有核細胞計數(shù)精選(九篇)

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第1篇：有核細胞計數(shù)范文

免疫組化S-P法檢測ARMET的表達,免疫熒光雙標染色檢測ARMET和CHOP的表達,PI染色觀察對細胞凋亡的影響。結果 氯化釓處理組細胞數(shù)目減少,胞體變小變圓;ARMET在氯化釓組(5×10-6mol/L)的陽性細胞百分數(shù)為(42.1±6.6)%,在正常對照組的陽性率為(6.1±1.6)%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);免疫熒光雙標染色提示氯化釓組ARMET和CHOP均高表達;PI染色可見氯化釓組細胞被深染、胞核斷裂等凋亡特征。結論 氯化釓可誘導大鼠腹腔巨噬細胞內質網應激和凋亡,其作用機制可能與胞內鈣超載引起的非折疊蛋白反應有關。

【關鍵詞】 氯化釓;巨噬細胞;內質網應激;凋亡

Study of endoplasmic reticulum stress and apoptosis of peritoneal macrophage in ratinduced by Gadolinium chloride

HUANG Xue-gui, ZHAO Jun.Hefei Women and Children Health Center, Hefei230000, China

【Abstract】 Objective To investigate the effect of endoplasmic reticulum stress and apoptosis of peritoneal macrophage in rat induced by Gadolinium chloride. Methods Rat peritoneal macrophage(PMΦ) were isolated and cultured. After PMΦ treated with Gadolinium chloride and Tunicamycin, the expression of ARMET was determined by immunohistochemical method, immunoflurorescent double staining were employed to detect the expression of CHOP and ARMET, PI stain was used to observe PMΦs apoptosis. Results The amount of cells were greatly reduced and the cell body were shrinked to round in GdCl3group. The percentage of cell ARMET positive-expressed were (42.1±6.6)% in GdCl3group(5×10-6 mol/L), while the value of control group were(6.1±1.6)%, the difference between the two groups was significant(P

【Key words】 Gadolinium chloride; Macrophage; ER stress; Apoptosis

作者單位:23000合肥市婦幼保健院

釓(Gd)是屬鑭系的一種稀有元素,它主要以GdCl3的形式存在。GdCl3具有抑制肝臟Kuffer細胞吞噬、分泌功能的作用,因此被作為工具藥廣泛用于研究單核/巨噬細胞系統(tǒng)在多種病理過程中的發(fā)病機制[1]。其可通過抑制巨噬細胞的活化減少炎癥介質(TNFα、IL-1β、IL-6等)的產生,阻止炎性反應的發(fā)生、發(fā)展。至于GdCl3如何作用于巨噬細胞,未見有文獻報道。本文以大鼠腹腔巨噬細胞(PMΦ)為研究對象,分別用GdCl3和陽性對照藥衣霉素(Tunicamycin)處理,采用免疫組織化學、免疫熒光雙標染色及碘化丙啶(PI)染色等方法,探討GdCl3對巨噬細胞內質網應激和凋亡的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SD大鼠8只(SPF級),,8周齡,體質量180～200 g,安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供(皖實動物準字第01號)。

1.1.2 主要儀器 REVCO ELITE Ⅱ型CO2培養(yǎng)箱(美國Asheville NC)、IX-71熒光倒置顯微鏡(日本Olympous公司)、SW-CJ-2FD超凈工作臺(蘇州凈化)、TDL-5Z臺式離心機(湖南星科)、BL-2200H型電子分析天平(日本島津)、TS-A型水平搖床(金壇國勝實驗儀器廠)、SHP-160B型數(shù)顯生化培養(yǎng)箱(江蘇金壇宏凱儀器廠)。

1.1.3 藥物與試劑 氯化釓(GdCl3.6H2O),分子量371.7,Sigma公司。DMEM完全培養(yǎng)基,Gibco公司產品。皂角素(saponin),上海生工公司。牛血清白蛋白(BSA),Roche公司。DAB試劑盒,北京中杉金橋公司,批號080402。兔抗ARMET多克隆抗體、鼠抗CD68單克隆抗體,英國AbD Serotec公司。鼠抗CHOP單克隆抗體,美國Santa Cruz公司。DAPI試劑、PI、Tunicamycin均為美國sigma公司產品。

1.2 方法

1.2.1 大鼠腹腔巨噬細胞(PMΦ)的分離培養(yǎng)[2]將SD大鼠斷頭處死后,置入75%乙醇溶液中浸泡消毒5 min,打開腹腔灌注冷的PBS液15 ml,用手親揉腹部2 min,用無菌移液管吸出腹腔洗液,于4℃、離心(1500 r/min×10 min),棄上清;再用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液重懸細胞,進行細胞計數(shù);調細胞濃度為1×109/L,加入用多聚賴氨酸包被的24孔板中,1 ml/孔,置5%CO2、37℃培養(yǎng)箱內貼壁2 h后,棄去上清,再用PBS輕洗2次,加入DMEM繼續(xù)培養(yǎng)。

1.1.2 PMΦ給藥方案 將PMΦ培養(yǎng)至第7 d,細胞融合達到80%時進行給藥處理。試驗分為正常對照組、GdCl3組、Tunicamycin組。①正常對照組:分為兩組,每組細胞分別加入與② 、③組等量的生理鹽水與DMSO溶媒。②GdCl3組:精密稱取GdCl3.6H2O晶體7.9 mg溶于生理鹽水,充分溶解后過濾除菌,得5×10-3M的母液,取母液4 μl加入4 ml DMEM中,混勻后換液,每孔加1 ml,培養(yǎng)24 h后處理。③Tunicamycin組:取用DMSO配制的2.5 mg/ml的母液用DMEM按1:1000稀釋,每孔加1 ml,培養(yǎng)4 h后處理。以上各組均設四個復孔。

1.2.3 細胞免疫化學 PBS搖洗10 min×2次,用預冷的4%多聚甲醛4℃固定30 min, 再用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS,4℃封閉30 min。每孔滴加一抗(ARMET,1:20,用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS稀釋)100 μl,4℃孵育過夜。次日PBS洗后滴加帶HRP標記的豬抗兔二抗(1:100)37℃孵育1 h,DAB顯色,蘇木素復染,鹽酸酒精分色,藍化,滴加DAPI染核, PBS洗10 min×2次后, 熒光顯微鏡下觀察,攝像。

1.2.4 免疫化學陽性細胞計數(shù) 在DAB顯色的細胞組織化學玻片上,用高倍鏡(×400)每孔隨機取五個視野計數(shù)陽性細胞,每組按四孔計數(shù),求出陽性細胞的百分數(shù),并以(x±s)表示。

1.2.5 細胞免疫熒光雙標染色 PBS搖洗10 min×2次,用預冷的4%多聚甲醛4℃固定30 min, 再用含0.1% BSA+0.1%皂角素的PBS,4℃封閉30 min。滴加兩種一抗,4℃孵育過夜。次日用PBS洗后滴加1:500稀釋的兩種熒光標記二抗,37℃避光孵育1 h。用PBS洗10 min×2次后,滴加DAPI液(5 μg/ml)室溫避光顯色5 min后,熒光顯微鏡下觀察,攝像。

