，據(jù)患兒臨床癥狀、血常規(guī)等給予抗感染、抗病毒藥物及對(duì)癥治療。并積極完善各項(xiàng)檢查，取分泌物、痰液等進(jìn)行致病菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，據(jù)藥敏結(jié)果給予針對(duì)性治療。兩組均給予人免疫球蛋白（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S10970081；廠家：上海生物制品研究所有限責(zé)任公司；10％3ml／支），以5％葡萄糖注射液100ml稀釋400mg／kg后靜脈滴注，7d為1療程。

1．2．2檢測(cè)方法

兩組患兒均于治療前及治療7d抽取空腹肘靜脈血2ml置于肝素鈉抗凝一次性試管內(nèi)送檢，血液標(biāo)本采集及送檢均由同組護(hù)理人員完成。細(xì)胞因子檢測(cè)采用流式細(xì)胞檢測(cè)儀進(jìn)行，稀釋、混勻、離心、洗滌等，均嚴(yán)格按操作說明進(jìn)行。免疫細(xì)胞檢驗(yàn)采用美國(guó)生產(chǎn)免疫散射速率比濁儀檢測(cè)，試劑為美國(guó)Beckman－Coulter公司生產(chǎn)配套試劑，并計(jì)算CD4＋／CD8＋值。

1．3觀察指標(biāo)

詳細(xì)記錄兩組患兒臨床癥狀改善情況，治療前、治療7d兩組患兒免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子水平，以確定不同病原體對(duì)患兒免疫功能影響，及人免疫蛋白對(duì)患兒免疫功能影響。免疫細(xì)胞包括CD3＋、CD4＋、CD8＋及CD4＋／CD8＋；細(xì)胞因子包括：白介素－4（IL－4）、白介素－17（IL－17）、干擾素－γ（IFN－γ）、NK。

1．4評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

據(jù)患兒臨床癥狀及體征評(píng)定，治療3d患兒咳嗽、腹瀉等臨床癥狀及體征完全消失，尿量恢復(fù)正常，心音正常為有效；治療3d后，患兒癥狀及體征較治療前好轉(zhuǎn)，但仍有輕微臨床癥狀，尿量偏少為顯效；治療3d后，患兒臨床癥狀及體征均無(wú)改善或加重，伴有少尿或無(wú)尿，心音低頓為無(wú)效［4］?？傆行В接行В@效。

1．5統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS18．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子指標(biāo)資料以（珚x±s）表示行t檢驗(yàn)，治療效果對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2．1兩組患兒治療前后免疫細(xì)胞比較

治療前細(xì)菌感染組CD3＋高于病毒感染組同期，CD4＋低于病毒感染組同期，兩組治療后各項(xiàng)免疫細(xì)胞均高于同組治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見表2。

2．2兩組患兒治療前后細(xì)胞因子比較

兩組治療前IL－4、NK對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），兩組治療前IL－17、IFN－γ對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，細(xì)菌感染組治療后IL－4、NK對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），病毒感染組治療后各項(xiàng)細(xì)胞因子與治療前對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

2．3兩組患兒治療效果比較

經(jīng)3d治療，細(xì)菌感染組總有效率100．0％，高于對(duì)照組71．4％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見表4。

3討論

新生兒免疫功能不成熟，防御機(jī)制不健全，受外界病原體侵襲后，易引發(fā)感染，且起病隱匿，發(fā)展迅速，重癥者可形成敗血癥、肝腎功能衰竭等，嚴(yán)重危害患兒生命健康［5］。相關(guān)文獻(xiàn)顯示［6］，全世界每年約有300萬(wàn)以上新生兒死于感染。目前臨床尚無(wú)有效預(yù)防新生兒感染有效方法，僅在新生兒感染發(fā)生后或預(yù)防性給予抗感染及對(duì)癥治療，雖可發(fā)揮一定治療效果，但也會(huì)產(chǎn)生一定不良反應(yīng)，如應(yīng)用抗生素治療后，易損害機(jī)體正常菌群，甚至引發(fā)真菌感染，延長(zhǎng)治療時(shí)間，增加患兒家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［7］。新生兒出生3個(gè)月內(nèi)免疫力主要來(lái)源于母體獲得IgG，隨著母體獲得IgG水平逐漸下降，自身合成功能發(fā)育不完全，防御機(jī)制不健全，故分娩后3個(gè)月內(nèi)是新生兒感染高發(fā)期［8］。臨床較多學(xué)者將著眼點(diǎn)側(cè)重于新生兒感染的治療，但缺乏相關(guān)數(shù)據(jù)支持，并不能為臨床治療提供有力證據(jù)，甚至可能暫時(shí)緩解癥狀，影響臨床治療［9］。故筆者認(rèn)為，監(jiān)測(cè)新生兒免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子變化，及時(shí)給予調(diào)整，有可能成為預(yù)防新生兒感染發(fā)生，提高新生兒感染治療效果，降低新生兒感染病死率新方法，然何種致病菌可對(duì)新生兒免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子影響、影響程度，尚無(wú)統(tǒng)一定論。人體細(xì)胞免疫系統(tǒng)主要為T淋巴細(xì)胞，包括CD3＋、CD4＋、CD8＋等，其中CD3＋水平代表外周成熟T淋巴細(xì)胞水平，CD4＋代表淋巴因子水平，CD8＋代表免疫抑制情況［10］。CD4＋與CD8＋是機(jī)體免疫細(xì)胞核心系統(tǒng)，且相互抑制、調(diào)節(jié)，保持機(jī)體免疫功能處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，CD4＋／CD8＋越高，免疫功能越好，反之則降低，免疫功能紊亂［11］。且T淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生特定細(xì)胞因子，包括IL－4、IL－17、IFN－γ、NK等，共同調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，維持機(jī)體免疫功能平衡，特別是IL－17在腸道炎癥中具有誘導(dǎo)腸道上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞釋放促炎因子及趨化因子作用，以緩解臨床癥狀［12］。

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