1.2.6 PI染色 每孔加入PI染液(5 μg/ml),孵育過夜。次日PBS搖洗10 min×3次,熒光顯微鏡下觀察,攝像。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析,計量資料以x±s表示,組間數(shù)據(jù)的顯著性檢驗采用單因素方差分析,P

2 結果

2.1 光鏡下觀察細胞形態(tài)學變化 倒置顯微鏡下觀察,對照組細胞形態(tài)正常,生長良好,可見較多的梭形細胞。而GdCl3組細胞數(shù)目減少,胞體變小變圓。Tunicamycin組也類似。見圖1。

圖1 不同處理后腹腔巨噬細胞的形態(tài)

A:正常對照組;B:GdCl3組;C:Tunicamycin組×100

2.2 ARMET在不同處理腹腔巨噬細胞的表達 ARMET是一分泌性胞漿蛋白,其陽性表達為棕黃色或棕褐色,見圖2。ARRET在GdCl3組的陽性率為42.1%(123/292),在正常對照組的陽性率為5.8%(21/360),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),見圖3。為了進一步說明ARMET在不同處理組細胞的表達情況,采用了免疫熒光雙標染色法,以鼠抗CD68單克隆抗體鑒定PMΦ,可見GdCl3組紅色熒光較強,對照組幾乎無熒光。見圖4。

圖2 ARMET在不同處理腹腔巨噬細胞的表達

A:正常對照組;B:GdCl3組;C:Tunicamycin組DAB×400

圖3 腹腔巨噬細胞表達ARMET的陽性率(x±s,n=20)

圖4 ARMET在不同處理組腹腔巨噬細胞的表達

A、E、I:核染料DAPI(藍);B、F、J:抗CD68抗體免疫反應陽性細胞(綠);

C、G、K:抗ARMET抗體免疫反應陽性細胞(紅);D、H、L:疊加后的圖像。 ×400

2.3 CHOP在不同處理組腹腔巨噬細胞的表達CHOP是一個核轉錄調節(jié)因子,又稱凋亡誘導蛋白,它是內質網應激的標志物。CHOP主要位于胞漿,在正常情況下,CHOP的表達量很少,但應急可誘導其激活并大量表達[3]。從圖5可以看出,GdCl3組細胞的胞漿CHOP有表達,跟對照組相比,紅色熒光較強。

圖5 CHOP在不同處理組腹腔巨噬細胞的表達

A、E、I:核染料DAPI(藍);B、F、J:抗CD68抗體免疫反應陽性細胞(綠);C、G、K:抗CHOP抗體免疫反應陽性細胞(紅);D、H、L:疊加后的圖像。 ×400

2.4 PI染色結果 PI是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而將細胞核紅染。從圖6可知,跟對照組相比,GdCl3組細胞被深度紅染,部分胞核短裂呈分葉,碎片狀,且多邊集。

圖6 不同處理組腹腔巨噬細胞的PI染色

A:正常對照組;B:GdCl3組;C:Tunicamycin組×400

3 討論

內質網(ER)是分泌性蛋白在細胞內進行折疊、修飾和組裝的場所[4],蛋白質的這些加工過程是其功能成熟所必需的[5]。在內質網中,一旦聚集的非折疊蛋白超過內質網的負荷能力,就會引起ER 應激[6]。ER應激可以上調精氨酸富含蛋白ARMET的表達。同時,ER 應激激活了非折疊蛋白反應(unfolded protein response,UPR)來緩解內質網的壓力,但長期嚴重的內質網應激則會導致細胞凋亡及死亡。

能引起ER應激的因素很多,如基因突變或機體的狀態(tài)改變包括鈣平衡失調、氧化應激、缺血、營養(yǎng)不足、感染等[7,8]。GdCl3作為鈣敏感通道激動劑可通過G蛋白-PLC-IP3信號轉導途徑,引起肌漿網內鈣釋放增加,導致細胞內攝入的鈣增加而引發(fā)鈣超載[9]。進而引發(fā)ER應激與UPR導致細胞凋亡。此外,內質網鈣的流出引起胞漿Ca2+濃度的升高,后者通過凈流入可快速增加線粒體鈣,線粒體多余的Ca2+通過滲透性轉移誘導細胞凋亡[10]。至于氯化釓誘導大鼠腹腔巨噬細胞內質網應激和凋亡的具體機制,還有待進一步研究。

參 考 文 獻

[1] Lee YG, Lee SH,Lee SM.Role of Kuffer cells in cold/warm ischemia reperfusion injury of rat liver. Arch Pharm Res,2003,23(6):620-625.

[2] 姚航平, 張立煌, 冷建杭. 白細胞介素18重組腺病毒對小鼠腹腔巨噬細胞免疫功能的影響.

浙江大學學報(醫(yī)學版), 2001, 30(5): 248-251.

[3] Ron D, Habener J F. CHOP, a novel developmentally regulated nuclear protein that dimerizes with transcription factors C/EBP and LAP and functions as a dominant-negative inhibitor of gene transcription. Genes Dev, 1992,6(3): 439-453.

[4] Voeltz G K, Rolls M M, Rapoport T A. Structural organization of the endoplasmic reticulum. EMBO Rep, 2002, 3(10):944-950.

[5] Hampton R Y. ER-associated degradation in protein quality control and cellular regulation. Curr Opin Cell Biol, 2002,14(4): 476-482.

[6] Rutkowski D T. A trip to the ER: coping with stress. Trends Cell Biol, 2004, 14(1):20-28.

[7] Liu CY, et al.Structure and intermolecular interactions of the luminal dimerization domain of human IRE1 alpha. J Biol Chem 2003, 278(20):17680-17687.

[8] Kadowaki H, et al. Survival and apoptosis signals in ER stress: the role of protein kinases. J Chem Neuroanat,2004, 28(1-2):93-100.

第2篇：有核細胞計數(shù)范文

作者：藥志勝

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作者：李健

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第3篇：有核細胞計數(shù)范文

由于本人剛剛接任教導處主任工作，工作經驗足等種種原因，致使本次活動存在了一定的瑕疵，在此對各位做課老師深表歉意。

本次活動中，一共有18位教師參加了匯報課。應該說這18節(jié)課都很精彩，每位教師都有不同的教學風格?；顒又忻课蛔稣n老師都經過精心的準備，都付出了很多，如：王克相老師在為每位老師制作、尋找課件的同時還要備好自己的課，講好自己的課；胡俊森老師在準備自己課的同時，還要為大家服好務，布置好上課場地；范興華老師在家中拿來了鉗子、剪子等等做為教具，讓學生掌握所學知識在生活中的應用。本次活動最讓我感動的是逄世華老師，她自己花錢制作了教具，可以說既使她取得了一等獎，獎金還遠遠不能達到制作教具費用，但逄老師這種精神，這種奉獻精神，這種為教育教學的奉獻精神，值得我們在座的每一位教師去學習。其他老師也都還有很多很多的閃光之處，在此我就不一一贅述。

本次活動中授課教師對課程標準有了更深的理解，對教學目標、教學重點難點、教學策略等環(huán)節(jié)的設計與組合都有科學的把握，而且基本都能熟練的運用多種電教手段進行輔助教學，教師的基本素質已經大大提高。

本次評課，我們是就課評課。也就是說，我們評的是這一節(jié)課，這節(jié)課既不代表過去，也不代表將來。所以我肯請各位教師正確對待評獎結果。有問題可以找我交流。

下面我從以下幾點進行總結：

一、 注重倡導自主、合作、探究的學習方式。

學習方式的改革是本次基礎教育改革的重要目標。改變學習方式，實際上是改變一種習慣，當務之急在于建立教學新理念，即由過去的傳授式學習變?yōu)樽灾?、合作、探究式學習。在這一方面，各位參加匯報課的老師都在力求體現(xiàn)這一理念。趙涇戈老師的四邊形的教學過程的設計：四邊形——長方形—正方形——長方形、正方形的區(qū)別—說說生活中四邊形—動手實踐，層次清楚結構合理，充分發(fā)揮了學生的主動性。特別是“學生根據(jù)自己的方法為四邊形分組”這一個環(huán)節(jié)，讓學生通過自己已有的經驗來解決問題，培養(yǎng)學生的獨立性和自主性，引導學生質疑調查、探究，在實踐中學習 ，促進學生在教師指導下主動地、富有個性地學習。金正文老師

讓學生讀第二——第四節(jié)提出“出現(xiàn)了哪些你熟悉的人和事？”通過生生交流，拓展了學生學習空間，擴大了學生的知識面。范興華老師在教學中能充分運用“合作學習”這一學習方式，分組協(xié)作，實驗總結杠桿的作用，根據(jù)自己組中伙伴們掛砝碼的個數(shù)與力臂的長短，在小組中討論杠桿如何用省力、費力、不省力也不費力，然后再以小組的形式匯報果，培養(yǎng)了團體合作的精神。

二、 注重雙邊互動，關注每一個學生。

教學過程是師生交往、積極互動、共同發(fā)展的過程，在這一過程中必須體現(xiàn)尊敬、熱愛、理解、幫助學生的理念。新的課程標準倡導師生平等交往的教學行為，這有助于建立人道的、和諧的、民主的、平等的師生關系。要關注每一個學生，使廣大的學生在課堂上都能得到訓練。劉麗梅老師在課堂中這樣評價學生“跟小書法家寫得一樣、你寫得真漂亮”，給孩子以鼓勵。崔嫦娟在課中說到老師當組長，你們當組員，拉近了師生的關系，這些都體現(xiàn)了“尊重、熱愛學生”的理念。張麗娟老師的〈認識立體圖形〉教學中，質疑問難，“我們把相同形狀的物體分在了一起，它們都叫什么名字？你到書中去找一找?！卑l(fā)揮教師“組織者、引導者”的作用，進入學習新課的環(huán)節(jié)。

三、注重切合學生實際。

課程標準要求教學必須符合學生身心發(fā)展的特點，適應學生的認知水平，密切聯(lián)系學生的經驗世界和想象世界。這充分體現(xiàn)了“以人的發(fā)展為本”的新的課程理念。聶秀娟老師的行為藝術中設計的小熊與小狗在公園的情境劇，教育幼兒在生活中“不亂扔垃圾”；王麗娟的〈觀察物體〉，從學生已有的生活經驗出發(fā)，讓孩子們從不同方位觀察物體，說說在不同的方位能看到物體的幾個面。這些環(huán)節(jié)的設計，與學生的生活聯(lián)系緊密，學生做起來、說起來不難，卻有助于突破難點。曾會君老師利用猜禮包的形式，激發(fā)學生的學習興趣，鞏固加深對單詞的識記。范興隆老師在提問題之前說：誰來回答老師的問題，老師保證你一定回答得上，來鼓勵學生，激發(fā)學生的學習興趣等等。

三、 注重學生個性發(fā)展，培養(yǎng)求異思維。

〈基礎教育課程改革綱要（試行）〉明確要求：“注重培養(yǎng)學生的獨立性和自主性，引導學生質疑調查、探究，在實踐中學習 ，促進學生在教師指導下主動地、富有個性地學習。教師應尊重學生地人格，關注個體差異，滿足不同學生的學習需要，創(chuàng)設能引導學生主動參與的教育環(huán)境，激發(fā)學生的學習積極性，培養(yǎng)學生掌握和運用知識的態(tài)度和能力，使每個學生都能得到充分的發(fā)展?！边@次活動中，老師們的這一理念的貫徹是一亮點。崔嫦娟老師在識字教學中，如何記住“問”字時，利用猜字謎、換偏旁等方法去記字。鼓勵學生動腦，充分發(fā)揮個性，從不同角度去記字；胡玉花的教學環(huán)節(jié)中，利用三角板能畫出多少度的角，讓學生想，并動手實踐，學生歸納出利用三角板可以畫出十個不同角度的角。

當然，在活動中，老師們的精彩表現(xiàn)何止這些？每一位老師都有各自的長處，不可能一一評述。18節(jié)課都

很精彩。這次匯報課活動的課堂教學評價量分表，是由進修學校新制定出來的。根據(jù)課改動向，我們教師的教學方式必須加以調整。我們這些上課教師的素質都很不錯，怎樣把課上得更好，更受學生歡迎？本著共同學習，共同進步的原則，把本次活動中我認為的不足總結如下，望各位批評指正交流。

1、教學環(huán)節(jié)過于飽滿。為了能讓聽課的評委和老師有個完整的課的印象，設計的課的內容太多，致使出現(xiàn)為了趕課而沒能充分發(fā)揮學生的能動性，老師吃力，學生也沒調動起來，整堂課就見老師在講。

2、老師講的比重過多。傳統(tǒng)的“問教法”的痕跡太重，而生與生之間的對話太少。某些能引導學生去發(fā)現(xiàn)去總結的地方，老師也包辦代替了。

3、合作學習沒有得到廣泛運用。現(xiàn)在的一個重要的教學手段就是合作學習，這也是新課標極力倡導的“自主、合作、探究”的學習方式中重要的一環(huán)。

4、教師的角色并沒有從根本上得到改變。教師要注意的是，在教學過程中，教師是組織者，是引導者，是參與者和評價者，要把自己定位在是學生學習的伙伴、朋友的位置。這樣，上課時，老師們和學生的交流自然而然的就輕松愉快了很多，課堂氣氛活起來了，學生動起來了。在這樣的氛圍中更讓學生愉快的學，主動的學。

第4篇：有核細胞計數(shù)范文

論文關鍵詞：再生水管道,管材設計選優(yōu),內外壁防腐鋼管,鋼筒混凝土管,玻璃鋼夾砂管

0引言

包頭市河西電廠始建于2005年，屬燃煤火力發(fā)電廠。電廠水源由包鋼污水處理中心處理后的再生水供給，是包鋼集團支援市屬企業(yè)，推動包頭市節(jié)約黃河水、合理利用污水再生資源的舉措。包鋼污水處理中心提供給包頭市河西電廠再生水量為3000m/h，敷設1條管徑為DN900，長度為8900m的再生水管道。

由于再生水處理主體工藝屬混凝、沉淀、過濾和殺菌滅藻，對污水中含鹽成分沒有去除作用，因此再生水腐蝕的因子較多。加之，從包鋼污水處理中心輸送到河西電廠的再生水管道要穿越包蘭鐵路兩處、較長的鐵路棧場一處，穿越公路一處、昆都侖河一處以及大片的耕地。穿越昆都侖河處需要降水施工。按照包鋼已有輸水管道敷設在河流和耕地處多年的實踐證實，采用鋼筋混凝土管道抗震能力差，包頭市屬地震8度設防區(qū)，在1996年5月3日地震時，此類管道接口有些漏水。但是采用鋼管，管外壁有腐蝕穿孔的現(xiàn)象。另外，在日常運行中，若發(fā)生管道破裂，搶修的混凝土管道施工困難，影響搶修時間。

眾所周知，對于熱力電廠，有效供水量是電廠的生命線。為了確保敷設管道供水安全可靠，施工、維護方便，事故時搶修便捷，投資經濟合理，技術先進實用，管道選材尤為重要。我們經過設計選優(yōu)，進行經濟技術綜合指標的評價，選用玻璃鋼夾砂管道，多年的運行證實，效果很好。該工程于2007年被評為包鋼優(yōu)秀工程設計三等獎。

1再生水輸水管道的基本情況

包鋼污水處理中心的再生水處理基本工藝為：包鋼廠區(qū)合流污水→格柵→預沉→沉淀→過濾→加氯殺菌滅藻→送給用水戶。

包鋼污水處理中心處理水量為8000m/h，其中5000m/h回用到包鋼廠區(qū)，3000m/h送給河西電廠。處理后水質指標如表1

表1再生水水質指標

項目

SS（mg/L）

pH

暫硬（dH ）

總硬（dh ）

油（mg/L）

Cl （mg/L）

SO （mg/L）

數(shù)值

≤20

7.8~8.4

≤14

≤28

≤5

第5篇：有核細胞計數(shù)范文

［摘要］ 目的 評價蛋白酶抑制劑烏司他丁（ulinary trypsin inhibitor，UTI）對原位肝移植術（orthotopic liver transplantation，OLT）中血漿促炎性細胞因子和氧自由基代謝水平的。 將20例擇期行OLT手術患者隨機分為兩組。UTI組（U組，n=10）：切皮后將UTI 30萬u加入100ml生理鹽水，持續(xù)靜脈輸注1h，然后每4h重復1次。對照組（C組，n=10）：以等容量生理鹽水代替。分別于麻醉后切皮前（T0）、無肝前期120min（T1）、無肝期30min（T2）、新肝期5min（T3）、新肝期60min（T4）和術畢（T5）抽取靜脈血測定血漿IL-6、IL-8、TNF-α和丙二醛（MDA）濃度，以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。術中連續(xù)監(jiān)測心輸出量、混合靜脈血氧飽和度、中心溫度、ECG、CVP、PETCO2、SpO2、橈動脈壓、肺動脈壓。維持中心溫度不低于35.5℃。結果 T0時組間血漿IL-6、IL-8、TNF-α、MDA和SOD水平差異均無顯著性（P＞0.05）。與T0比較，兩組血漿IL-6、IL-8從T2～T5各時間點均升高（P＜0.01）；兩組血漿TNF-α從T1～T5各時間點均升高（P＜0.05或0.01）；兩組血漿MDA從T3～T5各時間點均升高（P＜0.05或0.01）；C組血漿SOD從T3～T5各時間點降低（P＜0.01）；U組血漿SOD僅在T3時降低（P＜0.05）。與C組比較，U組血漿IL-6、IL-8水平在T2～T5各時間點降低（P＜0.05或0.01），TNF-α和MDA水平在T3～T5各時間點降低（P＜0.05或0.01），SOD水平在T3～T5各時間點升高（P＜0.05）。結論 UTI可抑制OLT導致的全身性炎性反應，減少自由基的產生。

［關鍵詞］ 蛋白酶抑制劑；肝移植；促炎性細胞因子；氧自由基

Effects of ulinastatin on proinflammatory cytokines and oxygen free radicals during orthotopic liver transplantation

FENG Guo-hui，LEI Zhi-li，YU Peng，et al.Department of Anesthesia，General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 100039，China

［Abstract］ Objective To evaluate the effects of ulinastatin on proinflammatory cytokines and oxygen free radical during orthotopic liver transplantation(OLT).Methods Twenty ASA Ⅲ～Ⅳ patients with end-stage liver diseases，undergoing OLT were randomly pided into two groups.Ulinastatin group received intravenous infusion of ulinastatin 3×105IU in 100ml normal saline after skin incision and every 4 hours thereafter(n=10).Control group received same amount of normal saline instead of ulinastatin(n=10).Blood samples were taken before skin incision(T0)，120min after skin incision(T1)，30min after liver was removed(T2)，5min (T3) and 60min (T4) after reperfusion of the graft and at the end of operation (T5)for determination of plasma IL-6，IL-8，TNF-α，MDA concentration and SOD activity.After anesthesia induced，cardiac output，mixed venous oxygen saturation and central venous temperature were continuously monitored during operation.ECG，CVP，SpO2，PETCO2，radial artery and MPAP were also continuously monitored during operation.PETCO2 was maintained at (35～40)mmHg during operation.Blood temperature was maintained above 35.5℃ during operation.Results Two group plasma IL-6 and IL-8 concentrations were significantly increased from T2 to T5 as compared with the baseline values(P＜0.05)，whereas plasma levels of TNF-α were significantly increased from T1 to T5 and compared with in the group C plasma TNF-α，IL-6 and IL-8 concentrations were significantly decreased.Two group plasma MDA did not change significantly before and during anhepatic phase but were significantly increased during reperfusion of the graft and at the end of surgery as compared with the baseline values(P＜0.01).Plasma MDA concentrations were significantly decreased in the group U compared with in the group C.SOD activity decreased from T3 to T5 in group C compared with the T0(P＜0.01).In group U SOD activity decreased at T3 compared with the T0(P＜0.05).but SOD activity in group U are higher than those in group C from T3 to T5 phase(P＜0.05).Conclusion Ulinastatin inhibits release of proinflammatory cytokines and reduces production of oxygen free radicals during OLT.

［Key words］ ulinary trypsin inhibitor;liver transplantation;cytokines;oxygen free radicals

烏司他?。╱linary trypsin inhibitor，UTI）是從男性尿中分離純化的尿胰蛋白酶抑制劑，新近的發(fā)現(xiàn)它可以抑制體外循環(huán)引起的炎性因子釋放［1］。UTI是否可以改善原位肝移植術（orthotopic liver transplantation，OLT）圍術期炎性反應尚無定論。本研究擬觀察UTI對OLT術中血漿促炎性細胞因子和氧自由基代謝的影響。1 資料與方法

1.1 一般資料 擇期行OLT患者20例，ASA Ⅲ或Ⅳ級。見表1

1.2 方法 隨機分為兩組，UTI組（U組，n=10）：切皮后將UTI（廣東天普制藥有限公司，批號02050104）30萬IU加入100ml生理鹽水，持續(xù)靜脈輸注1h，之后每隔4h重復使用；對照組（C組，n=10）：以等容量生理鹽水代替。

表1 兩組患者一般資料比較 （x±s）

兩組麻醉誘導采用咪唑安定0.05～0.1mg/kg、依托咪酯0.3mg/kg、芬太尼5μg/kg、維庫溴銨0.1mg/kg靜脈注射；吸入異氟醚，酌情追加芬太尼和維庫溴銨維持麻醉和肌松。所有患者均行經典非轉流術式，術中吸入純氧，呼氣末二氧化碳分壓維持在35～45mmHg（1kPa=7.5mmHg），麻醉誘導后經右側頸內靜脈或鎖骨下靜脈置入Swan-Ganz導管，使用Baxter Vigilance連續(xù)心輸出量測定儀連續(xù)測定心輸出量，混合靜脈血氧飽和度及中心靜脈血溫，監(jiān)測心電圖、中心靜脈壓、脈搏血氧飽和度、橈動脈壓、肺動脈壓。將加溫毯置于患者下肢及背側，輸液通路及加溫輸液裝置相連，維持血溫不低于35.5℃。

分別于麻醉后切皮前（T0）、無肝前期120min（T1）、無肝期30min（T2）、新肝期5min（T3）、60min（T4）和術畢（T5）抽取靜脈血測定血漿IL-6、IL-8、TNF-α（放射免疫法）和丙二醛（MDA）濃度（硫代巴比妥酸比色法），以及超氧化物歧化酶（SOD）活性（黃嘌呤氧化酶法），標準試劑盒由北京?？其J生物技術中心提供。

1.3 統(tǒng)計學方法 2004版CHISS軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用雙因素方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結果

第6篇：有核細胞計數(shù)范文

[關鍵詞] 馬爾康柴胡； 柴胡； AMDIS； 保留指數(shù)； 揮發(fā)油； 定性； 相對含量

柴胡為常用中藥，除《中國藥典》2010年版收載的2個來源（傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡B. scorzonerifolium Willd.的干燥根）外[1]，柴胡屬20余種植物在我國不同地區(qū)作為柴胡地區(qū)習用品入藥[2]。

馬爾康柴胡B. malconense的干燥全草是《四川省中藥材標準》2010年版收載的地方習用品“竹葉柴胡”的來源之一[3]，產自四川阿壩州，主要為野生，因其價格低廉，使用廣泛，用量較大。馬爾康柴胡與藥典收載柴胡不僅品種不同，且藥用部位亦不同，但所載功能與主治卻和藥典收載柴胡基本一致，其科學性有待驗證。

柴胡揮發(fā)油是其疏散退熱作用的主要活性成分[4]。本文采用擬自動質譜退卷積定性系統(tǒng)（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指數(shù)分析方法，對馬爾康柴胡地上、地下部分的揮發(fā)油成分與北柴胡進行比較研究，為馬爾康柴胡是否具有柴胡治療感冒發(fā)熱的物質基礎，且其地上、地下部分是否可同等入藥提供科學依據(jù)。

1 材料

Agilent 7890A/5975C GC-MS 氣相色譜質譜聯(lián)用儀，色譜柱HP-5MS 5% Penyl Methyl Siloxane（0.25 mm×30 m，0.25 μm），質譜圖匹配的譜庫 NIST08 MS database，匹配一化學工作站MSD ChemStation E. 02.01.1177，AMDIS（美國安捷倫公司）。正己烷、無水硫酸鈉為分析純，C8-C20系列正構烷烴標準溶液（mixture no. 04070）購于Fluka Chemika。

馬爾康柴胡藥材由作者采自四川省阿壩州汶川縣，北柴胡購自成都市北京同仁堂藥店，經成都中醫(yī)藥大學衛(wèi)瑩芳教授鑒定前者為馬爾康柴胡B. malconense的全草，后者為柴胡B. chinense的干燥根。

2 方法

2.1 揮發(fā)油提取方法 取藥材粉末（過2號篩）各50 g，置于1 000 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水300～500 mL，浸泡2 h。隨后安裝揮發(fā)油提取器，加熱回流6 h，得淡黃棕色澄明油狀液體，靜止1 h，后讀數(shù)（mL）。加入2 mL正己烷稀釋后，轉移出來。加入適量無水硫酸鈉，于5 ℃靜置24 h脫水。將脫水后的揮發(fā)油裝于螺口小瓶密閉，于5 ℃保存，以備測定。

2.2 GC-MS測定方法 色譜條件：初始溫度40 ℃，保持3 min，以8 ℃?min-1的速率升至120 ℃，以2 ℃?min-1的速率升至200 ℃，以6 ℃?min-1的速率升至260 ℃，保持3 min。載氣為He，流速1 mL?min-1。分流比20∶1，進樣量1 μL。進樣口溫度280 ℃，溶劑延遲4.00 min。質譜條件：電離方式EI源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，掃描范圍50～400，掃描速度2.11 s?dec-1。測定北柴胡（根）與馬爾康柴胡地下、地上部分的總離子流譜圖（TIC），見圖1～3。

3 數(shù)據(jù)分析方法

3.1 重疊峰拆分 中藥揮發(fā)油成分復雜，應用GC-MS分析揮發(fā)油得到的TIC圖譜中存在大量的重疊峰。工作站軟件中帶有AMDIS，它基于模型峰的算法，把性狀與保留值完全相同的碎片峰重新組合，去掉其他的干擾峰，進而構建一張比較“純凈”的譜圖[5]。這種提純譜圖的功能，可以有效的拆分重疊峰，進而準確的對化合物定性。

選擇某一段TIC譜圖，運行AMDIS，可初步得出這段TIC中化合物數(shù)目，對應各化合物特征碎片峰可將重疊峰進行分離。然后對相應掃描點的提純譜圖與圖譜庫對應的匹配化合物進行比對、分析，確定其結構[6]。

舉例說明，見圖4，由圖4-a可見，通過運行AMDIS的run命令后，18.51～18.73 min有7個化合物；選擇18.560 min處對應化合物的“純化”譜圖（4-b）后，再運行“go to NIST MS program”；給出的最佳匹配物是caryophyllene即β-石竹烯（4-c），匹配概率達91.6%。然而選擇該時間點的原始圖譜直接與圖譜庫進行比對，最佳匹配物仍是caryophyllene，但匹配概率僅為56.4%。表明“純化”質譜圖剔除了相應的干擾峰，對原始圖譜進行了拆分純化。

3.2 保留指數(shù)的測定 一些化合物的質譜極相似，可以高匹配度匹配的化合物不止一種。僅靠質譜圖的匹配，難以對化合物準確定性。根據(jù)Van den Dool于1963年提出的用于計算機程序升溫保留指數(shù)ITP的計算公式[7]。

ITP=100n+100[式中T代表保留溫度，x表示待分析的成分，n和n+1分別代表待分析化合物前后2個相鄰正構烷烴的碳原子數(shù)。

相同實驗條件下，測定C8-C20系列正構烷烴標準溶液的TIC譜圖見圖5。

計算本實驗條件下待鑒定化合物的保留指數(shù)ITP，見表1，與質譜匹配度高的幾種化合物文獻記載的保留指數(shù)I進行比對，將偏差較大的匹配化合物排除，選擇保留指數(shù)較為一致的（偏差不超過3%），為化合物的準確定性提供依據(jù)。

4 結果

采用水蒸氣蒸餾法提取北柴胡（根）、馬爾康柴胡地下與地上部分的揮發(fā)油，得率分別為0.20%，0.15%，0.1%。采用GC-MS聯(lián)用技術，對化合物進行定性，并采用面積歸一化法，得出各化合物的相對百分比含量，見表2。

5 結論與討論

柴胡揮發(fā)油中以萜類及其氧化物為主。從北柴胡鑒定出50種化合物，含量占揮發(fā)油總量的74.82%；從馬爾康柴胡地下部分鑒定出47種，占57.06%，地上部分鑒定出45種，占66.69%。

馬爾康柴胡與北柴胡揮發(fā)油成分種類有一定相似性。馬爾康柴胡地上部分與北柴胡共有成分33種，占其已鑒定化合物種類的73%；馬爾康柴胡地下部分與北柴胡共有成分為44種，占其已鑒定化合物種類的94%，地下部分揮發(fā)油種類與北柴胡具有更高的相似性。

馬爾康柴胡與北柴胡揮發(fā)油主要成分種類及相對含量有較大差異。北柴胡揮發(fā)油中相對含量較高的主要為月桂醛（9.060%）、乙酸十二烯基酯（5.426%）、氧化石竹烯（4.591%）、草烯-1，6-二烯醇（4.451%）、斯巴醇（4.356%）等；馬爾康柴胡地下部分主要含鐮葉芹醇（17.736%）、2-正戊基呋喃（3.991%）、氧化石竹烯（2.457%）、月桂醛（2.197%）等，地上部分主要含氧化石竹烯（15.693%）、斯巴醇（6.059%）、β-石竹烯（5.243%）、草烯-1，6-二烯醇（2.979%）等。

石竹烯及其氧化物與柴胡療效相關，是抗炎鎮(zhèn)痛及香味的主要活性成分[8]。馬爾康柴胡地上、地下部分均有較高含量的氧化石竹烯，且主要揮發(fā)油成分種類與北柴胡有較好一致性，提示馬爾康柴胡全草作為地區(qū)習用品，用于感冒發(fā)熱等，具有一定科學依據(jù)。但馬爾康柴胡地上、地下部分揮發(fā)油成分存在較大差異，兩者非共有成分達28個，約占該物種揮發(fā)油化合物總數(shù)的50%，其整體療效還需進行系統(tǒng)藥效學研究。

[參考文獻]

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Study on composition of essential oil in above-ground and root of

Bupleurum malconense and root of B. chinense by

AMDIS and retention index

YAN Jie， WEI Ying-fang*， Gu Rui

（The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Crude Drug，

Pharmacy School， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， China）

[Abstract] Chemical constituents of the essential oil in above-ground and root of Bupleurum malconense and root of B. chinense were investigated by GC-MS compiled with automated mass spectral deconvolution and identification system（AMDIS） and retention index. The results showd that the components of essential oil in B. malconense have some similarities with the one in B. chinense， and both of them have the higher content of caryophyllene oxide which is an active component of anti-inflammatory and analgesic. These results suggested that as a local substitute， B. malconense has a certain scientific basis of the treatment for cold fever.

第7篇：有核細胞計數(shù)范文

關鍵詞：SysmexXS-500i血液分析儀；人工鏡檢；檢測；異型淋巴細胞

傳染性單核細胞增多癥及病毒感染是由于外周血中出現(xiàn)異型淋巴細胞，臨床上常采用血涂片染色人工分類計數(shù)的方法計數(shù)其比例[1]。隨著檢驗技術的發(fā)展，SysmexXS-500i血液分析儀因其診斷準確率高，具有異型淋巴細胞提示功能，在臨床上被廣泛的運用。為此，本文特將兩種檢測技術的結果進行對比分析，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2011年4月～2014年5月進行異性淋巴細胞計數(shù)的標本150例，其中，以單核細胞型為主的標本有50例，以幼稚型細胞為主的標本有60例，以漿細胞型為主的標本有40例。

1.2方法 儀器及試劑：SysmexXS-500i血液分析儀；顯微鏡；乙二胺四乙酸二甲；血樣采集采用硅化管抗凝。

檢驗方法：①人工鏡檢檢測：將患者標本制成厚薄均一、體尾分明的涂片，采用瑞士-吉姆薩染液染色后，在顯微鏡觀察下，選擇體、尾處的血膜，計數(shù)100個白細胞。②SysmexXS-500i全自動血液分析儀檢測：人工分類計數(shù)異型淋巴細胞計數(shù)大于20%的標本20份，人工異型淋巴細胞計數(shù)大于10%，小于20%的標本30份，人工異型淋巴細胞計數(shù)大于0%，小于10%的標本40份，人工異型淋巴細胞計數(shù)為0%的標本為60份。將人工分類的異型淋巴細胞送至SysmexXS-500i全自動血液分析儀檢測，記錄各標本的異型淋巴細胞提示信息。

1.3觀察指標 觀察SysmexXS-500i全自動血液分析儀與人工鏡檢的的檢測符合率。

1.4統(tǒng)計學處理 SysmexXS-500i全自動血液分析儀與人工鏡檢的各項觀察指標情況采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計處理。檢測符合率采用？字2檢驗，以P

2結果

人工鏡檢結果：異型淋巴細胞計數(shù)大于20%的標本10份，符合率為50.00%，異型淋巴細胞計數(shù)大于10%，小于20%的標本15份，符合率為50.00%，異型淋巴細胞計數(shù)大于0%，小于10%的標本28份，符合率為70.00%，異型淋巴細胞計數(shù)為0%的標本為40份，符合率為66.67%。

SysmexXS-500i全自動血液分析儀檢測結果：異型淋巴細胞計數(shù)大于20%的標本18份，符合率為90.00%，異型淋巴細胞計數(shù)大于10%，小于20%的標本29份，符合率為96.67%，異型淋巴細胞計數(shù)大于0%，小于10%的標本39份，符合率為97.50%，異型淋巴細胞計數(shù)為0%的標本有57份，符合率為95.00%。

由此可知，SysmexXS-500i全自動血液分析儀檢測符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢的總符合率（P

3討論

異型淋巴細胞主要是由于病毒與B淋巴細胞受體結合形成，在不斷的復制及增殖過程中，被T淋巴細胞識別，從而激發(fā)T細胞的增殖及轉化，出現(xiàn)在循環(huán)血液中，形成細胞毒性效應，主要以T細胞及B細胞為主[2]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，異型淋巴細胞與EB病毒感染有關，EB病毒的囊膜主要由感染的細胞核膜組成，核膜上有識別淋巴細胞上的EB病毒受體，EB病毒導致的傳染性細胞增多癥中的異型淋巴細胞顯著增多。根據(jù)異型淋巴細胞與病毒的關系，臨床檢驗中應加強異型淋巴細胞的檢查。在檢測過程中，應采用最新的檢查技術，提高異型淋巴細胞的檢測率，確保傳染性單核細胞增多癥的及時確診，及時治療[3]。SysmexXS-500i自動化血液分析儀主要采用半導體激光照射分析技術，結合核酸染色技術，當半導體激光照射被檢測細胞時，細胞內容物被側向散射光反映出來，細胞體積被前向散射光反映出來，其中，側向散射光被主要反映細胞內的DNA與RNA的含量，通過細胞產生的信號對異型淋巴細胞計數(shù)[4]。正常淋巴細胞的特點為體積小、顆粒少，在前向散射光及側向散射光的二維三點圖上表現(xiàn)為低前向散射光及側向散射光。由于EB病毒的刺激，異型淋巴細胞表現(xiàn)為體積大、顆粒少等特點，在SysmexXS-500i自動化血液分析儀檢測中，表現(xiàn)為高前向散射光、低側向散射光，在正常的淋巴細胞上形成一個淋巴細胞群，并表現(xiàn)為向上拖尾的形狀[5]。測定異型淋巴細胞比傳染性單核細胞多了一個指標，但是由于異型淋巴細胞的形態(tài)具有多樣性，大淋巴細胞的診斷難度較大，采用人工鏡檢技術會存在一定的誤差。而SysmexXS-500i全自動化血液分析儀，可通過利用前向散射光及側向散射光這一特性，為區(qū)分淋巴細胞提供了指標[6]。

綜上情況可知，SysmexXS-500i全自動化血液分析儀檢測符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢的總符合率（P

總而言之，SysmexXS-500i全自動化血液分析儀檢測異型淋巴細胞總符合率明顯優(yōu)于人工鏡檢，可將檢測結果及時反饋至臨床，為臨床治療提供依據(jù)。

參考文獻：

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第8篇：有核細胞計數(shù)范文

【關鍵詞】血小板計數(shù)；自動分析；鏡檢

【中圖分類號】R-0 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）02-0350-02

血小板計數(shù)是診斷血液疾病和患者出凝血時間的重要資料，其結果決定診斷的正確性以及醫(yī)生的治療方案。目前血小板計數(shù)廣泛采用血細胞分析儀進行檢驗，主要是通過電阻抗法和光學法進行原理進行檢測，但對于其計數(shù)結果可能存在不準確，為此，我們對同一標本分別用鏡檢、血細胞分析儀法兩種方法進行檢驗，對檢驗結果進行比較分析，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料：2012年10-11月間，昆華醫(yī)院門診化驗室患者的PLT檢驗標本100份，患者年齡1-85歲，平均年齡45歲；男38例，女62例。

1.2 標本留置方法：檢查當日早晨空腹，用EDTA-K2抗凝管抽取靜脈血2ml，上下顛倒混勻10-15次，室溫放置。標本留置后1h內完成PLT計數(shù)檢測。

1.3.1備與試劑；雙目鏡顯微鏡、血小板計數(shù)板；雅培五分類血細胞分析儀，血細胞分析儀的配套試劑。

1.3.2 試驗方法：血細胞分析儀按照損傷流程，每天進行質量控制，用專用校準品進行儀器校正。按照檢測流程對同一標本用雅培五分類血細胞分析儀單獨完成全血細胞計數(shù)。鏡檢法PLT計數(shù)前對血細胞計數(shù)板進行校正，由兩名相關工作人員按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》獨立完成PLT計數(shù)取兩人平均值為檢驗結果。

1.4 統(tǒng)計學方法：均所有數(shù)據(jù)輸入SPSS12.0進行統(tǒng)計分析，用配對樣本和t檢驗，以p

2 結果

3 討論

雅培CD-3200血細胞分析儀的原理為電阻抗法，PLT與紅細胞同時進入計數(shù)池計數(shù)，根據(jù)各種細胞不同電阻來分類白細胞計數(shù)。健康人紅細胞體積與血小板體積有明顯差異，可以通過電阻準確區(qū)分二者。我們的惡觀察結果也發(fā)現(xiàn)，當血小板在著呢工廠范圍內時，雅培CD-3200血細胞分析儀對血小板計數(shù)結果與鏡檢結果差異無統(tǒng)計學意義。而病理情況下，當標本中有小紅細胞或大血小板等血細胞時，血小板與紅細胞之間有重疊，血液中可產生一些大小與血小板相似的非血小板顆粒，如紅細胞碎片、小紅細胞、真菌、細菌和免疫復合物等，電阻法可能將其分為血小板，而將大血小板誤認為紅細胞[1]。導致計數(shù)結果不準確，我們的觀察結果也發(fā)現(xiàn)，當鏡檢血小板計數(shù)300x109/L組計數(shù)低于鏡檢計數(shù)，差異有統(tǒng)計學意義。提示我們用雅培CD-3200血細胞分析儀進行血細胞分析時，對異常報道結果就進行手工復核，以免出現(xiàn)誤差，影響患者診斷與治療。

綜上所述，雅培CD-3200血細胞分析儀符合臨床對血常規(guī)檢驗需要，可以提高檢驗效率，縮短檢驗時間，減輕勞動負荷，但對儀器提示血細胞分布異常的標本，需要采取鏡檢的方法進行復核，以免出現(xiàn)計數(shù)誤差。

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第9篇：有核細胞計數(shù)范文

[關鍵詞] 臨床觀察；沙利度胺；原發(fā)性骨髓纖維化；骨髓形態(tài)

[中圖分類號] R551.3 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2016）09-131-03

[Abstract] Objective To explore and analyze the clinical effect observation of thalidomide on treating the bone marrow morphology of primary myelofibrosis. Methods 60 patients with primary myelofibrosis in clinical from August 2007 to May 2010 in our hospital were divided into control group and observation group according to random number table method，30 cases in each group.The whole patients received hydroxyurea treatment，and the observation group also received thalidomide therapy.After 6 months' treatment of the two groups，the index change levels of the size of spleen，size of liver， platelet count，hemoglobin count， white blood cell count etc in before and after treatment were compared among the two groups.In the observation group，the myelogram changes of on admission， after 1 year's treatment，after 3 years' treatment and after 5 years' treatment were evaluated. Results After treatment，in the two groups，the index change levels of the size of spleen，size of liver，platelet count，hemoglobin count，white blood cell count etc all improved，but those index change levels of the observation group were significantly better than those of the control group，the differences had statistical significance （P

[Key words] Clinical observation；Thalidomide；Primary myelofibrosis；Bone marrow morphology

原發(fā)性骨髓纖維化屬于骨髓增殖性腫瘤，是造血干細胞的克隆性疾病，與原發(fā)性血小板增多癥、真性紅細胞增多癥、慢性粒細胞白血病等并列[1]。原發(fā)性骨髓纖維化存在肝脾腫大，可見淚滴樣紅血細胞，臨床特征為髓外造血、骨髓纖維組織增生、貧血。大量研究表明，沙利度胺治療原發(fā)性骨髓纖維化觀察骨髓形態(tài)發(fā)現(xiàn)沙利度胺可作用于巨核細胞，可顯著改善患者的臨床狀態(tài)，臨床效果確切[2]。探析原發(fā)性骨髓纖維化應用沙利度胺治療對骨髓形態(tài)改變的影響及臨床效果十分重要，故臨床選擇2007年8月～ 2010年5月本院收治的原發(fā)性骨髓纖維化患者進行沙利度胺治療，效果滿意，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

臨床選擇2007年8月～2010年5月本院收治的原發(fā)性骨髓纖維化患者60例，其中男39例，女21例，年齡25～64歲，平均（53.6±2.5）歲，納入標準：符合中華醫(yī)學會血液疾病科學會制定的原發(fā)性骨髓纖維化的診斷標準[3]，經骨髓病理活檢、骨髓細胞學、外周血涂片等檢查確診。全部患者均知情同意，自愿參加本研究，經醫(yī)學倫理委員會通過。骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）12例，斑狀增生期（中間期）24例，骨髓纖維化期（MF期）24例；觀察組中男19例，女11例，患者年齡25～65歲，平均（52.6±2.4）歲，骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）6例，斑狀增生期（中間期）12例，骨髓纖維化期（MF期）12例，對照組中男20例，女10例，年齡25～64歲，平均年齡（53.5±2.5）歲，骨髓病理分期：骨-骨髓硬化期（OMS期）6例，斑狀增生期（中間期）12例，骨髓纖維化期（MF期）12例，兩組患者上述資料年齡、性別、病理分期等差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

對照組予以羥基脲療法，服用1.0～3.0g/d羥基脲，觀察組在此基礎上予以沙利度胺療法與羥基脲聯(lián)合療法，即服用沙利度胺50mg/次，3次/d；服用1.0～3.0/d羥基脲，兩組均治療半年，比較兩組治療前后的脾臟大小、肝臟大小、血小板計數(shù)、血紅蛋白計數(shù)、白細胞計數(shù)等指標變化水平；局部麻醉髂后上棘，予以骨髓活檢針應用一步法取得骨髓標本，Bouin液固定，乙醇梯度脫水后包埋，制成3um切片進行HGF染色，評估觀察組的入院時骨髓象、治療1年后骨髓象、治療3年后骨髓象、治療5年后骨髓象變化。

1.3 藥物

藥物沙利度胺片（常州制藥廠，H32026129）；羥基脲片（北京賽科藥業(yè)有限責任公司，H11020100）。

1.4 觀察指標評估標準[4]

正常脾臟大小：長10～12cm；血小板計數(shù)：（100～300）×109/L；血紅蛋白：成年男性120～150g/L；正常女性110～150g/L；白細胞計數(shù)：（4.0～10.0）×109/L。

1.5 統(tǒng)計學處理

分析全部數(shù)據(jù)進行SPSS19.0軟件系統(tǒng)處理分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗，P

2 結果

2.1 兩組治療前后各項臨床指標的評估比較

兩組治療后的脾臟大小、血小板計數(shù)、血紅蛋白計數(shù)、白細胞計數(shù)等指標變化水平均有改善，但觀察組治療后的脾臟大小、血小板計數(shù)、血紅蛋白計數(shù)、白細胞計數(shù)等指標變化水平顯著優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P

2.2 觀察組患者骨髓象變化

觀察組患者入院時骨髓象、治療1年后骨髓象、治療3年后骨髓象、治療5年后骨髓象變化：入院時患者骨髓組織、髂后上嵴造血組織均被纖維組織替代，為骨-骨髓硬化期；治療1年患者主要為纖維組織增生，骨髓增生減少，為骨-骨髓硬化期；治療3年患者紅系細胞增生，骨髓增生增多，主要為中、晚幼紅細胞增生，多核巨核細胞明顯增多，為中間期；治療5年患者骨髓增生活躍，少數(shù)造血主質內主要為粒細胞增生，均有各階段粒細胞，主要為成熟粒細胞增生，顯示漿細胞和嗜酸粒細胞；各階段均見紅系細胞，分布形態(tài)均正常，巨核細胞呈多形性改變，數(shù)目顯著增多，主要為多分葉核巨核細胞增多，病理分期：骨髓纖維化期，見圖1。

3 討論

正常骨髓成熟巨核細胞通常在小梁間區(qū)間隙內單個散在分布，且不會出現(xiàn)集聚現(xiàn)象，也不會相互密接，低倍視野內正常值為8～15個/單位，但原發(fā)性骨髓纖維化患者中骨髓巨核細胞的異常在整個疾病的發(fā)生、進展中均可見，原發(fā)性骨髓纖維化患者的MF期多種骨髓造血祖細胞數(shù)目升高，尤其以巨核系細胞為主[5-6]；中間期巨核細胞系多形性更加明顯，巨核細胞的數(shù)目顯著上升；OMS期骨髓廣泛骨硬化及纖維化，巨核細胞仍增多[7-8]。原發(fā)性骨髓纖維化患者早期無明顯網狀纖維或膠原纖維增生，常表現(xiàn)為血小板明顯增多，極易漏診，需進行早期骨髓形態(tài)觀察，骨髓涂片可清晰觀察細胞形態(tài)，是評估粒、紅兩系病態(tài)造血的最佳指標，骨髓印片是對骨髓切片造血功能的初步反饋，不受骨髓稀釋的影響，可觀察巨核細胞簇和巨核細胞的完整形態(tài)。

本研究探析原發(fā)性骨髓纖維化患者應用沙利度胺療法對骨髓形態(tài)的觀察，結果顯示：入院時患者骨髓組織、髂后上嵴造血組織均被纖維組織替代，為骨-骨髓硬化期；治療1年患者主要為纖維組織增生，骨髓增生減少，為骨-骨髓硬化期；治療3年患者紅系細胞增生，骨髓增生增多，主要為中、晚幼紅細胞增生，多核巨核細胞明顯增多，為中間期；治療5年患者骨髓增生活躍，少數(shù)造血主質內主要為粒細胞增生，均有各階段粒細胞，主要為成熟粒細胞增生，顯示漿細胞和嗜酸粒細胞；各階段均見紅系細胞，分布形態(tài)均正常，巨核細胞呈多形性改變，數(shù)目顯著增多，主要為多分葉核巨核細胞增多，病理分期：骨髓纖維化期，與劉潔等[9]的研究結果大體一致；正常骨髓中的成熟細胞進入外周血液循環(huán)前必須快速通過巨核細胞的分界膜系統(tǒng)[10-11]；而在原發(fā)性骨髓纖維化中，多形核中性粒細胞被陷入巨核細胞的分界膜系統(tǒng)，這種假扣押導致中性粒細胞的破壞及凋亡，在巨核細胞內相互作用或出現(xiàn)病理共生現(xiàn)象[12-13]，導致巨核細胞內P選擇素分布異常，進而破壞巨核細胞貯存器[14]，血小板轉化生長因子及衍生生長因子釋放入骨髓微環(huán)境，激活成纖維細胞，進而出現(xiàn)骨髓纖維化[15-16]。沙利度胺的作用機理為調節(jié)免疫、免疫抑制作用，可對溶酶體膜進行穩(wěn)定，對中性粒細胞的趨化性進行抑制，出現(xiàn)抗炎功能，同時具有5-羥色胺、組胺、抗前列腺素作用[17-18]。

綜上所述，沙利度胺治療原發(fā)性骨髓纖維化可作用于巨核細胞，可顯著改善患者的臨床狀態(tài)，臨床效果確切，值得臨床推廣。

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